除了荧光显微镜,显微镜还能怎样看细菌?

  显微镜能看细菌,是大部分人对显微镜的直观认知;把手放在显微镜下看细菌,是大部分小朋友的直觉操作……当然,这样可看不到细菌。那么显微镜应该怎么看细菌呢?荧光显微镜算一种方法,其他还有啥呢?今天我们就来聊聊。

  细菌

  荧光显微镜下的细菌

  先来说说专业人士是怎么看的。细菌和真菌尺寸普遍非常小,要观察它们通常需要100X高倍物镜,且必须用棉签采样制成染色的玻片样品。100X油浸物镜观察操作难度比较大,大批量检查下来非常费劲,因此目前很多医院都已经改用了荧光显微镜检测的方法。

  荧光观察下的念珠菌(红色)

  荧光染色剂可以将细菌、真菌等目标特异性染色,经过荧光显微镜激发观察,目标将会呈现明亮的荧光反应,而背景和其他无关目标将呈现为暗色到纯黑,即便用低倍物镜也能快速发现这些荧光反应,从而大大提升诊断的速度和准确性。

  不同的荧光染料可以染色不同的细菌,可以据此快速判断是否存在特定种类细菌,我们来给大家分享下一些常见的细菌在荧光显微镜下的样子。

  大肠杆菌

  大肠杆菌,上厕所不洗手可能会感染,导致腹泻。

  沙门氏菌

  沙门氏菌,生吃鸡蛋容易感染,导致食物中毒。

  结核杆菌

  结核杆菌,会导致结核病,属于呼吸道七联检之一,其他还有六种病原体也是用荧光观察进行判定的。

  新生隐球菌

  新生隐球菌,常见于鸽粪的致病真菌,对免疫力低的人能造成较大伤害。

  白念珠菌

  白念珠菌,也是常见真菌,正常人也会有少量,免疫力低可能会失控增殖进而致病。

  生物显微镜ML51(左)和ML51-N(右)

  荧光显微镜和荧光染色剂都需要相当的成本,对于一些规模较小或样品量少的医院和高校等机构,他们会选择更传统的生物显微镜,搭配革兰氏染色等明场用染色方法。

  革兰氏染色下的细菌

  革兰氏染色是使用广泛的一种细菌鉴别方法,革兰氏阳性菌染色后呈紫色,阴性菌呈红色,染色后可以清楚观察细菌型态、排列和结构特征,举几个例子。

  蜡样芽孢杆菌

  这是蜡样芽孢杆菌,呈紫色杆状,革兰氏阳性菌,可引起食物中毒、呕吐。

  肉毒杆菌

  这是肉毒杆菌,总体呈紫色,革兰氏阳性菌,其次极端有阴性反应的芽孢,呈红色,总体形状看起来像个汤匙,会产生剧毒的肉毒毒素。

  鞭毛染色法处理的细菌

  为了呈现细菌鞭毛,还有专门的鞭毛染色法,比如Leifson氏鞭毛染色法和Bailey氏鞭毛染色法,可以将鞭毛染成红色,以便生物显微镜观察。

  医院用100X物镜检查血细胞

  看完专业人士的各种厉害操作,那么对于一般人怎么看细菌呢?

  万倍放大都是误导

  这里首先要纠正一个某宝、某多多等电商平台的概念误导,不存在什么“上万倍放大的光学显微镜”。由于光学限制,一般的显微镜放大倍率上限在1000倍左右,也就是100X物镜搭配10X目镜,就到头了,使用20X目镜、X2增倍筒等只会让成像偏暗且模糊,没有意义。

  如果只是想看到细菌,其实200X放大就够了,也就是从20X物镜开始就可以看到细菌。如果想看清楚点,可以选择40X物镜。使用100X油浸物镜可以看到更丰富的细节,但这种高倍油浸物镜使用比较难,需要先学习、准备好耗材再操作。

  不过放大倍率其实都是小问题,真正难题是掌握采样、制样到革兰氏染色一系列流程,这需要一系列工具和学习、练习,90%人都过不了这一关,如果您成功学会了那么恭喜您,如果您没学会,没关系,下面还有其他方法。

  相衬观察下的支原体(小黑点

  细菌、真菌等样品未经染色时衬度很低,难以辨认,但有些方法可以提升衬度,最科学的方法是相衬观察。相衬观察需要专门的相衬物镜和相衬聚光镜,倒置显微镜通常会配备这些,正置显微镜也能通过升级相衬物镜和相衬聚光镜实现,但相衬套装通常比较贵。

  暗场下的血红细胞

  第二种思路是利用丁达尔效应,就是阳光斜照让灰尘都清晰可见的那种现象。利用这种原理观察的手段叫暗场观察,可以通过简易暗场聚光镜实现,只需在聚光镜下安装一个暗场环,ML31等生物显微镜有标配的暗场环可以选购。

  斜照明下的酵母菌

  最后介绍一个“0成本”的方法,斜照明,这种方法可以让透明样品形成强立体感,但会形成明显的色差(紫边、彩色边),同时画面亮度会不均匀。体验方法很简单,直接把手伸到阿贝聚光镜底部,将大部分光照遮住,留下边缘一条缝,一边观察一边调整手遮的位置和方向,直到你感觉效果最好。明美体视显微镜MZX100可调角度透射式底座就是利用斜照明技术,可以用于观察透明的卵母细胞等样品。

  用显微镜看细菌还真不是简单操作,不止需要显微镜产品到位,还需要使用者有足够的实操能力,如果你动手能力很差,建议直接关注明美看图就行了。对于大型医院等机构,MF31-M荧光生物显微镜还是很好的选择,快捷高效;其他机构可以考虑ML31生物显微镜搭配革兰氏染色等明场染色,或者正/倒置生物显微镜升级相衬观察;简易暗场和斜照明技术要求和成本要求相对低,但效果也相对难调好,只建议普通用户尝试。

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