CoIP+WB／MS快速发现体内互作蛋白

　　做了这么多年科研的你，对IP（免疫沉淀，Immunoprecipitation），CoIP（免疫共沉淀，co-Immunoprecipitation）不陌生了吧？选购抗体，转染细胞，处理样品，跑胶，转膜，显影，新手的你有没有不堪重负？相互作用，功能验证，高手的你有没有更高更远的规划？

　　CoIP-WB/MS(免疫共沉淀联合质谱分析)服务，将两个高难度技术服务无缝衔接，解救深陷重复实验的你，把高端完美的分析结果呈现给你。

　　

　　服务介绍

　　

　　免疫共沉淀（Co-Immunoprecipitation，CoIP）是以抗体和抗原之间的专一性作用为基础的用于研究蛋白质相互作用的经典方法，用于确定两种蛋白质在完整细胞内生理性相互作用。如果一种目标蛋白是某一蛋白复合物的一部分，利用目标蛋白的特异性抗体，就可以对整个蛋白复合物进行富集。由于过程中采用了非变性条件，保留了互作及复合体的细胞内状态。相对于酵母双杂交、pull down等方法，CoIP捕获的蛋白互作发生在所研究的特定组织细胞内，保存了互作蛋白及复合体的“内源”状态。

　　CoIP-WB即免疫共沉淀与免疫印迹技术连用，可以验证诱饵蛋白与互作蛋白是否结合，再通过一系列功能实验确定某个信号通路，明确通路相关蛋白并进行验证。

　　CoIP-MS即免疫共沉淀与质谱技术联用，可以用质谱鉴定这个蛋白复合物中的其他成员，高效筛选鉴定未知互作蛋白。运用LC-MS/MS技术对Co-IP所捕获的蛋白产物进行鉴定分析，LC-MS/MS方法具有更高的灵敏度和几乎100%的可靠性，是主流文献中最常用的方法。

　　服务特色

　　

　　免疫共沉淀及质谱一体化操作，一站式解决免疫沉淀及后续实验中的问题。

　　提供世界一流品质的标签抗体，及对应的亲和免疫凝胶/磁珠，种类齐全，使用方便。

　　技术人员有多年IP/CoIP操作经验，高效专业快速。

　　高质量LC-MS/MS设备，提供极为可信的质谱结果。

　　提供完美分析结果。

　　

　　注意事项

　　

　　高品质抗体:如果抗体由客户提供，客户必须保证抗体是IP级别的，可用于IPCoIP实验。

　　充足的样本量：足够的蛋白量是免疫共沉淀的关键因素之一。一般正常蛋白量约 51645605607289147800 mg/ml, 浓度越高越好,总量用大于5ml。

　　送样要求：

　　3.1 组织：动物组织不少于400 mg；植物组织不少于2 g；离体后迅速超低温处理并-80℃冻存的组织样品，干冰运输

　　3.2 细胞：2x107个细胞，可寄送活细胞，或收细胞后去培养基干冰运输。

　　

　　实验案例

　　

　　From：COPS2 Antagonizes OCT4 to Accelerate the G2/M Transition of Mouse Embryonic Stem Cells

　　结果解读：通过免疫共沉淀和质谱分析，作者发现 COPS2 与 OCT4 和 CDK1 相互作用。并进一步证明 COPS2 仅在 OCT4 存在时才刺激 CDK1/CYCLIN B 的活性。

　　图1：转染空载质粒，COPS2-flag质粒和COPS5-flag质粒后，用flag磁珠进行CoIP实验后，对IP后蛋白进行SDS-PAGE检测，有明显差异蛋白。

　　图2：将IP后各组样本进行质谱鉴定后制备韦恩图。质谱结果显示各组鉴定到的共同互作蛋白和差异蛋白。通过质谱结果作者鉴定到了2个感兴趣的蛋白OCT4 和 CDK1，参与细胞周期的相关通路。

　　图3：通过CoIP和WB联用，证明COPS2和OCT4 / CDK1有结合作用。COPS2 与 CYCLIN B有结合，但与 CYCLIN A 无相互作用，基于这些数据，作者就假设 COPS2 调节 OCT4 和 CDK1/CYCLIN B 之间的相互作用以促进 ESC 的 G2/M 转变。后续实验也是围绕这一假设进行展开验证。

　　这篇文章也很好的阐明了通过CoIP联用质谱及WB实验，发现通路中新的蛋白，感兴趣的同学可阅读全文，获得更多研究思路。

　　#免疫共沉淀#质谱分析

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