针对单克隆抗体的纯化技术操作步骤

　　Adhere Chromrose FF复合模式层析介质可以在实验室被填装到HiQumn中压层析柱中，以扩大产量。将填料填装到层析柱中，根据样品中蛋白含量和填料载量选择合适的层析柱和柱高。

　　1.1 缓冲液准备

　　所用水和缓冲液在使用之前建议用 0.22μm或0.45μm 滤膜过滤。所使用的平衡液和洗脱液，根据不同目标蛋白填料自行选择。

　　以纯化BSA为例：

　　平衡缓冲液： 25 mM 磷酸钠+50 mM 乙酸钠 PH7.8

　　洗脱缓冲液： 25 mM 磷酸钠+50 mM 乙酸钠 PH 4.0

　　1.2 样品准备

　　样品在上样前建议离心或用 0.22 μm 或 0.45 μm 滤膜过滤，减少杂质，提高蛋白纯化效率和防止堵塞柱子。

　　1.3 样品纯化

　　1) 平衡∶用5~10CV的平衡缓冲液平衡层析柱，至流出液电导和pH不变（与平衡液一致）。

　　2) 进样∶样品缓冲液应尽可能与平衡液一致。 固体样品可用平衡液溶解配制，低浓度样品溶液可用平衡液透析或添加相应量的盐；高浓度样品溶液可用平衡液稀释。

　　3) 淋洗∶继续用平衡缓冲液淋洗至基线。

　　4) 洗脱∶用洗脱缓冲液（也可采用pH梯度）洗脱（可采用线性梯度洗脱或阶越梯度洗脱），收集流出液；

　　5) 再生∶每次层析之后可用1~2M NaCl清洗层析柱， 除去强结合的蛋白。用5~10CV的平衡缓冲液平衡层析柱，至流出液电导和pH不变（与平衡液一致）。

　　2 原位清洗和保存

　　2.1 原位清洗

　　介质使用数次（具体次数与原料的种类和来源及实验要求有关）后，需要对介质进行在位清洗。

　　1) 对于通过离子键强结合的蛋白，可用2M NaCl以1~2mL/min的流速反向冲洗10~15min。

　　2)对沉淀蛋白、疏水性结合的蛋白、脂蛋白，可用1M NaOH以1~2mL/min的流速反向冲洗3~4CV。

　　3）对强疏水性结合的蛋白、脂蛋白和脂类物质，可用70%乙醇或30%异丙醇以1~2mL/min的流速反向冲洗3~4CV（使用高浓度的有机溶剂时，为了避免产生气泡，应采用逐步增加有机溶剂浓度的方法）。

　　2.2 储存

　　2~30℃下20%乙醇中保存（4°C下有利于长期保存）；层析柱中的介质可用20%的乙醇冲洗后保存于2~30°C。

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