COLO 201人结直肠腺癌传代细胞

　　细胞代号：

　　 COLO 201

　　细胞名称：

　　 COLO 201人结直肠腺癌传代细胞

　　组织来源： 大肠large_intestine

　　对应疾病：腺癌adenocarcinoma

　　生长特性：

　　 

　　细胞来源：

　　从ATCC/中科院/协和医院等地引进

　　培养条件：

　　培养基：         DMEM         +10%FBS

　　气相：空气95%，二氧化碳5%

　　温度：37℃

　　培养：

　　一、贴壁细胞

　　1.用75%酒精喷洒整个瓶消毒，将其平躺置于培养箱中进行2-3小时的缓冲，.然后置于无菌操作台，打开瓶口，将其中的培养液去掉，再往其中加入5-6mL新鲜培养基并置于细胞培养箱中培养，根据细胞生长状况及培养基颜色变化对其进行换液以及传代；

　　2.待细胞长满瓶底面积80%-90%，需要对其进行传代，*次传代比例为1:2。

　　3传代步骤：将0.25%含EDTA胰酶置于37°预热，倒掉培养瓶中的培养基，往培养瓶中加入1mlPBS，轻晃洗涤后弃去。往瓶中加1ml预热好的胰酶，置于37°孵育消化（*次消化需时常取出置于显微镜下观察，以显微镜下细胞触角回收变圆、轻拍瓶壁见细胞脱落为消化时间，记录消化时间，以便于下次消化），消化好后加入1ml*培养基终止消化。用移液枪轻轻吹打瓶壁上的细胞，使之*脱落，然后收集细胞悬液，1200rpm离心3min，弃上清，加入*培养基重悬细胞，进行传代。

　　 

　　二、悬浮细胞

　　1.用75%酒精喷洒整个瓶消毒，然后置于无菌操作台，打开瓶口，轻轻吹打后，将其中的细胞悬液转移到离心管中，然后1200rpm离心3min，去上清；

　　2.将离心好的细胞转移至T-25瓶中，并加入5-6mL新鲜培养基，然后将其置于细胞培养箱中培养，根据细胞生长状况及培养基颜色变化对其进行换液（离心后去旧液，加入新鲜培养基）；

　　3.显微镜观察细胞数目比较多时，对其进行传代，*次传代比例为1:2（离心后平均分成两瓶培养）。

　　 

　　 

　　细胞总数：

　　1~3*106

　　传代周期：

　　2-3天

　　传代比例：

　　1:2~1:4

　　换液频率：

　　2-3天

　　冻存液：

　　90%FBS+10%DMSO