科普：各类新冠病原与抗体的原理及检测方法，您知道吗？
3月15日，国家卫健委发布了《新型冠状病毒肺炎方案（试行第九版）》，其中提到“在核酸检测发现病例的基础上，增加抗原检测的方法”。检测对于应对新冠疫情至关重要。目前，检测新冠病毒感染的方法有三种，包括核酸检测、抗原检测和抗体检测。今天，小编向您科普一下新冠病毒病原与抗体的检测原理及操作方法。
新冠抗原检测
抗原快速检测可用于2周内出现症状的诊断为急性感染的病人。其操作简单、出结果快、成本低。尽管检测下限为每毫升105-106基因组拷贝，但病毒载量低于每毫升106基因组拷贝的个体不可能传播病毒，因此可快速识别最有可能传播病毒的感染者。几乎所有的抗原测试都使用新冠病毒核衣壳蛋白作为靶标，因此受变异株影响的可能性较小。检测方式为胶体金免疫层析、乳胶法、荧光免疫层析三种类型。
胶体金免疫层析
原理：胶体金是由氯金酸(HAuCl4)在还原剂如白磷、抗坏血酸、枸橼酸钠、鞣酸等作用下，聚合成一定大小的金颗粒，在静电的作用下成为稳定的胶体状态，形成带负电的疏水胶溶液。胶体金在弱碱环境下带负电荷，可与蛋白质分子的正电荷基团形成牢固的结合。
检测流程：
1、取样。打开试剂盒包装，取出拭子取样。
2、稀释样本。将拭子放入稀释液当中，挤压拭子头数次，充分溶解样本。
3、检测。取出测试卡，平放在桌面，滴3滴样本到加样孔。
4、观察。计时15分钟后观察结果。
阴性样本
阳性样本-右侧
乳胶法
原理：乳胶法和胶体金法的标记物不同，乳胶法是以乳胶颗粒作为载体的间接凝集试验。吸附可溶性抗原在其表面，特异性抗体与之结合后，可产生凝集反应。
检测流程与胶体金免疫层析法类似。此方法特点在于不需使用特殊仪器，肉眼即可判断，并且操作简便、检测时间短。
荧光免疫层析
原理：检测靶标为病毒蛋白（如核衣壳或刺突蛋白），通常采集鼻咽拭子。
检测方法：需要手持式荧光免疫分析仪。检测人员使用咽拭子取样，之后将咽拭子插入提取管，旋转10次，挤压并抽出拭子，使液体尽可能留在管内，盖上滴头。依次向各检测卡加样孔滴加3滴提取物，静置15分钟，将检测卡插入仪器检测口，填写样本信息或扫描信息，点击快速测试按钮，设备自动判读结果。直接针对病毒中特有蛋白质（即抗原）检测，能快速在急性感染期检测出人体是否含有病毒，可在早期对疑似人群进行分流和管理。
检测方法
1、吸取血样。需要采集指尖血。
2、加样。使用吸管吸取血液在检测卡加样孔中滴入血样与稀释液。
3、水平放置10分钟。
4、观察。在检测卡观察孔中查看有无红色条带出现。
磁微粒化学发光
磁微粒化学发光法为高度敏感的免疫检测，凡具有抗原性的物质均可用此方法测定。其在化学发光检测基础上，采用磁性纳米粒子，使检测具有高灵敏度和速度快的优点。不过，磁微粒化学发光法选择性差，会对一系列的化合物做出反应，而非特定化合物。因此，准确性不好。而且，环境对检测影响较大，容易导致误差。
原理：将新冠病毒抗原蛋白包被在微粒上，抗原蛋白结合新冠肺炎患者血清中的IgG/IgM，化学标记的人IgG/IgM二抗，经过清洗去除游离态的化学标记物。发光底物产生化学发光，通过测量光信号完成对血清中IgG/IgM的定性或定量检测。将试剂0、试剂1、和样本加入到反应管中，若样本中新冠病毒IgM抗体，则与以上试剂中的重组抗原形成复合物，同时结合到磁性颗粒上，洗掉游离成分。将试剂2加入反应管中，碱性磷酸酶标记的抗体作为二抗，与样本中IgM抗体结合，并形成碱性磷酸酶标记抗体-IgM抗体-重组抗原-磁性颗粒复合物，洗掉游离成分。加入全自动免疫检验系统底物液，碱性磷酸酶催化底物液发光，测定各样本管的发光值。样本发光值与新冠病毒IgM抗体浓度呈正相关，从而检测人血清中的新冠病毒抗体IgM抗体。
检测流程：
1、样本处理。取1ml样本稀释液，加入20ul样本，混匀5S，静置15min。
2、设置阴性、阳性 各2管及处理后样本，分别加入50ul新冠病毒IgM抗体试剂1、75ul处理后样本、50ul新冠病毒IgM抗体试剂0、75ul新冠病毒IgM抗体试剂。2两步法，反应时间35min。二次清洗后每管加入全自动免疫检验系统底物液200ul，避光检测，反应5S读数。
随着国务院《关于新冠病毒抗原检测应用方案（试行）的通知》的印发，获得新冠抗原检测注册证的企业不断增多，其IVD市场也迸发出勃勃生机。虽然国务院指出可通过省级集中招采，降低检测试剂价格，但是国内新冠抗原检测市场仍然呈现繁荣态势。因抗原试剂的需求量巨大，多家试剂厂商宣布积极生产以确保供应产能。需求增加也将不断促进产业链上游企业的发展。
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