“药物+铁死亡+疾病+通路”四步教会你设计实验！

　　欢迎来小薇的日更公号科研显微镜，如果亲比较缺乏SCI写作经验，自己修改起来费时费力，效果还不一定好，时间久了创新性下降，可以请小薇进行评估，或修改润色哦。

　　铁死亡是近年来研究的热点，小薇之前给大家介绍了几个“单基因+通路+热点细胞死亡”实验设计套路，那有小伙伴想研究药物，不知道怎么着手，别着急，小薇今天以下面这篇文献为例，四步教会大家设计“药物+铁死亡+疾病+通路”实验，一起往下来看吧~

　　首先作者展示了圣草酚的二维和三维结构图（图1A和B）。接着用圣草酚处理卵巢癌细胞（CaoV3和A2780细胞），发现CaoV3和A2780的细胞活力以圣草酚剂量依赖的方式降低（图1C），此外，CaoV3的细胞凋亡以圣草酚剂量依赖性的方式显著升高（图1D）。说明圣草酚抑制卵巢癌细胞活力，诱导细胞凋亡。

　　为了进一步研究圣草酚对卵巢癌细胞铁死亡的影响，本研究检测了CaoV3和A2780细胞中的Fe2+水平、ROS积累以及SLC7A11和GPX4的蛋白水平（铁死亡相关指标）。首先，将细胞系用不同浓度的圣草酚处理，发现CaoV3和A2780细胞中的Fe2+水平增加（图2A）。此外，Erastin（铁死亡诱导剂）显著增强了圣草酚对Fe2+水平的影响，Ferrostatin-1（铁死亡抑制剂）挽救了其作用（图2B）。并且圣草酚处理显著增加了ROS的产生（图2C）。为了进一步证实圣草酚对铁死亡的作用，检测了SLC7A11和GPX4的表达，发现浓度为50和100 μM的圣草酚显著降低了CaoV3和A2780细胞中SLC7A11和GPX4的蛋白表达水平（图2D）。这些结果表明，在CaoV3和A2780细胞中，圣草酚引发了铁死亡。

　　接着作者进一步研究圣草酚是否会影响卵巢癌细胞线粒体功能，利用流式细胞仪使用JC-1检测试剂盒对MMP进行测量 [红色表示线粒体具有高（活性）值，绿色区域表示低（非活性）ΔΨm值]。结果发现圣草酚降低了CaoV3和A2780细胞中JC-1荧光比（红/绿）的比率（图3A和B）。还检测了GSH和MDA的水平以评估MMP，结果发现圣草酚显著降低了GSH水平，但增加了MDA水平（图3C和D）。并且，圣草酚提高了细胞色素C蛋白的表达（图3E）。这些发现表明，在CaoV3和A2780细胞中，圣草酚加重了线粒体功能障碍。

　　此外，作者进一步研究了圣草酚对Nrf2信号通路的调节作用。基于上述结果，这部分选择CaoV3细胞进行实验。HO-1和NQO1是Nrf2下游基因，因此进一步研究了圣草酚是否在CaoV3细胞的Nrf2信号通路中介导HO-1或NQO1。结果发现HO-1和NQO1的蛋白质水平以及Nrf2磷酸化明显被圣草酚下调，这被BM（甲基巴多索隆，Nrf2激活剂）处理部分挽救（图4A和B）。此外，与对照组相比，BM处理增强了细胞活力（图4C），但下调了Fe2+水平（图4D）。还观察到BM处理提高了GSH水平（图4E），但降低了MDA含量（图4F）。这些结果表明，圣草酚可能通过Nrf2/HO-1/NQO1信号通路调节卵巢癌细胞的细胞活力、铁死亡和线粒体功能。

　　最后，作者进一步在小鼠体内探讨了圣草酚对卵巢癌的抑制作用。结果发现与对照组相比，圣草酚时间减少了肿瘤体积和体重（图5A-C）。并且与对照组相比，圣草酚处理显著降低了肿瘤重量的平均值（图5D）。H&E染色结果表明，与对照组相比，圣草酚明显降低了肿瘤切片的染色强度（图5E）。IHC分析显示，圣草酚显著降低了Nrf2的表达（图5F）。此外，还发现与对照组相比，圣草酚显著下调GSH水平，上调MDA水平（图5G和H）。研究结果表明，圣草酚抑制肿瘤生长，加重线粒体功能障碍，降低卵巢癌肿瘤组织中的Nrf2水平。

　　好啦，以上四个步骤简单吧，以文献为例就比较好理解啦，都学会啦吧，有问题的可以留言哈，快收藏起来吧~

　　没有研究方向的小伙伴也不要着急，小薇这里还提供实验设计服务，有需要的小伙伴随时联系小薇，小薇一直都在~