口腔液——非洲猪瘟病毒抗体检测的另一种样本选择！IDvet与您相约第31届广东畜

　　口腔液——非洲猪瘟病毒抗体检测的另一种样本选择

　　IDvet技术部

　　自从1921年肯尼亚首次报告非洲猪瘟疫情以来，至今全球已有超过62个国家发生过非洲猪瘟，而且这个数字还有不断增加的趋势。我国于2018年8月首次发现非洲猪瘟，短时间内该病对国内养猪业造成了严重的打击，且目前已形成非洲猪瘟病毒强毒株与弱毒株共存的常态化形势。由于缺乏有效的商品化疫苗和药物，如何完善生物安全措施，以及通过合理的监测/检测方案来尽早发现非洲猪瘟病毒感染猪成为猪场防控的重点和难点。

　　近年来，国内外众多研究结果已证实，相对于血液等其他类型的样本，口腔液在某些情况下可更早发现非洲猪瘟病毒“无症状感染”猪。但由于非洲猪瘟病毒弱毒株感染的隐蔽性越来越强，且排毒不规律，仅通过qPCR检测病原核酸存在漏检的风险。因此，除了qPCR检测以外，结合抗体检测（ELISA）是提高非洲猪瘟病毒“无症状感染”猪检出率不可或缺的方式（源自OIE非洲猪瘟参考实验室）。

　　ELISA抗体检测使用最多的样本类型是血清，其次是口腔液，但血清样本采集费时费力、采样成本大，对猪应激明显，特别是存在非洲猪瘟病毒情况下，极易提高交叉污染的风险。口腔液的采集比较方便，对猪应激小且交叉污染风险低，无疑是检测非瘟抗体的另一种样本选择。

　　那么口腔液检测应如何进行呢？

　　一、物品准备

　　在猪只饲喂前1小时左右，最好在清晨饲喂前，准备好长棉拭子、口腔液专用采集袋或粗细合适的棉绳。将绳子通过支架伸到栏舍中间，水平高度达到猪肩部即可；也可直接将绳子系在猪可接触的栏杆上，但注意不要靠近水源，以免将样本稀释；选定的样本应具有充分代表性，合理分布在栏舍的不同区域。一般每栋小型猪舍用5根绳子，大型猪舍用10根绳子，具体需根据实际采样情况做准备。

　　二、口腔液采集

　　棉拭子：在一侧脸颊内擦拭和旋转拭子15-20秒，确保拭子完全接触脸颊和口腔液。取出拭子，避免拭子接触到牙齿，嘴巴和其他表面，将拭子直接置于样本收集管中。

　　纱布或棉绳：猪只自由咀嚼棉绳或纱布包20-30min，采集足够量的口腔液后，取下纱布包或棉绳。需做好标记。

　　三、 样本处理

　　棉拭子：将所收集的拭子浸泡在400 μl 14号稀释液中（ID Screen非洲猪瘟口腔液抗体检测试剂盒内提供），室温孵育10-30 min洗脱，确保拭子完全浸没在稀释液中。洗脱结束后移除并妥善处理拭子。（注：洗脱时间延长至60分钟，可以提高检测敏感性）

　　纱布或棉绳：将棉绳放置于自封袋内，挤压棉绳或纱布，口腔液尽量清亮，如有较多杂质，需将口腔液转移至离心管内做离心处理，转移上层清亮口腔液至新的离心管中。冷藏保存运输，并最好在48小时内安排检测。

　　注：口腔液内非洲猪瘟病毒抗体含量较低，可用一条棉绳（或口腔液采集袋）收集定位栏母猪或同栏猪（≤5头）的口腔液作为1份样本（5头猪共咬一根棉绳），但不能将不同口腔液样本混合检测，以免造成假阴性结果。

　　四、抗体检测

　　相关研究证实，超过23种猪病原体可在口腔液中产生可检测水平的病原和抗体，其中包括非洲猪瘟病毒。因此，基于口腔液检测的众多优势和非洲猪瘟防控的需求，IDvet公司研发了全球首款针对口腔液样本抗体检测的商品化试剂盒——ID Screen非洲猪瘟口腔液抗体检测试剂盒。下面介绍一下该试剂盒的性能和特点：

　　1.试剂盒特异性

　　从非洲猪瘟无疫区猪场收集40-150日龄猪的口腔液进行检测（见下图），ID Screen非洲猪瘟口腔液抗体检测试剂盒表现出极佳的特异性，达100%。（CI95%：93.6%-100%）

　　

　　2 口腔液与血清样本符合率

　　通过临床样本的比对，同一头异常猪采集口腔液和血清的ELISA抗体检测结果具有很高的一致性（见表1）。

　　表1 同一头猪采集口腔液与血清样本的ELISA抗体检测结果

　　

　　3与金标准-IPT试验符合率

　　EURL参考实验室对口腔液检测非洲猪瘟病毒抗体的性能进行了评估。研究人员使用不同浓度非洲猪瘟病毒弱毒株（NH/P68）对30日龄的仔猪进行人工感染。并在感染后第0、4、8、11、14、18、21、37、44、52、58和65天采集血清和口腔液，选用OIE间接ELISA试剂盒、ID Screen非洲猪瘟口腔液抗体试剂盒和IPT试验进行检测。研究结果显示，血清样本最早可在第8天检测到非洲猪瘟病毒抗体转阳，而口腔液则最早可在第10-11天检测到抗体转阳，该结果与Luis G.（2016）发表的研究结果基本一致。且ID Screen非洲猪瘟口腔液抗体检测试剂盒与IPT试验的结果具有极高的符合率，达94.12%（见表2）。

