一文了解 luciferase报告基因系统的应用
韩国民众中，流传着一句话：与其说韩国拥有三星，不如说三星拥有韩国。
三星家族中，有一个让韩国民众望而生畏的男人。
这个人身价超过 700 亿，咳嗽一声就能让韩国经济抖三抖。
他坑害亲妹、对结发妻子见死不救，并且能暗中操控整个青瓦台（韩国总统官邸）。
他就是三星现任掌门人——李在镕。
1995 年的一天，在韩国三星集团总部的最高层会议室中，三星掌舵人李健熙紧锁眉头，盯着众人，等待着这些人给出自己的专业意见。
在座的除了三星集团的高管，还有时年 27 岁「三星太子」李在镕和他的亲妹妹——25 岁的「三星长公主」李富真。
在李健熙的震怒之下，众人一开始都互相顾盼，不敢吭声，李健熙把目光落在了李在镕身上，李在镕知道，这是父亲对他的期盼。
李健熙
于是李在镕略微清了一下嗓子，说道：「既然我们生产的手机有质量问题，那就把有质量问题的手机召回就行了，这样可以最小的减少我们的损失。」
李健熙没有任何反应，又把目光落在了李在镕妹妹李富真的身上。
李富真不仅人长得漂亮，而且说话铿锵果断：「我认为应该把同批次所有的产品全部召回，然后，全部销毁。」
李富真
李富真此话一出，会议室中一片哗然。
李在镕在心中轻蔑一笑：「真是个不懂事的小丫头，全部销毁，那可是价值 150 亿的货。」
但令李在镕没想到的是，就在大家议论纷纷之时，他却发现了李健熙脸上一个细微的表情，这个表情说明李健熙对李富真的意见非常赞赏。
果真，李健熙在片刻之后便站起身来，对着众人讲：「就这么处理，全部召回，当着所有员工和媒体的面，全部销毁。只有这样，才能向市场展示我们三星的决心。」
说完李健熙离开会场，众人也陆续离开，只剩李在镕一人尴尬的待在会议室。
此刻，李在镕不仅尴尬，而且心中充满里对李富真的嫉妒和仇恨。
他知道，在父亲李健熙的眼中，李富真不仅外貌出众，同时聪明伶俐，从小就深受父亲喜爱，而且父亲认为李富真比他更有能力。
李在镕是李健熙唯一的儿子，并且是长子，所以从小他就被钦定为三星集团未来的接班人。
从小他的祖父，也是三星集团的创始人李秉哲就把他带着身边，视察工厂、学习如何做生意、如何经营企业。
可以说整个李家、整个三星都在李在镕身上砸钱、砸资源、砸人脉。
而李在镕也严格扼守家族给他定下的这些规矩，沿着家族给他制定好的人生轨迹在前行。
所以李在镕一直都非常低调，不管是学习还是做事都非常认真。
他不仅精通四国语言，还毕业于韩国排名第一的首尔大学，之后又留学于日本和美国，拥有美国哈佛商学院的博士学位。
接班，对于李在镕来说，从小就是囊中之物。
但自从他结束学业进入三星工作之后，他才发现「经营企业」根本不是那么简单的一回事。
他所主导的工作或者经历的项目要么毫无进展、要么一团糟。
他能够明显的感觉得到父亲李健熙对他的失望在一点点加大。
而现在，妹妹李富真也进入了三星工作，这是对李在镕最大的威胁。
1995 年的这次手机质量危机，关乎三星集团的未来，所以父亲李健熙非常愤怒，召开公司高层紧急会议。
李在镕原本想借这次危机处理，为自己挽回一些颜面，没想到才进公司的李富真却又 「拔得头筹」。
李在镕的这个妹妹从小被父亲李健熙保护得十分好，外界一直不知道她的真实身份，她上学的时候同学只知道她家里是做「小生意」的。
李富真和李在镕一样，也是从小就沿着家族给她制定好的人生轨迹在前行。
她毕业于韩国三大名校的延世大学，之后在美国麻省理工大学拿到 MBA 学位，就在前不久才学成归来。
而父亲李健熙也在前不久的一次慈善晚会上，第一次高调的把李富真带到众人面前。
这一切让李在镕充满了危机感，他深知，他的「太子之位」虽然是钦定，但这并不是完全不可能改变的。
即使是他顺利接班了，也有可能会被他的妹妹分走一部分财产和权利。
因为他当年在父亲李健熙那辈中，就发生过这样的事情。
当年李在镕父亲李健熙，是在三星创始人李秉哲正室所生的三个兄弟中最小的一个，而且李健熙和他的两个哥哥年龄差距也较大，所以李秉哲最初的接班人是老大李孟熙和老二李昌熙。
李家关系图
当时三星爆出来一个「肥料事件」，李秉哲为了暂避风浪，就选择暂时退出经营。
三星的具体业务就由老大李孟熙就管理，但这段时间业绩却非常低迷。
