鹿茸的功效与作用优选九篇
鹿茸的功效与作用第1篇
关键词: 鹿茸;功效;临床应用;服食季节;禁忌
1 来源
为鹿科动物梅花鹿或马鹿的雄鹿未骨化密生茸毛的幼角。前者称“花鹿茸”,后者习称“马鹿茸”。味甘、咸,性温。归肾、肝经[1]。
2 功效
(1)补益气血:如香茸丸、茸桂百补丸、参茸固本丸、补天大造丸等,现代医学证实,鹿茸能促进血细胞的增值、发育和成熟,使正常家兔的红细胞、血色素和网织红细胞增加。临床上用于治疗再生障碍性贫血、血小板和白细胞减少症,以及苯中毒引起的血液病。(2)温肾壮阳:可单用研末服,或同山药浸酒服,亦可配伍人参、熟地、枸杞子等补气养血益精药同用如参茸固本丸;中成药如三鞭丸、全鹿丸、参茸卫生丸等;近代临床也多将鹿茸与淫羊藿、仙茅、巴戟天、山萸肉等益肾药配合使用。(3)强心复脉:应用于低血压及其慢性循环障碍,颇具强心升压益脑的作用,治疗肺心病缓解期和神经衰弱、植物神经功能失调等。(4)化瘀生肌:与当归、黄芪、肉桂等配伍应用于多种疾病,尤其是慢性经久不愈者,疗效更佳。(5)强筋壮骨:可单味服用,还可以与龟板、熟地、杜仲、续断、肉苁蓉、巴戟天等配伍成复方应用。(6)固崩止带:配伍当归、阿胶、乌贼骨、蒲黄等如鹿茸散;还可配伍狗脊、白莶等。(7)补肝益肾:配伍熟地、山药、山萸肉等如加味地黄丸。(8)强身抗老:使用鹿茸和人参、刺五加、黄芪等扶正药物后,机体的免疫功能得到明显的提高。
3 临床应用
(1)阳痿:以鹿茸精穴位注射(气海、关元、中极、曲骨、足三里各0.5ml,命门1ml),并辨证配合内服中药,取得较好疗效。(2)慢性腹泻:鹿茸精注射液1~2ml肌肉注射,每日或隔日1次,连用2次。治疗肾虚泄泻16例,结果痊愈12例,有效3例,无效1例。(3)遗尿症:鹿角霜60g,五味子30g,共研细末,每晚用黄酒冲服6g。(4)再生障碍性贫血、血小板减少症:取鹿茸内骨髓,用白酒浸渍制成20%的鹿茸血酒,口服10ml,每日3次。(5)乳腺增生症:将鹿花盘制成针剂肌肉注射,于月经前10~15天用药,每次2ml,每日2次,至月经来潮时停药,观察86例,有效率87.2%。(6)脑部外伤、头颈部外伤后遗症:每天肌肉注射1ml鹿茸精。(7)原发性和直立性低血压症:肌肉注射鹿茸精1ml,每日1次,20ml为1个疗程。(8)自主神经失调症:每日皮下注射鹿茸精1ml,20ml为1个疗程,效果非常显著。(9)振动病:鹿茸精每日皮下注射1ml,总用量16~28ml治疗后,症状明显改善。(10)更年期综合征:鹿茸精治疗更年期障碍和内分泌失调,总有效率达76%~80%。(11)老年性骨质疏松症:鹿茸治疗老年性骨质疏松症可取得良好效果。(12)小儿发育不良:单用鹿茸研末,每次吞服1~2.5g。亦可用鹿茸、牡丹皮、泽泻各15g,牛膝、云苓、山药各24g,山茱萸30g,熟地黄45g研末,炼蜜为丸,如梧桐子大,每次口服15~20丸,每天2次。(13)其他:鹿茸精对胆石症、高脂血症、甲状腺机能低下症、急性胃炎、内脏神经官能症、风湿性关节炎、肝硬化症和胃溃疡等疾病引起的头痛、头重、眩晕、低血压、倦怠、食欲不振等症状均有改善作用。此外,鹿茸精配合脑神经外科治疗,可改善病人诸种精神症状。
4 服用季节
(1)夏日食鹿茸—美肤:夏为冬之始,要进补打好根基,最好由夏季开始。注意事项:鹿茸壮阳火,身体带热或者极度阴虚者不宜服用。(2)秋冬季服鹿茸—适宜:霜降后为服用鹿茸最佳节令。适用于阳痿、滑精、腰酸软弱、小便频数、头晕、耳鸣、女子虚寒崩漏带下及虚损赢瘦等症。注意事项:体实、病重者遵医嘱用。凡发热、风寒外感未除者,阳盛身体壮实者,高血压患者不宜服用。服鹿茸1周内禁食猪血、生萝卜及生冷食物。
