天能VE

　　

　　Western Blot 样品制备要加蛋白裂解液（含有蛋白酶抑制剂），然后冰上研磨，收集于EP管，冰上裂解30min，4度12000rpm离心15min，取上清分装，即得到蛋白样品。建议直接电泳，多余的-80保存。建议分装的蛋白每支略多于一次上样量，一次性用完一支，避免反复冻融。

　　

　　ELISA样品，直接脑组织冰上匀浆，收集于EP管，同上一样离心，大约220-250ul每支分装（因为ELISA上样量基本都是每孔100ul，做复孔，每个样品2孔，就需要200ul，为了避免不够2孔，分装时要大于200ul每支），直接实验。多余的-80保存，一样避免反复冻融。不过ELISA最好少量样品进行预实验，或者查阅文献，看看大概组织里有多高浓度，选择合适的试剂盒，测量范围要与组织浓度相符。避免浓度过高测量不准，或者浓度过低，小于试剂盒最低可测浓度。

　　

　　一、目的虽然两者都是通过抗原抗体反应对蛋白质进行检测，WB主要还是定性，Elisa可以定性，也可以定量。WB所检测的一般是抗原，而Elisa抗原抗体都可以检测。WB所检测的抗原可以知道其分子量的大小，或是否是多聚体、降解产物等，一句话，WB可以确定所用抗体是与那种蛋白起作用的；而Elisa无能为力，一锅端了。二、模式WB是（抗原-抗体-二抗酶）模式进行检测；Elisa模式有多种，如（抗原-抗体-二抗酶）、（抗原-抗体-抗原酶）、（抗抗体-抗体-抗原酶）、（抗体-抗原-抗体酶）、（抗抗体-抗体-抗原-抗体酶）等等很多很多。

　　

　　三、抗体的适用性WB所适用的一抗一般是线性位点的，ELISA线性或构象型抗体都可以使用。从另一个意义上讲，WB可以做抗体是线性位点还是构象型位点的补充判定，而Elisa不行。四、灵敏度一般Elisa的灵敏度要远高于WB，这从一般酶标记物的使用浓度或待检样品的稀释度上就可以看出。五、可操作性WB一次处理量就是一块胶版，10-20个样品最多了。Elisa一块96孔板一次可以处理96个样本，可以设置多个复孔、对照、梯度样等来提高检测的可信度。WB操作常见的非特异性条带，膜本底差，显色不好等等缺点在Elisa上表现得要好得多。六、商品化度WB不管怎样，都要自己先做电泳。而Elisa有很多成熟的商品化试剂盒了，只要不怕花钱，检测要方便快捷得多。

　　样本处理和染色方法

　　

　　1 悬浮细胞的染色：将正常培养和诱导凋亡的悬浮细胞（0.5~1×106）用PBS洗2次，加入100ul Binding Buffer和FITC标记的Annexin-V（20ug/ml）10ul，室温避光30min，再加入PI（50ug/ml）5ul，避光反应5min后，加入400ul Binding Buffer，立即用FACScan进行流式细胞术定量检测（一般不超过1h）， 同时以不加AnnexinV-FITC及PI的一管作为阴性对照。2 贴壁培养的细胞染色：先用0.25%的胰酶消化，洗涤、染色和分析同悬浮细胞。3 爬片细胞染色：同上，最后用荧光显微镜和共聚焦激光扫描显微镜进行观察。

　　VE-586 转移电泳槽是用来对少量核酸及蛋白质样品进行转移电泳的装置

　　操作简便，方便环保

　　创新设计，同时可 以转印四块凝胶

　　做到一槽多用，可节省实验空间和经费

　　

　　性能特点

　　槽体采用高强度和高透明度的聚碳酸酯材料注塑成型，免除液体渗漏的困扰。

　　专用开启式转移胶架，操作方便。

　　可同时转印四块9×9cm凝胶

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