而老二李昌熙此前就任韩国肥料的常务理事，出了这个「肥料事件」之后便被判了 6 个月刑期，可以说他是替父亲李秉哲背了黑锅。
这就使得李昌熙心有不甘，凭什么背黑锅的是自己，而大哥李孟熙就能接班三星。
李昌熙越想越气，于是便写了封告密信给当时的韩国总统朴正熙，说一切事情都是他父亲李秉哲策划的，和自己无关。
但李昌熙太嫩了，他并不知道，整件事情真正的幕后黑手其实就是总统朴正熙本人。
所以朴正熙转头就将此事给李秉哲说了，李秉哲大发雷霆，于是把李昌熙逐出了三星，让他在美国自生自灭。
当时李昌熙的地位还没能达到可以直接和总统对话的程度，所以那封告密信其实是通过全斗焕（朴正熙的下下届总统）的手递给朴正熙的。
而全斗焕又和李孟熙又是好友，所以李秉哲怀疑这是老大和老二共谋造反，于是把两人都废黜了。
至此，三星接班人的位置才落在李在镕的父亲——李健熙的头上。
李在镕想到这些父亲的「夺嫡」的故事，不禁在心中打起了一个寒颤：
「李富真，你休想从我手中夺去三星帝国。」
可即便李在镕在工作中埋头苦干，但不论是运气还是才干，都没能让他获得瞩目。
反而是李富真在三星的工作中干得非常出色，可以说是完全碾压李在镕。
不仅如此，父亲李健熙也对李富真寄予厚望，带着她出席各种重要场合和会议。
那段时间，李在镕只能跟在父亲李健熙和妹妹李富真后面，实在抬不起头来。
他甚至不知道哪天父亲会突然宣布，由妹妹李富真来代替自己，就像被困在一场噩梦之中，不知什么时候能够醒来。
但机会总是出现在不经意的时候。
噩梦之后，李在镕迎来了一个绝佳的机会。
扳倒亲妹妹李富真，就这一次。
当时李富真完全是李健熙的掌上明珠，在她进入三星工作之后，李健熙就把自己的贴身保镖任佑宰安排给了李富真，负责保护李富真的日常安全。
这个保镖任佑宰出生底层，没读过什么书，但却不是个省油的灯。
李富真与任佑宰
当时要追李富真的人可以排队绕地球三圈，不管是政要权贵还是财阀大鳄，都把李富真作为儿媳的第一选择。
但偏偏这个任佑宰「不自量力」，对李富真展开了猛烈的追求。
又偏偏碰上李富真从小被父亲保护得太好，从来没尝过爱情的滋味，于是两人真的就像「灰姑娘」的故事一样谈恋爱了。
李健熙得知此事后勃然大怒，坚决反对李富真和任佑宰在一起。
李在镕把这一切看在眼里，却在心里暗自高兴。
因为他知道在他们李家，所有人的婚姻都不应该由自己做主，都必须是门当户对的政治联姻或者政商联姻。
比如他的父亲李健熙和母亲洪罗喜，就是政商联姻的典型。
一个是韩国第一大财阀三星的继承人，一个是李承晚时期著名政治人物洪琎基的女儿。
「连父亲都不能自己选，李富真居然还想自己做主，犯下这种错误，简直是送给我的绝佳机会。」李在镕暗自高兴。
于是，就在所有人都反对李富真和任佑宰的恋爱之时，李在镕却站出来支持他的妹妹：
「你不用在乎家庭的对你的束缚，你应该大胆的去追求你的幸福，什么狗屁『门当户对』，难道我们连个普通人的幸福都不能得到？大哥支持你。」
然而李富真当时应该是不知道李在镕的用心，她应该要在 10 年之后才看清李在镕的真面目。
因为在 10 年之后，她的三妹李尹馨重蹈了她的覆辙，也爱上一个条件一般的男人，被父亲坚决反对。
前排右一为李尹馨
而 10 年后的李在镕却没有像「支持」李富真那样，去支持他的三妹，因为李尹馨对他根本不构成威胁。
最终李尹馨在 2005 年自杀身亡，李在镕不但没流露出任何哀伤，反而责怪李尹馨的死给三星带来了负面影响。
当然，这一切是在 10 年后的事情。
李富真在得到李在镕的支持后，更加死心塌地地要和这个「底层保镖」结婚，并不惜和他父亲李健熙展开了持续长达四年的冷战。
李健熙对李富真大失所望，但也无可奈何。
直到 1999 年，李健熙同意女儿李富真嫁给这个「底层保镖」。
李在镕在这一次打败了李富真。
他盘算的是：「李富真一旦嫁给了这个任佑宰，父亲李健熙一定会对任佑宰委以重任，但这个任佑宰绝对不是那块料，他干得越遭，对我就越有好处。」
果不其然，事情按照李在镕的设想在往前发展。
任佑宰之前连高中都没有毕业，仅此一点，李健熙就对他彻头彻尾地看不上。
于是李健熙把他送到麻省理工学院留学，希望他能混个文凭回来。
可任佑宰看到书就头疼，完全没心思上学，在国外和李富真不停的诉苦。