5 服食宜忌
鹿茸固然属补精填髓的补益佳品,但服食不善,往往易发生吐血、衄血、尿血、目赤、头晕、中风昏厥等症。因此不能妄施滥投,必须因人、因证而施。
5.1 不宜服用 (1)外感疾病不宜服用。(2)有“五心烦热”症状、阴虚的人。(3)内有实火者。(4)有高血压症,头晕、走路不稳,脉眩易动怒而肝火旺的人。(5)经常流鼻血,或女子行经量多、血色鲜红、舌红脉细,表现是血热的人。
5.2 进补鹿茸及各种鹿茸制剂的禁忌 (1)服用鹿茸时忌喝茶、吃萝卜,尽量不要服用含莱菔子、谷芽、麦芽和山楂等中药。(2)不宜与水杨酸类同用。(3)不宜与奎宁同用。(4)不宜与甲苯磺丁脲、氯磺丙脲、苯乙双胍等降糖药同用[2]。
【参考文献】
鹿茸的功效与作用第2篇
为鹿科动物梅花鹿或马鹿的雄鹿未骨化密生茸毛的幼角。前者称“花鹿茸”,后者习称“马鹿茸”。味甘、咸,性温。归肾、肝经[1]。
2功效
(1)补益气血:如香茸丸、茸桂百补丸、参茸固本丸、补天大造丸等,现代医学证实,鹿茸能促进血细胞的增值、发育和成熟,使正常家兔的红细胞、血色素和网织红细胞增加。临床上用于治疗再生障碍性贫血、血小板和白细胞减少症,以及苯中毒引起的血液病。(2)温肾壮阳:可单用研末服,或同山药浸酒服,亦可配伍人参、熟地、枸杞子等补气养血益精药同用如参茸固本丸;中成药如三鞭丸、全鹿丸、参茸卫生丸等;近代临床也多将鹿茸与淫羊藿、仙茅、巴戟天、山萸肉等益肾药配合使用。(3)强心复脉:应用于低血压及其慢性循环障碍,颇具强心升压益脑的作用,治疗肺心病缓解期和神经衰弱、植物神经功能失调等。(4)化瘀生肌:与当归、黄芪、肉桂等配伍应用于多种疾病,尤其是慢性经久不愈者,疗效更佳。(5)强筋壮骨:可单味服用,还可以与龟板、熟地、杜仲、续断、肉苁蓉、巴戟天等配伍成复方应用。(6)固崩止带:配伍当归、阿胶、乌贼骨、蒲黄等如鹿茸散;还可配伍狗脊、白莶等。(7)补肝益肾:配伍熟地、山药、山萸肉等如加味地黄丸。(8)强身抗老:使用鹿茸和人参、刺五加、黄芪等扶正药物后,机体的免疫功能得到明显的提高。
3临床应用
(1)阳痿:以鹿茸精穴位注射(气海、关元、中极、曲骨、足三里各0.5ml,命门1ml),并辨证配合内服中药,取得较好疗效。(2)慢性腹泻:鹿茸精注射液1~2ml肌肉注射,每日或隔日1次,连用2次。治疗肾虚泄泻16例,结果痊愈12例,有效3例,无效1例。(3)遗尿症:鹿角霜60g,五味子30g,共研细末,每晚用黄酒冲服6g。(4)再生障碍性贫血、血小板减少症:取鹿茸内骨髓,用白酒浸渍制成20%的鹿茸血酒,口服10ml,每日3次。(5)乳腺增生症:将鹿花盘制成针剂肌肉注射,于月经前10~15天用药,每次2ml,每日2次,至月经来潮时停药,观察86例,有效率87.2%。(6)脑部外伤、头颈部外伤后遗症:每天肌肉注射1ml鹿茸精。(7)原发性和直立性低血压症:肌肉注射鹿茸精1ml,每日1次,20ml为1个疗程。(8)自主神经失调症:每日皮下注射鹿茸精1ml,20ml为1个疗程,效果非常显著。(9)振动病:鹿茸精每日皮下注射1ml,总用量16~28ml治疗后,症状明显改善。(10)更年期综合征:鹿茸精治疗更年期障碍和内分泌失调,总有效率达76%~80%。