智立中特(武汉)生物科技有限公司

　　名称NE-4C（小鼠神经干细胞）(种属鉴定正确)

　　种属小鼠

　　年龄（性别）胚胎

　　组织来源大脑

　　生长特性贴壁细胞

　　细胞形态上皮细胞样

　　背景描述该细胞来源于p53基因敲除的第9天小鼠胚胎的脑泡。据报道视黄酸可诱导NE-4C细胞系分化为神经元和星形胶质细胞。

　　生物安全等级1

　　生长培养基MEM＋10%FBS＋1%P/S

　　推荐传代比例1:3-1:6

　　推荐换液频率2~3次/周

　　倍增时间~12小时

　　冻存条件冻存液：55%基础培养基+40%FBS+5%DMSO

　　温度：液氮

　　培养条件气相：空气，95%；CO2，5%

　　细胞处理：

　　1）冻存细胞的复苏：

　　将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入到含4-6mL完全培养基的离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心3-5min，弃去上清液，完全培养基重悬细胞。然后将细胞悬液加入含6-8ml完全培养基的培养瓶（或皿）中37℃培养过夜。第二天显微镜下观察细胞生长情况和细胞密度。

　　2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

　　对于悬浮细胞，传代可参考以下方法：

　　悬浮状态下生长的细胞，可以通过向培养瓶中添加完全培养基来维持细胞的生长状态，一般情况下细胞密度维持在1×105~1×106个/mL（不同细胞对密度要求不同，）可以维持细胞的正常生长。如需分瓶可以将细胞悬液收集到离心管中1000rpm，离心5min，弃去上清，补加1-2mL培养液后重悬混匀后将细胞悬液按1：2的比例分到新T25瓶中，添加6-8ml按照说明书要求配置的新的完全培养基以保持细胞的生长活力，后续传代根据实际情况按1:2~1:5的比例进行。

　　3）细胞冻存:收到细胞后建议在培养前3代时冻存一批细胞种子以备后续实验使用。