李健熙掌控诺大的一个三星帝国，却掌控不了自己的女儿，无奈只能把这个女婿接回来，任命他为三星电机的副会长。
这也算给任佑宰的有一次机会，因为三星电机副会长是一个举足轻重的职位，属于三星的核心业务板块。
结果任佑宰一上任就开始搞改革，不仅没搞好，还搞得一团糟，致使公司亏损严重，事后他又推卸责任，导致了大批老员工集体辞职。
而李在镕当时正好是任佑宰的上级，他对任佑宰的这一系列动作不闻不问，就等着看他出乱子。
因为李健熙对李富真的失望，衬托出了对李在镕的希望，这一点非常符合李在镕的心意。
但接下来事情的发展却又有点过头了，超出了李在镕的意料。
这个任佑宰不但办事能力不行，面对门不当户不对的李家，也是受尽了屈辱，于是回到家中就把怒气发泄在李富真身上，据说还在李富真怀孕期间对她进行过家暴。
直到 2009 年韩国女星张紫妍自杀，在整个韩国造成了巨大的轰动。
李家人率先得知了张紫妍事情的真相：张紫妍成为供财阀无情玩弄的奴隶，并且曝出一个曾经她 「服务」过的财阀名单。
而其中牵扯到任佑宰，他和张紫妍在此前有过 35 次通话记录。
所有证据都表明，任佑宰不但家暴，还出轨了。
任佑宰的这些黑料，使得李富真和任佑宰渐行渐远。
但这对于李在镕来说可不是什么好消息。
因为李富真要是离婚了，意味着她可能把所有的心思全部都放在事业上来。
李在镕盘算着：「李富真可不是什么好操控的蠢货，她的能力胜过很多人。」
早在李富真结婚之后的 2001 年，她便担任了三星集团旗下新罗酒店的企划部部长职务。
当时李健熙其实是把三星的核心业务——「三星电子」分给了李在镕，时尚时装领域的「第一毛织」分给了二女儿李叙显，而新罗酒店分给了大女儿李富真。
「新罗酒店」的业务根本就不怎么赚钱，也不是三星的核心业务。
李在镕当然明白父亲的用意：「这都是她自找的。」
但让李在镕没想到、甚至连李健熙可能都没想到的是，李富真在介入新罗酒店的业务之后，仅用了 5 年时间便把新罗酒店的销售额飙涨了 6 倍，其才干有目共睹，外界一度称其为「小李健熙」。
到 2010 年，李富真正式掌管了新罗酒店业务，也涉足了「第一毛织」和「爱宝乐园」的经营业务。
三星集团业务范畴
李富真通过自己的才干，让父亲李健熙又逐渐恢复对她的信任。
李在镕看在眼里，却没有其他更好的办法阻止李富真的推进。
但尽管如此，李在镕仍然压制着李富真，牢牢掌控着局势。
即使李富真再怎么能干，将来也顶多只能分走一部分遗产了，绝不可能撼动李在镕「三星继承人」的位置。
然而，一切都皆变数。
2014 年 5 月的一天，李健熙突发心肌梗塞住院。
李在镕知道自己的机会来了，他接替父亲的工作，开始逐渐在实际上掌控三星集团的大权。
但这时媒体的纷扰却令他略显尴尬。
他的前妻林世玲分走他 1000 亿韩元（5 亿人民币），回到韩国另一财团——大象集团。
不仅把企业搞得有声有色，近期还和当红男演员李政宰闹出沸沸扬扬的绯闻。
前妻的事情只是让他尴尬而已，但上个月发生的「世越号事件」却让他坐立不安。
当时各大新闻都在播放一条信息：总统朴槿惠在 「世越号沉船事故」发生 7 个多小时候后，才首次露面，她在抵达首尔安全大楼后，第一句话就是「我听说学生们都穿上救生衣了，有那么难救吗？」
李在镕在看到这条信息时，恶狠狠地骂了一句「蠢女人，烂泥扶不上墙」。
「世越号事件」死了 300 多名学生，而这些学生原本都有希望获救，完全是因为韩国政府的一系列「神」操作才导致这些学生丧生。
短时间内，朴槿惠的支持率跌倒了谷底。
这对李在镕来讲也是重大的危机。
因为他们李家的三星帝国，本来就和韩国的历届总统有着一衣带水、千丝万缕的关系。
并且李在镕深知，这样下去迟早出事。
果不其然，两年之后，也就是 2016 年，李在镕最大的危机终于来了。
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科研经历少，但成绩很高> 科研经历多，但成绩不高>科研经历少，且成绩不好。
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本文来源矿大外语之声（ID：cumtb_fld），转载自社科学术圈（ID：shkxquan）