(11)老年性骨质疏松症:鹿茸治疗老年性骨质疏松症可取得良好效果。(12)小儿发育不良:单用鹿茸研末,每次吞服1~2.5g。亦可用鹿茸、牡丹皮、泽泻各15g,牛膝、云苓、山药各24g,山茱萸30g,熟地黄45g研末,炼蜜为丸,如梧桐子大,每次口服15~20丸,每天2次。(13)其他:鹿茸精对胆石症、高脂血症、甲状腺机能低下症、急性胃炎、内脏神经官能症、风湿性关节炎、肝硬化症和胃溃疡等疾病引起的头痛、头重、眩晕、低血压、倦怠、食欲不振等症状均有改善作用。此外,鹿茸精配合脑神经外科治疗,可改善病人诸种精神症状。
4服用季节
(1)夏日食鹿茸—美肤:夏为冬之始,要进补打好根基,最好由夏季开始。注意事项:鹿茸壮阳火,身体带热或者极度阴虚者不宜服用。(2)秋冬季服鹿茸—适宜:霜降后为服用鹿茸最佳节令。适用于阳痿、滑精、腰酸软弱、小便频数、头晕、耳鸣、女子虚寒崩漏带下及虚损赢瘦等症。注意事项:体实、病重者遵医嘱用。凡发热、风寒外感未除者,阳盛身体壮实者,高血压患者不宜服用。服鹿茸1周内禁食猪血、生萝卜及生冷食物。
5服食宜忌
鹿茸固然属补精填髓的补益佳品,但服食不善,往往易发生吐血、衄血、尿血、目赤、头晕、中风昏厥等症。因此不能妄施滥投,必须因人、因证而施。
5.1不宜服用(1)外感疾病不宜服用。(2)有“五心烦热”症状、阴虚的人。(3)内有实火者。(4)有高血压症,头晕、走路不稳,脉眩易动怒而肝火旺的人。(5)经常流鼻血,或女子行经量多、血色鲜红、舌红脉细,表现是血热的人。
5.2进补鹿茸及各种鹿茸制剂的禁忌(1)服用鹿茸时忌喝茶、吃萝卜,尽量不要服用含莱菔子、谷芽、麦芽和山楂等中药。(2)不宜与水杨酸类同用。(3)不宜与奎宁同用。(4)不宜与甲苯磺丁脲、氯磺丙脲、苯乙双胍等降糖药同用[2]。
【参考文献】
鹿茸的功效与作用第3篇
摘 要:以鹿茸菇为试材,以工厂化生产常用原材料为基础,设计五种配方,研究鹿茸菇在其中的菌丝生长情况和栽培单产,筛选出适合鹿茸菇工厂化生产的栽培配方。结果表明:配方3即木屑30%、玉米芯24%、棉籽壳5.5%、麸皮27%、米糠3%、大豆皮5%、增产剂5%、碳酸钙0.5%的配方为最适宜的工厂化生产配方。
关键词:鹿茸菇;工厂化生产;配方
鹿茸菇(Lyophyllum decastes),在分类学上属于植物界(Plant kingdom),真菌门 (Eumycota),层菌纲(Hymenomycetes),伞菌目 (Agaricales),白蘑科(Tricholomataceae),离褶伞属(Lyophyllum)。它是一种味道鲜美的食用菌,学名珊瑚菌,子实体直立,向上分叉成丛生的细枝,肉质,一般高数厘米至10余厘米,状如扫帚或珊瑚,又像幼小的鹿角,故名。研究表明鹿茸菇子实体中粗蛋白、氨基酸的含量较高,脂肪含量较低;而且还含有对人体有益的微量元素锌、铜和硒及大量的维生素和烟酸,具有很高的营养价值。据现代科学研究表明,鹿茸菇含有的β葡萄糖,L期食用有抗肿瘤的功效,同时,鹿茸菇具有降血压、降低胆固醇、抗糖尿病、抗过敏等药用作用,能滋补强壮,扶正固本,增强免疫,延缓衰老的功效。目前对鹿茸菇的栽培研究较少,大多只集中在生物学特性上。
1 材料与方法
1.1供试菌株
鹿茸菇菌株092,由上海光明森源生物科技有限公司研发部菌种保藏中心提供。
1.2培养基
