抗坏血酸过氧化物酶（APX）活性检测试剂盒（紫外分光光度法）

　　抗坏血酸过氧化物酶（APX）活性检测试剂盒

　　（紫外分光光度法）

　　注意：正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定。

　　产品货号：BA1185

　　产品规格：50管/48样

　　产品简介：

　　APX是植物清除活性氧的重要抗氧化酶之一，也是抗坏血酸代谢的关键酶之一。APX具有多种同功酶，分别定位于叶绿体、胞质、线粒体、过氧化物和乙醛酸体，以及过氧化体和类囊体膜上。APX催化H2O2氧化AsA，是植物AsA的主要消耗者。APX的活性直接影响到AsA的含量，在胁迫和解胁迫条件下，APX与AsA具有一定的负相关性。

　　APX催化H2O2氧化AsA，通过测定AsA的氧化速率，可计算得APX活力。

　　产品内容：

　　试剂一：液体90mL×1瓶，4℃保存；

　　试剂二：粉剂×1瓶，4℃保存。临用前加入5mL双蒸水充分溶解；

　　试剂三：液体5mL×1瓶，4℃保存。

　　需自备的仪器和用品：

　　低温离心机、紫外分光光度计、1mL石英比色皿、移液枪、研钵、冰和蒸馏水。

　　操作步骤：

　　一、粗酶液提取：

　　按照组织质量（g）：试剂一体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL试剂一）进行冰浴匀浆。13000g，4℃离心20min，取上清置冰上待测。

　　二、测定操作表：

　　1. 分光光度计预热30min以上，调节波长到290nm，用蒸馏水调零。

　　2. 试剂一在25℃中预热30min以上。

　　3. 空白管：依次在1mL石英比色皿中加入100μL蒸馏水、700μL预热的试剂一、100μL试剂二和100μL试剂三，迅速混匀后在290nm测定10s和130s光吸收A1和A2，△A空白管=A1-A2。

　　4. 测定管：依次在1mL石英比色皿中加入100μL上清液、700μL预热的试剂一、100μL试剂二和100μL试剂三，迅速混匀后在290nm测定10s和130s光吸收A3和A4，△A测定管=A3-A4。

　　三、APX 活力计算：

　　(1) 按样本蛋白浓度计算

　　活性单位定义：每毫克蛋白每分钟氧化1μmol AsA为1U。

　　APX(U/mg prot) = (△A测定管-△A空白管)÷(ε×d）×V反总×106÷(Cpr×V样)÷T

　　=1.79×(△A测定管-△A空白管) ÷ Cpr

　　ε：AsA在290nm处摩尔吸光系数为2.8×103L/mol/cm；d：比色皿光径（cm），1cm；V反总：反应体系总体积（L），1000μL=1×10-3L；106：1mol=1×106μmol；Cpr：上清液蛋白质浓度（mg/mL），需要另外测定，建议使用本公司BCA蛋白质含量测定试剂盒；V样：加入反应体系中上清液体积（mL），100μL=0.1ml；T：催化反应时间（min），2min。

　　（2）按样本质量计算

　　单位的定义：每g组织每分钟氧化1μmol AsA为1U。

　　APX(U/g ) = (△A测定管-△A空白管)÷(ε×d）×V反总×106÷(W×V样÷V样总)÷T

　　=1.79×(△A测定管-△A空白管) ÷W

　　ε：AsA在290nm处摩尔吸光系数为2.8×103L/mol/cm；d：比色皿光径（cm），1cm；V反总：反应体系总体积（L），1000μL=1×10-3L；106：1mol=1×106μmol；V样：加入反应体系中上清液体积（mL），100μL=0.1mL；V样总：加入试剂一体积，1mL；W，样本质量，g；T：催化反应时间（min），2min。

　　举报/反馈