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从本篇开始介绍R中强大的绘图工具ggplot2，该工具个人感觉在R中地位不亚于Python中的Matplotlib。
本文介绍ggplot2的一些基本概念，续前几篇：
R语言基础（一）R语言基础(2)-向量|矩阵|数组|数据框|数据IO|实用函数R语言基础(3)-变量|运算符|变量简单操作R语言基础(4)-数学&统计&概率&字符串处理函数|自定义函数|流程控制语句 ggplot2的作者为Hadley Wickham博士，一位为统计应用领域做出了突出贡献的统计学家，被号称为改变了R的男人；
图来自Hadley Wickham博士个人主页：明明可以靠颜值吃饭的男人，偏偏还要靠才华2019年国际统计学年会（Joint Statistical Meetings, JSM）上被授于考普斯总统奖（The Committee of Presidents of Statistical Societies Awards，COPSS ），改奖项是国际统计学领域的最高奖项，被誉为 “统计学的诺贝尔奖”；Wickham现为Rstudio（Rstudio为R语言的一种知名IDE）的首席科学家，同时为奥克兰大学、斯坦福大学和赖斯大学的统计系兼职教授；Wickham为了使得数据科学更简洁、高效、有趣，开发了大量知名R工具包及R相关书籍，部分如下。PackagesDATA SCIENCE WITH THE TIDYVERSE **ggplot2**for visualising data.dplyr for manipulating data.tidyr for tidying data.stringr for working with strings.lubridate for working with date/times. DATA IMPORT
readr for reading .csv and fwf files.readxl for reading .xls and .xlsx files.haven for SAS, SPSS, and Stata files.httr for talking to web APIs.rvest for scraping websites.xml2 for importing XML files. SOFTWARE ENGINEERING
devtools for general package development.roxygen2 for in-line documentation.testthat for unit testingpkgdown to create beautiful package websitesBooks of Wickham to use R effectively
R for Data Science, with Garrett Grolemund, introduces the key tools for doing data science with R. ggplot2: elegant graphics for data analysis shows you how to use ggplot2 to create graphics that help you understand your data. Advanced R helps you master R as a programming language, teaching you what makes R tick. R packages teaches good software engineering practices for R, using packages for bundling, documenting, and testing your code. 除此之外，Wickham业余时间热爱烘焙和制作鸡尾酒，为自己做了一个网站放家庭食谱，感兴趣的可以去看看。ggplot2是基于图层图形语法（the Grammar of Graphics），可简单粗暴的理解为，您可以先绘制好图形的每一部分，然后将各部分相加形成一张完善的图形，使用ggplot2时，会反复使用如下几个对象，简单介绍：