试管种用PDA培养基(PDA粉/3.9g,琼脂/0.1g,蒸馏水/100mL),摇瓶种(K2HPO4?3H2O/0.3g,KH2PO4/0.15g,MgSO4/0.15g,糖/6g,蛋白胨/1.5g,玉米粉/0.6g,豆粕粉/0.6g,蒸馏水/300mL),21℃培养箱培养,7天后待用。
1.3不同培养料配方对鹿茸菇生长的影响
1.3.1试验方法与设计
根据鹿茸菇对不同原材料的利用特性,改变配方中不同原材料的配比,调节主料和辅料的组合,每个配方装瓶3筐,共48瓶,试验重复4次。具体配方详见表1。
鹿茸菇(Lyophyllum decastes),在分类学上属于植物界(Plant kingdom),真菌门 (Eumycota),层菌纲(Hymenomycetes),伞菌目 (Agaricales),白蘑科(Tricholomataceae),离褶伞属(Lyophyllum)。它是一种味道鲜美的食用菌,学名珊瑚菌,子实体直立,向上分叉成丛生的细枝,肉质,一般高数厘米至10余厘米,状如扫帚或珊瑚,又像幼小的鹿角,故名。研究表明鹿茸菇子实体中粗蛋白、氨基酸的含量较高,脂肪含量较低;而且还含有对人体有益的微量元素锌、铜和硒及大量的维生素和烟酸,具有很高的营养价值。据现代科学研究表明,鹿茸菇含有的β葡萄糖,长期食用有抗肿瘤的功效,同时,鹿茸菇具有降血压、降低胆固醇、抗糖尿病、抗过敏等药用作用,能滋补强壮,扶正固本,增强免疫,延缓衰老的功效。目前对鹿茸菇的栽培研究较少,大多只集中在生物学特性上。
1 材料与方法
1.1供试菌株
鹿茸菇菌株092,由上海光明森源生物科技有限公司研发部菌种保藏中心提供。
1.2培养基
试管种用PDA培养基(PDA粉/3.9g,琼脂/0.1g,蒸馏水/100mL),摇瓶种(K2HPO4?3H2O/0.3g,KH2PO4/0.15g,MgSO4/0.15g,糖/6g,蛋白胨/1.5g,玉米粉/0.6g,豆粕粉/0.6g,蒸馏水/300mL),21℃培养箱培养,7天后待用。
1.3不同培养料配方对鹿茸菇生长的影响
1.3.1试验方法与设计
根据鹿茸菇对不同原材料的利用特性,改变配方中不同原材料的配比,调节主料和辅料的组合,每个配方装瓶3筐,共48瓶,试验重复4次。具体配方详见表1。
2.2不同培养料配方对鹿茸菇子实体产量、品质及生物学转化率的影响
由表3可知,5组配方对子实体的产量、品质和生物学转化率有一定的影响。其中,不同配方的子实体平均单产依次是3〉4〉5〉2〉1,配方3的单产最高为315.7g;生物学转化率也是最高为116.1%;且配方3品质相对较好,紧实度、整齐度均良好,菇帽颜色也偏深、圆整,菇柄偏长等在5个配方中,也具有明显的优势。通过对不同培养料栽培鹿茸菇的产量进行方差分析,F=260.06〉F(0.01)5.99,说明鹿茸菇单产与不同配方的培养料呈极显著差异。
3. 结论
试验结果表明,以木屑、玉米芯、棉籽壳、麸皮、米糠和大豆皮为原料,通过调节不同原料的配比,对鹿茸菇的菌丝生长、产量、品质都有一定的影响。鹿茸菇菌丝生长较好的配方是木屑含量相对较高的为配方3。这是因为一方面菌丝利用木质素较容易,另一方面,木屑含量高增加了培养基内的孔隙度,利于菌丝快速长满瓶。通过5组试验配方比较,配方3的鹿茸菇子实体单产最高,且生物学转化率也最高,是适合工厂化生产使用的配方。同时,该配方也缩短了整个栽培周期,提高了企业库房的利用率。
参考文献
[1]尚启. “闻香松口蘑 食味鹿茸菇”――上海福茂公司三万公斤鹿茸菇投放市场[J]. 上海企业,2014,01:82.