　　表2 ELISA抗体检测与IPT结果符合率

　　4 检测成本比较

　　以3000头母猪全群采样为例，若检测口腔液样本可大大节省开支，每头猪检测成本减少3.5元，且不会过多影响场内其他区域生产。

　　

　　五、小结

　　非洲猪瘟病毒“无症状感染”猪会给猪场带来无法预估的负面效应，极大影响猪群的生产性能和经济效益。因此，尽早发现非洲猪瘟病毒阳性猪以及切断病毒在场内的传播成为关键。众多学者已指出，非洲猪瘟病毒核酸和抗体同时监测，可大大提高检出率，而口腔液作为早期诊断的风向标，不仅适合作为非洲猪瘟病毒核酸检测，而且适用于抗体检测。口腔液作为日常监测/筛查的样本，具有无创、易采集、交叉污染小、节省人力成本等特点。IDvet公司推出的ID Screen非洲猪瘟口腔液抗体检测试剂盒在国内外的实际应用中表现出极佳的性能，获得用户一致的认可与好评。同时，IDvet公司不仅提供优质的产品，而且公司拥有完善的技术服务团队为广大用户提供实验室和现场技术支持，帮助大家更好地做到精准检测，通过检测数据指导生产。

　　参考文献：

　　SUN E, ZHANG Z, WANG Z. et al. Emergence and prevalence ofnaturally occurring lower virulent African swine fever viruses in domestic pigsin China in 2020. Sci China Life Sci. 2021 May;64(5):752-765.

　　MUR L, GALLARDO C, SOLER A. et al. Potential use of oral fluid samplesfor serological diagnosis of African swine fever [J]. Veterinary Microbiology,2013,165(1/2):135-139.

　　Luis G. Et.al Detection of AfricanSwine Fever Virus Antibodies in Serum and Oral Fluid Specimens Using aRecombinant Protein 30 (p30) Dual Matrix Indirect ELISA [J]. PLoS One, 2016,11(9).

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　　重 磅 会 讯

　　2022年第31届广东畜牧兽医科技大会

　　

　　主题：新形势、高质量、谋发展

　　时间：2022年6月24-25日共计2天时间

　　地点：广东省广州市华钜君悦酒店

　　主办单位：广东省畜牧兽医学会

　　承办单位：广东省农业科学院动物卫生研究所、广东省农业科学院动物科学研究所、华南农业大学兽医学院、华南农业大学的动物科学学院、佛山科学技术学院生命科学与工程学院、广东科贸职业学院动物科技学院畜禽育种国家重点实验室、南方农村报、农财宝典、新牧网、禽业宝典

　　协办单位：农业农村部禽流感等家禽重大疾病防控重点实验室、农业农村部华南动物营养与饲料重点实验室、广东省饲料产业技术体系、《广东畜牧兽医科技》编辑部、《养禽与禽病防治》编辑部

　　铂金赞助单位：默沙东动物保健品（上海）有限公司、广州市华南农大生物药品有限公司、哈尔滨国生生物科技股份有限公司

　　视频直播金牌协办单位：佛山市正典生物技术有限公司

　　金牌协办单位：广东德兴食品股份有限公司、南京诺唯赞科技生物股份有限公司、广东永顺生物制药股份有限公司、IDvet、深圳市莱孚生物科技有限公司

　　支持协办单位：浙江伊科拜克动物保健品有限公司、广东省农装所动物防疫技术服务中心、广州迈高化学有限公司、福建农诚农牧科技集体有限公司、佛山国康检测技术有限公司

　　

　　大会拟邀请嘉宾（部分，按会场排序）

　　

　　大会闭门研讨会拟邀请单位（部分，排名不分先后）：

　　广东省农业科学院、广东省饲料产业技术体系、华南农业大学、仲恺农业工程学院、佛山科学技术学院、广东海洋大学、温氏食品集团股份有限公司、海大集团、大北农集团、广州越秀食品集团有限公司、正大康地集团、广东恒兴集团有限公司、东莞泛亚太生物科技有限公司、广东兴腾科生物科技有限公司、佛山市南海种禽有限公司、佛山新广农牧公司、河东禽业、广东天农食品集团股份有限公司、广东科贸职业学院（待续）

　　大会正在火热招商中，支持项目多样，包括：大会独家冠名、晚宴冠名、专场协办、铂金协办、金牌协办、资料袋、椅子套、嘉宾证、茶歇支持、晚宴用酒、图片直播、论文集支持、笔记本、用笔支持、洗手液支持、口罩支持等。

　　企业合作联系人

　　报名参会：

　　本会议实行报名收费制。交通费、住宿费由参会嘉宾自行负责。

　　扫“码”报名参会

　　学会个人会员800元/人，理事、监事免会务费，含大会主报告、各分会场 听课（不含闭门会议），提供大会资料，6月24日晚宴，6月25日午餐。

　　在校生200元/人，含大会主报告、各分会场听课（不含闭门会议），提供大会资料，6月25日中午简餐。

　　收款单位名称：广东省畜牧兽医学会

　　报名参会联系人：

　　认清新形势，对标高质量，创新谋发展！作为华南地区规模最大、规格最高、氛围最热的畜牧兽医行业大会，科技大会是立足华南，辐射全国，诚邀畜牧业优秀企业精英加入，一起探讨畜牧兽医的未来！