几何对象（geom） geometric objects，譬如散点points、 线性lines、柱状bars及方图Histogram等，可绘制的geom为：
标度（scale） scales map values in the data space to values in the aesthetic space. This includes the use of colour, shape or size. Scales also draw the legend and axes, which make it possible to read the original data values from the plot（将数据取值映射到图形空间，使用颜色，形状，大小表示不同取值，使用图例，网格线展示标度），可使用的函数：
图像属性（aes） data to the aesthetic attributes (colour, shape, size)，可使用的函数：
坐标系（coord） information about the plot’s coordinate system（描述数据如何映射到图形，同时包含坐标轴和网格线axes, gridlines ），可使用的函数：
统计变换（stat） statistical transformations of the data，对数据的汇总，可使用的函数：
分面（facet） A facet specifies how to break up and display subsets of data as small multiples. This is also known as conditioning or latticing/trellising.（将数据拆分为小子集，对各子集作图并联合展示，也成条件作图或网格图），可使用的函数：
绘图主题（theme） A theme controls the finer points of display, like the font size and background colour. While the defaults in ggplot2 have been chosen with care, you may need to consult other references to create an attractive plot.（主题涉及图形更细的方面，如背景色，字体大小等）。
参考资料：https://github.com/hadley/http://hadley.nz/本文结束，更多好文，欢迎关注：pythonic生物人
Python可视化|Matplotlib39-Matplotlib 1.4W+字教程（珍藏版）Python可视化|Matplotlib&Seaborn36（完结篇）
这是有关于Western Blot第二篇学习帖子，上一篇link如下（如何提取蛋白制作胶以及相应注意事项）
【实验技术学习笔记】Western Blot
Western Blot流程这里是我在实验中运用到的方法分享给大家【个人向】，如果有任何建议欢迎各位知友提出来，我们一起进步！
每一次做WB的时候都是大量的“试剂输出”以及时间成本，所以跑出来的条带不清晰对于大家来讲都非常“伤”。因此最关键的是做完之后需要进行反思和分析。大家可以根据下面的表格进行自查。
对于时间点提取/不同组织蛋白表达量的分析因为涉及到量的变化，往往会需要一些辅助分析工具，比如Quantity One/Bandscan/Gel-Pro Analyzer等成像系统专用软件。考虑到免费开源好用，目前很多实验室的同学们都是使用一个比较简单的综合性质图像处理软件Image J进行灰度分析（可以在其官网直接下载使用）。当然还有一个Graphpad软件也是常用的。
