dsDNA定性、定量实验结果不一致，检测出错了？

　　来源：检验医学网

　　作者：刘爱平

　　单位：复旦大学附属华山医院检验医学科

　　抗双链DNA抗体（抗dsDNA）是抗DNA抗体中的一种，其反应位点位于DNA脱氧核糖磷酸框架上。

　　抗dsDNA主要出现于SLE患者的血清中，可与肾小球基底膜上的硫酸乙酰肝素(heparansulfate)结合，形成抗原抗体复合物，激活炎症系统如补体活化途径，导致组织损伤。

　　致病性抗DNA抗体具有以下特性：与dsDNA亲和性高，多反应性，为IgG类，与dsDNA形成抗原抗体复合物，可沉积在肾脏、皮下和其他器官的毛细血管中，活化补体系统，引起器官病理损害。抗dsDNA抗体与dsDNA形成免疫复合物，沉积在肾脏组织上，导致肾脏损伤，出现尿常规异常。

　　抗dsDNA抗体是SLE的最重要的自身抗体，检出率40%-70%。高滴度抗dsDNA的存在是SLE诊断的重要依据，也是疾病活动性特别是肾脏损伤的标志。

　　病例资料

　　临床特征

　　患者，女性，64岁，2022年7月20日因“右拇指关节僵硬、疼痛3月，检查发现尿潜血1月”入住华山医院肾内科。

　　患者自诉2022年4月起，晨起时发现右手拇指关节处僵硬，活动后症状可有所好转，感关节活动时有异响，关节周围皮肤稍肿胀，患者未予重视。5月感僵硬范围较前增大，出现关节处疼痛，疼痛多于夜间休息时出现，伴疼痛处压痛，每次疼痛约10min，活动或按摩后疼痛可好转，因疫情原因未能就诊。

　　6月至风湿科门诊就诊，查抗核抗体分型 阳性(+)、均质型 1:10000 阳性，见图1。

　　抗核抗体谱中：抗Scl-70抗体 37（阳性）、抗核小体抗体 18（弱阳性）。CCP抗体 5.5RU/ml。尿潜血 2+、尿蛋白 1+、尿红细胞计数 122.4/μL。白细胞、CRP、血沉、类风湿因子、肝肾功正常，风湿科考虑结缔组织病，给予雷公藤 2#bid、羟氯喹 2#bid治疗，患者自觉服药后疼痛有所改善，僵硬症状改善不明显。

　　7月18日复查，尿潜血 2+，为求进一步诊治入院，完善相关检查。尿常规：潜血 1+、蛋白 阴性、尿微量白蛋白比肌酐 15.06mg/g、尿系列蛋白未见明显异常，eGFR（MDRD公式计算）96.5ml/min、24h尿总蛋白 0.09g/24h、抗dsDNA-IgG抗体（Elisa）471.8IU/ml↑、抗dsDNA抗体定性实验阴性。血常规、肝肾功能、电解质、CRP、PCT、血尿免疫固定电泳、CCP抗体、补体无明显异常。入院后继续给予雷公藤、羟氯喹对症治疗，目前患者未诉明显不适，带药出院。

　　实验室检查

　　1. 2022-06-22

　　尿常规检查结果提示：潜血 2+、蛋白 1+ 、pH 6.0、白细胞脂酶 1+、红细胞计数 122.4 /μL 偏高(0-33)、白细胞计数 30.5/μL (0-34)。

　　2. 2022-06-22

　　血免疫球蛋白E <44.16(0-240ng/ml)、血免疫球蛋白G 14.00g/L (8.6-17.4)、血免疫球蛋白A 3.06g/L (1-4.2)、血免疫球蛋白M 0.89g/L (0.5-2.8)、补体C3片段 1.010g/L (0.7-1.4)、补体C4 0.105g/L(0.1-0.4)。

　　3. 2022-06-23

　　抗核抗体谱中：抗Scl-70抗体 37（阳性）、抗核小体抗体 18（弱阳性）、余阴性。

　　4. 2022-07-21

　　尿系列蛋白：尿免疫球蛋白G <3.63mg/L、尿微量白蛋白 5.45mg/L、尿α1微球蛋白 <5.34mg/L、尿转铁蛋白 <2.21mg/L。

　　5. 2022-07-25

　　ANA定性分型：AC-1 1:3200、抗dsDNA抗体定性（间接免疫荧光法）阴性、抗dsDNA抗体定量（Elisa法）471.8IU/ml，见图1、2。

　　6. 2022-11-11

　　ANA定性分型：AC-1 1:1000，见图1。

　　

　　图1 患者不同时间点的抗核抗体核型

　　（HEp-2 细胞，IFA）

　　

　　图2 患者血清中dsDNA抗体的检测

　　（绿蝇短膜虫，IFA）

　　本例患者dsDNA定量明显升高，绿蝇短膜虫间接免疫荧光法实验结果阴性，是检测错误吗？非也。

　　定量实验试剂盒为欧蒙抗双链DNA（dsDNA-NcX）抗体IgG检测试剂盒，此试剂盒中，在固相载体上包被的抗原底物是结合了核小体（NcX）的dsDNA，其中核小体组分已高度纯化，去除了H1及其他非组蛋白，从而保证了针对SLE的最高检测特异性。

　　与传统的抗dsDNA抗体的ELISA测定方法相反，此检测方法不再使用多聚亮氨酸或硫化鱼精蛋白等链接物，后者是导致非特异性反应的原因之一。因为ELISA检测方法学的敏感性，低亲和力，非致病的dsDNA抗体也可以被检测到。

　　而间接免疫荧光法使用的绿蝇短膜虫中的动基体是纯化的dsDNA，检测特异性较ELISA方法高，且检测到的是具有高亲和力的dsDNA抗体。因抗dsDNA抗体几乎主要存在于狼疮病人体内，而此病人临床诊断为结缔组织病，非系统性红斑狼疮，所以推测该病人体内抗dsDNA抗体为可能非高亲和力非致病性抗体，该病人补体水平正常，尿系列蛋白为阴性也可以佐证。

　　针对dsDNA抗体，目前的检测方法主要有间接免疫荧光法、ELISA法和Farr RIA法。因Farr RIA法需要放射性试剂，很多检验科已不再开展，所以目前大多数检验科主要开展间接免疫荧光法和ELISA法检测dsDNA抗体，当两种方法结果不一致时，需要结合临床综合判断，提高医学检验对于临床的辅助诊断能力。

　　随着羟氯喹和雷公藤的治疗，该患者的肾脏损伤情况在慢慢好转，抗核抗体的荧光强度也在缓慢降低，提升抗核抗体荧光强度可以提示患者的治疗效果。

　　【参考文献】

　　[1]Makowski GS, Ramsby ML. Selective detection of autoimmune antibodies to single and double stranded DNA by enzyme immunoassay. Ann Clin Lab SCi 33(2003)142-148. 16(5):1128.

　　[2]Neogi T, Gladman DD, et al. Anti-dsDNA antibody testing by Farr and ElISA techniques is not equivalent. J Rheumatol 33(2006)1785-1788

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