96T人免疫球蛋白IgM ELISA 检测试剂盒使用的实验方案

　　本试剂仅供研究使用 标本：血清或血浆上海信然实业有限公司专业供应葡聚糖凝胶HL-20,白介素elisa试剂盒,肿瘤坏死因子elisa试剂盒,人类白介抗原B27,细胞生长因子试剂盒，提供免费代测服务，保证实验结果客观真实性。我公司对试剂盒质量100%保证，若存在质量问题，我们无条件包退换 试验原理：　　　　IgM试剂盒是间接法酶联免疫吸附实验（ELISA）.已知IgM浓度的标准品、未知浓度的样品加入微孔酶标板内进行检测。先将IgM和生物素标记的抗体同时温育。洗涤后，加入亲和素标记过的HRP。再经过温育和洗涤，去除未结合的酶结合物，然后加入底物A、B，和酶结合物同时作用。产生颜色。颜色的深浅和样品中IgM的浓度呈比例关系。　　 安全性避免直接接触终止液和底物A、B。一旦接触到这些液体，请尽快用水冲洗。实验中不要吃喝、抽烟或使用化妆品。不要用嘴吸取试剂盒里的任何成份。操作注意事项试剂应按标签说明书储存，使用前恢复到室温。稀稀过后的标准品应丢弃，不可保存。实验中不用的板条应立即放回包装袋中，密封保存，以免变质。不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质前使用。使用一次性的吸头以免交叉污染，吸取终止液和底物A、B液时，避免使用带金属部分的加样器。使用干净的塑料容器配置洗涤液。使用前充分混匀试剂盒里的各种成份及样品。洗涤酶标板时应充分拍干，不要将吸水纸直接放入酶标反应孔中吸水。底物A应挥发，避免长时间打开盖子。底物B对光敏感，避免长时间暴露于光下。避免用手接触，有毒。实验完成后应立即读取OD值。加入试剂的顺序应一致，以保证所有反应板孔温育的时间一样。按照说明书中标明的时间、加液的量及顺序进行温育操作。样品收集、处理及保存方法血清-----操作过程中避免任何细胞刺激。使用不含热原和内毒素的试管。收集血液后，1000×g离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。血浆-----EDTA、柠檬酸盐、肝素血浆可用于检测。1000×g离心30分钟去除颗粒。细胞上清液---1000×g离心10分钟去除颗粒和聚合物。保存------如果样品不立即使用，应将其分成小部分-70 ℃保存，避免反复冷冻。尽可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量颗粒，检测前先离心或过滤。不要在37℃或更高的温度加热解冻。应在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。 操作步骤使用前，将所有试剂充分混匀。不要使液体产生大量的泡沫，以免加样时加入大量的气泡，产生加样上的误差。根据待测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数。每个标准品和空白孔建议做复孔。每个样品根据自己的数量来定，能使用复孔的尽量做复孔。加入稀释好后的标准品50ul于反应孔、加入待测样品50ul于反应孔内。立即加入50ul的生物素标记的抗体。盖上膜板，轻轻振荡混匀，37℃温育1小时。甩去孔内液体，每孔加满洗涤液，振荡30秒，甩去洗涤液，用吸水纸拍干。重复此操作3次。如果用洗板机洗涤，洗涤次数增加一次。每孔加入80ul的亲和链酶素-HRP，轻轻振荡混匀，37℃温育30分钟。甩去孔内液体，每孔加满洗涤液，振荡30秒，甩去洗涤液，用吸水纸拍干。重复此操作3次。如果用洗板机洗涤，洗涤次数增加一次。每孔加入底物A、B各50ul，轻轻振荡混匀，37℃温育10分钟。避免光照。取出酶标板，迅速加入50ul终止液，加入终止液后应立即测定结果。在450nm波长处测定各孔的OD值。 6号标准品以上的结果为非线性的，根据此标准曲线无法得到精确的结果。试剂盒性能1. 灵敏度：最小的检测浓度小于1号标准品。稀释度的线性。样品线性回归与预期浓度相关系数R值为0.990。2. 特异性：不与人其它细胞因子反应。3. 重复性：板内、板间变异系数均小于10%。结 果 判 断 与 分 析1、仪器值：于波长450nm的酶标仪上读取各孔的OD值2、以吸光度OD值为纵坐标（Y），相应的IgM标准品浓度为横坐标（X），做得相应的曲线，样品的IgM含量可根据其OD值由标准曲线换算出相应的浓度。3、检测值范围：0-8.0g/L4、敏感度： 0.01 g/LJab1(c-Jun activation domain-binding protein1) Jun激活区域-连接蛋白1抗体 0.2mlphospho-JNK1/2/3(pThr183/pTyr185) 抗磷酸化氨基末端激酶1/2/3抗体 0.2mlJNK1/2/3 抗氨基末端激酶1/2/3抗体 0.2mlKCNA5(Potassium voltage-gated channel subfamily A member 5) 钾电压阀门通道混合器相关亚家族成员5抗体 0.2mlKi-67 Ki-67 Antigen抗体 0.2mlKi-67（Antigen identified by monoclonal antibody Ki 67） Ki67抗体 0.1mlKif14 protein 驱动蛋白家族Member14蛋白抗体 0.2mlKiss-1 (Metastasis-suppressor KiSS-1 precursor) 肿瘤转移抑制基因抗体 0.2mlKlf4(Kruppel like factor 4) 肠道内富含的Kruppel样因子/上皮锌指蛋白4抗体 0.2mlphospho-Klf5/CKLF/Kruppel like factor 5 (pSer272) 磷酸化肠道内富含的Kruppel样因子5抗体 0.2mlKLF6(Kruppel-like factor 6) 转染抑癌基因KLF6抗体 0.2mlKLF13/RFLAT-1 (Kruppel like factor 13) 肠道内富含的Kruppel样因子13 0.2mlKLK1(Kallikrein 1) 激肽释放酶1抗体 0.2mlκOR (kappa Opioid receptor) kappa型阿片受体抗体 0.2mlKLK3(Kallikrein 3) 激肽释放酶3/舒血管素3抗体 0.2ml