目前Western Blot条带进行数值化有两种方法——灰度分析和光密度分析。
灰度是计算机图像分析仪根据图像颜色深浅分为256个级别，灰度值越小物体颜色越深。光密度是指光线通过溶液或某一物质前的入射光强度IO与该光线通过溶液或物质后的透射光强度Ib比值的对数OD=log（IO/Ib）；图像分析中，入射光和透射光强度分别被切片上最亮区域的平均灰度值和待测目标平均灰度值取代，则图像分析系统的光密度值=log（切片标本最亮区域的平均灰度值（g0）/待测目标的平均灰度值（g））。光密度值越大，物体颜色越深，阳性物质相对含量越大。
对于灰度值来说，标本制作以及染色时间长短，以及测量时照明光源电压的大小对其影响很大。而光密度是一个比值。是通过计算一张标本最亮区域的平均灰度值与该切片标本中待测目标的平均灰度值的比值，再根据数学公式计算而来的，所以受标本染色时间长短及照明光源电压关系很小。有研究实践显示，灰度值与光密度值二者之间存在着线性关系，都可以用来进行WB定量分析。同样，Image J软件进行WB条带定量分析时也存在两种方法，此处只列举一种方法，具体步骤如下（也可以看1-12的流程图）：
1、下载安装，并打开Image J软件。
2、导入WB条带图片。File→Open→ 弹出对话框→选择文件夹→找到WB条带。
3、把图片转化成灰度图片：Image→Type→8-bit。这时WB图片将会随之改变
4、消除图片背景的影响。Process→Subtract Background。在弹出的对话框中，填上50基本就可以了，也可以稍高些，并勾上Light background，点击OK即可。此时图片背景会变白一些。
5、设置定量参数。Analyze→Set Measurements。在弹出的对话框中勾选Area、Mean gray value、Min & max gray value、Integrated density。
6、设置单位。Analyze→Set Scale。 在弹出的对话框“Unit of length”后面填上“pixels”，其他的不用改动。
7、把WB图片转换成亮带。Edit → Invert
8、选择菜单栏下的一系列不规则圆圈，根据情况选择一种。然后将圆圈手动拉倒第一条带，并尽量将条带都圈起来。
9、点击菜单栏Analyze下拉出现的measurement，即可弹出你选定区域的灰度统计值。也可以点击快捷键（英文状态下的键盘m）。
10、手动移动不规则圆圈至下一条条带，重复8、9步骤，直至所有条带都被测量。
11、当测定完所有条带，选结果中的“Edit”的“Select All”，然后复制数据“IntDen”到Excel表即可进行分析。也可以直接在Results对话框中，选择File → Save as，直接导出excel表格。
12、在excel表格中将目的蛋白的灰度值除以内参蛋白（如果不明白内参蛋白选择，可以见辅助说明1）的灰度值，进行归一化处理。
流程～13、下载安装，并打开Graphpad软件。
14、在对话框左侧栏目“New table & graph”下选择“Column”。然后再右侧选择所要作的图形，以及是否显示误差棒等，具体如下图。
15、在弹出的表格中，填上excel中的比值。
16、然后点击菜单栏上Insert → New Graph of Existing Data... 。也可以在工具栏Sheet中的“New”条目下找到。（其实这步可以省略）
17、在弹出的对话框“Create New Graph”中，填写新图名称，选择分析方法，图形，以及误差棒的表示方法，具体如下。（其实这步可以省略）
18、此时，可以在工具栏下左侧的状态栏“Graphs”文件夹中找到所建新图“Date 1”
19、此时可以对图形的外观进行修改，增加图片题目以及XY轴名称。直接在图上对应位置左键点击修改。
20、也可以借助工具栏“Change”中的功能键对图片的柱形图颜色、宽度、高度、间隔等进行调整。
21、然后点击工具栏“Export”将新建的柱形图导出。
22、上面只是单因素的柱状图构建方法。如果是双因素，应该在一开始选择“Column”时选择“Grouped”。