[2]程继红. 名贵食药用菌鹿茸菇商业化生产现状与发展前景[J]. 食药用菌,2014,04:194-197.
[3]魏雨恬,冯娜,张劲松,韩伟. 荷叶离褶伞子实体有机溶剂萃取物的化学成分和抗肿瘤活性[J]. 食用菌学报,2016,02:70-74.
[4]曹栩滢,孙占刚. 上海食用菌产业现状及发展对策[J]. 食用菌,2015,05:8-10
鹿茸的功效与作用第4篇
【关键词】 鹿茸;神经生长因子;多肽
鹿茸(Cornu Cervi Pantotrichum)为雄鹿未骨化密生茸毛的幼角,是哺乳动物唯一可再生的组织,伴随着其骨质的生长,神经组织亦有所增长,故鹿茸中应存在一定量能够促进神经生长的物质,鹿茸化学成分含有17种以上的氨基酸,多种生物酶及神经生长因子(NGF)、表皮生长因子(EGF)、胰岛素样生长因子(NGF)、转化生长因子(TGF)等多种活性物质〔1,2〕。鹿茸每年再生,神经的生长速度约为1 cm/d,目前控制鹿茸神经生长的机制尚不清楚,但一些物质对其神经再生发挥了重要作用〔3〕。鹿茸可分为花鹿茸(黄毛茸)和马鹿茸(青毛茸)两种;又由于采收方法不同可分为砍茸与锯茸二种;也可根据枝叉多少及老嫩不同,分为鞍子、二杠、挂角、三岔、花砍茸、莲花等多种。现对鹿茸中促神经生长因子作一综述。
1 NGF
NGF是其家族的代表,它具有神经元营养和促突起生长双重生物学功能,对中枢及周围神经元的发育、分化、生长、再生和功能特性的表达均具有重要调控作用。NGF包含α、β、γ三个亚单位,活性区是β亚单位,由两个118个氨基酸组成的单链通过非共价键结合而成的二聚体,生物效应也无明显的种属特异性。Li等〔4〕利用Northern印迹杂交及原位杂交技术研究表明,新生马鹿鹿茸中存在NGF mRNA,且主要存在于新生鹿茸的动脉和小动脉的平滑肌内。再生的神经轴突沿主要血管分布,NGF可以激发和维持血管发生,且该作用体现在神经轴突之前,因此可以认为NGF在鹿茸感觉神经元的生长过程中发挥了重要作用。神经营养素3(NT3)是NGF家族中的重要一员,Garcia等〔5〕利用RTPCR技术检测发现在马鹿鹿茸顶部的表皮层细胞中NT3 mRNA表达量最高,在软骨层细胞表达最低,其分布特点与神经组织的分布情况一致。
对鹿茸NGF结构和功能的研究,我国科研工作者做了有益的尝试,但都还没有分离纯化得到鹿茸NGF的纯品。霍玉书等〔6〕从冻干的鹿茸中将分子量10 kD以上的组分分离,发现有明显的NGF样作用及促分化作用,能促进鸡胚背跟神经节突起的生长,促进PC12细胞的分化。Huo等〔7〕从新鲜的未成熟的梅花鹿的鹿茸中提取了NGF样物质,与已知的NGF相比,在刺激神经纤维的生长,诱导分化期细胞形态的的变化以及影响PC12细胞的分化等方面都表现出了很多相似的生物活性。郝琳琳等〔8〕采用醋酸和乙醇提取了马鹿茸主干顶部、中部、根部3个部位的多肽,利用Western印迹分析出不同部位确实含有NGF,ELISA实验结果提示鹿茸NGF的含量从其顶部到根部递减。大量事实证明,鹿茸NGF在其顶部表皮含量最高,是提取NGF较理想的部位。我们从梅花鹿鲜鹿茸中分离得到促神经生长物质,能够促进PC12细胞分化,经Western技术分析鉴定为NGF。总之,现有研究已表明,鹿茸中存在着NGF,但如何使用恰当的方法,分离纯化出其有生物活性的单一组分,并研究其分子结构和功能调控,仍需要进一步探索。
2 促神经生长的蛋白及多肽