谢谢大家的关注～??大家一起在科学实验的海洋里遨游！
荧光素酶报告基因是指以荧光素(luciferin)为底物来检测荧光素酶(luciferase)活性的一 种报告系统。荧光素酶可以催化luciferin氧化成oxyluciferin，在这个氧化过程中，会发出生物荧光(bioluminescence)，这种荧光可通过荧光测定仪或液闪测定仪测定。
产物唯一且对受体细胞无毒表达产物在细胞中不存在，无背景表达水平稳定，便于检测萤火虫荧光素酶(Firefly luciferase)大小为61 kDa，一般用作主报告基因，需要根据研究目的对载体进行改造。
萤火虫荧光素酶海肾荧光素酶(Renila luciferase)大小为36kDa，一般用作内参，用来平衡细胞数量、转染效率、表达效率的差异。
海肾荧光素酶1.调控元件功能研究 (启动子、增强子等)
转录因子，也被称为反式作用因子，可与其靶启动子中的特异序列结合来行使调控基因表达的功能，靶启动子中的这些序列称为顺式作用元件，二者进行共价结合，起到对基因表达的抑制或增强的作用。报告基因需构建到靶启动子序列上游，将报告基因质粒与表达待检测转录因子的质粒共转染，即可通过荧光值的变化直接来定量检测这类转录因子对靶启动子的调控作用。
2. miRNA靶位点研究
miRNA，即microRNA，可以通过参与调节其下游基因翻译过程来发挥其生物学功能。已知所有动物miRNA 作用的mRNA靶点均在其3' UTR区，miRNA通常通过其种子区，以及5’端2-8个碱基与目的基因的RNA靶点完全匹配结合，通过切割靶标转录产物来诱导基因抑制。将miRNA的靶标3' UTR目的基因构建至报告基因下游，可以用于验证miRNA与靶基因的直接靶向关系。
3. 信号通路的研究
经典的ADCC/ADCP效应也可采用报告基因法研究，经典的检测方法采用供者的外周血单核细胞PBMC或自然杀伤细胞NK作为效应细胞，这类难于获得，制备难度大，不稳定，强烈影响其作为抗体药研发生产的活性检测方法。可构建基因程改造的细胞，将ADCC作用机制通路激活过程中首先发生的NFAT(活化T细胞因子)的信号通路介导的基因转录作为检测到指标。例如，使用基因工程改造的Jurkat细胞作为效应细胞，该细胞稳定表达了FcrRIIIa受体(表达V158高亲和力的突变体或F158低亲和力的突变体)，和由NFAT应答元件驱动表达的Luciferase基因，可通过NFAT通路活化产生的荧光素酶的活性来定量检测治疗性抗体Fc效应因子的功能。
此外，几乎所有的免疫检查点靶向药筛选用的细胞模型都是基于相应靶点的信号传导机制，并且大部分最终在信号通路层面都会归于NFAT或NFkB，举个例子 ：
TIGHT(T cell immunoglobulin and ITIM domain)是一种Ig超家族受体，在活化的T细胞、NK细胞和T-reg上表达。TIGIT的配体有CD155(PVR)和CD112(PVRL2)，介导TIGIT在T细胞及NK细胞上的负性调节功能，是除PD-1/PD-L1之外目前研究较热门的免疫检查点。
该RGA(reporter gene assay)被构建用来评估靶向TIGHT免疫的治疗性抗体的生物活性功能，由两种工程细胞组成，即CHO-CD112-CD3 scFv cell line和Jurkat-NFAT-TIGIT cell line，二者共培养之后，CHO细胞的anti-CD3与Jurkat细胞的TCR-CD3复合物结合，并激活CD3，诱导NFAT控制的荧光素酶的表达，而CHO细胞的CD112与Jurkat细胞的TIGHT相互作用，破坏荧光素酶的表达。额外添加anti-TIGHT的单抗导致抑制解除，可检测到dose-dependent的荧光量。
参考文献Zhihao F et al. A reporter assay for determining the biological activity of therapeutic antibodies targeting TIGHT. doi: 10.1016/j.apsb.2021.09.011