除了研究较为明确的NGF外,鹿茸中的许多物质也具有促进神经生长的作用。鹿茸中的粗蛋白占干重的50%以上,已有从鹿茸中分离出粗蛋白和粗多肽的相关报道。严铭铭等〔9,10〕将梅花鹿鹿茸蛋白通过色谱柱分离纯化,得到了3种组分,分别为67 kD的CNTPⅠ、44 kD的CNTPⅡ和24 kD的CNTPⅢ,其中CNTPⅢ具有促进小鼠海马神经细胞(HT22)增殖的作用。此后,又分离出多肽CNT14(分子量约为1.5 kD)对HT22细胞株的增殖具有特异性,提示多肽CNT14可能在治疗神经系统损伤性疾病和阿尔茨海默病中发挥重要作用。吉林大学陈东等〔11〕从12~14 d胚胎大鼠分离获得大量神经干细胞,加入不同浓度的鹿茸多肽(pilose antler peptide,PAP)后,可明显促进神经干细胞向神经元的分化,为鹿茸多肽在治疗神经系统损伤性疾病中的应用提供了理论依据。
鹿茸多肽含有丰富氨基酸,可以促进轴浆蛋白质和RNA合成,可能机制为鹿茸多肽具有扩张营养神经和血管功能,改善损伤神经的外环境,防止神经元坏死,促进神经早期再生。李立军等〔12〕从鹿茸中提取分子量为2~10 kD多肽对大鼠坐骨神经损伤后神经再生的影响进行了研究,经组织学检查和超微结构的观察,证实鹿茸多肽能促进神经再生及功能恢复。冷向阳等〔13〕发现鹿茸多肽对脊髓损伤具有良好的修复作用,确定了鹿茸多肽可以抑制损伤早期的细胞凋亡,为鹿茸多肽在神经修复方面提供了理论依据。
3 其他促神经生长物质
外源性神经节苷脂(gangliosides,GLS)是一种“神经病变修复药物”,可促进受损神经功能的恢复,所以神经节苷脂可以用于治疗多种病因引起的神经病变。高越等〔14〕从梅花鹿鹿茸中成功分离GM4,GM3和GD33种神经节苷脂成分,含量分别为24.4%、46.2%和29.4%。神经节苷脂是细胞膜脂质中微量成分。目前,对其生物学功能的研究日益受到重视,诸如细胞识别、黏连、分化、发育及生长均与其有关。研究表明,将鹿茸神经节甙酯注射给小鼠,发现其对小鼠记忆获得,记忆再现,记忆巩固三个不同记忆阶段均有明显的促进作用,使记忆障碍得到明显改善,对记忆破坏药物有显著的对抗作用〔15〕。
神经干细胞的临床应用为患者带来了福音,但其来源存在着伦理学的问题。赵汉宁〔16〕利用鹿茸精诱导大鼠骨髓间充质干细胞分化为神经样细胞,经3 h诱导,大部分细胞分化为神经样细胞,出现胞体和突起,免疫细胞化学染色神经细胞特异性烯醇化酶(NSE)及Nestin呈阳性,神经细丝酸性蛋白(GFAP)呈阴性,这为神经细胞的替代治疗做了前期工作。
随着对鹿茸相关研究的深入,应用现代分子生物学技术,分离纯化出鹿茸多肽及相关因子的单一组分,筛选出鹿茸中的促神经生长物质,将成为研究的热点。利用细胞工程技术大规模培养鹿茸细胞,提取鹿茸细胞中促神经生长物质,进行分子结构和生物学功能的研究,以期获得大量的促神经生长物质,对老年性神经系统退行性疾病的治疗将产生重大意义。
参考文献
1 傅 雷,孙艺平,赵心宇,等.鹿茸的化学成分以及药理作用的研究进展〔J〕.时珍国医国药,2007;18(4):8056.
2 崔昊震,尹明浩.鹿茸生长因子的研究现状〔J〕.延边大学学报,2006;29(1):702.
3 Price JS,Allen S,Faucheux C,et al.Deer antlers:a zoological curiosity or the key to understanding organ regeneration in mammals〔J〕?J Anat,2005;207(5):60318.
4 Li C,Stanton JA,Robertson TM,et al.Nerve growth factor mRNA expression in the regenerating antler tip of red deer (Cervus elaphus)〔J〕. PLoS ONE,2007;2(1):e148.
5 Garcia RL,Sadighi M,Francis SM,et al.Expression of neurotrophin3 in the growing velvet antler of the red deer Cervus elaphus〔J〕.J Mol Endocrinol,1997;19(2):17382.
6 霍玉书,霍 红.鹿茸神经生长因子活性及促分化作用的研究〔J〕.中药新药与临床药理,1997;8(2):7982.
7 Huo Y,Schirf VR,Winters WD.The differential expression of NGFSlike substance from fresh pilose antler of Cervus nippon Temminck〔J〕. Biomed Sci Instrum,1997;33():5413.
8 郝琳琳,刘松财,张明军,等.鲜马鹿茸不同部位多肽的提取及含量比较〔J〕.吉林农业大学学报,2007;29(4):37880,383.
9 严铭铭,曲晓波,钟英杰,等.梅花鹿鹿茸中促进海马神经细胞增殖蛋白的分离纯化〔J〕.中草药,2007;38(8):11637.
10 严铭铭,曲晓波,王 旭,等.梅花鹿茸中活性多肽的纯化、测序及功能研究〔J〕.高等学校化学学报,2007;28(10):18936.
11 陈 东,孟晓婷,刘佳梅,等.鹿茸多肽对胎大鼠脑神经干细胞体外诱导分化的实验研究〔J〕.解剖学报,2004;35(3):2403.
12 李立军,路来金,陈 雷,等.鹿茸多肽促进大鼠坐骨神经再生的实验研究〔J〕.辽宁中医杂志,2004;31(4):3434.
13 冷向阳.鹿茸多肽对脊髓损伤大鼠的保护作用及其机制研究〔C〕.中国博士学位论文全文数据库.
14 高 越,尹一子,李子健,等.鹿茸中神经节苷脂的成分研究〔J〕.吉林医学,2004;12(25):378.
鹿茸的功效与作用第5篇
无论是网购还是实体店铺去买,都是有可能买到假货的,更别说有时常在地摊上看到的灵芝、鹿茸等等。
接下来,让浙江省食品药品检验研究院中药室郭增喜副主任给大家介绍如何辨别野山参、鹿茸、冬虫夏草、燕窝和灵芝等常用的贵重滋补药材,如何防止买错用错。
百草之王――人参
按生长环境不同分野生人参和栽培人参,野生人参又称野山参、林下山参或移山参,在山野林下生长十多年以上,有的达到几十年:栽培人参又称园参,人工播种种植于田园地里,生长期一般为五年。野生人参因生长年份长,资源稀少而价格昂贵,是人们冬令进补或挑选礼品的首选。
功效
本品具有补气健脾、安神益智作用,适用于元气亏损、体虚乏力、惊悸失眠、心力衰竭等症;是五加科植物人参的根,产于东北及与其接壤的俄罗斯和朝鲜等地。
鉴别要点
野生人参的鉴定要点是芦头长,芦碗多,年份长的下部可见圆芦,参体外皮细腻光洁,肩部有细密而深的环纹,须根清疏而长。选购时还要注意区别于园参,并注意有无插接、雕刻等制假行为。
东北三宝之一――鹿茸
为梅花鹿或马鹿雄鹿幼嫩的角,表现为密生茸毛而未骨化,主产东北地区,为人工圈养。其中,马鹿较梅花鹿个头粗大。鹿茸如果未及时采割,会进一步生长,外表茸毛脱落而骨化就形成了鹿角。
功效
本品有壮肾阳、益精血作用,适用于元气亏伤、肾阳虚衰、畏寒等症状。
鉴别要点
商品分原个头的鹿茸和已加工切片供配方使用的鹿茸片。原个头的鹿茸比较容易识别,挑选有茸毛的幼嫩的鹿角就行,但鹿茸片比较复杂,有鹿角片混杂,也有制假情况,要注意鉴别。
1、梅花鹿体表有花斑,马鹿形体较高大。鹿茸表面有毛茸,鹿角外表光滑。
2、鹿茸切片鉴定要点:表面有茸毛,断面腊质(血片)或粉性(粉片),外周未骨化。其中近角尖端的切片为腊片,断面质地致密呈腊质状;中下段为粉片,断面白色粉性,有疏松的细小裂隙。如果茸毛脱落呈光滑状,断面已有较厚的骨质层,中间裂隙粗大,只能作为鹿角使用,鹿角的功效与鹿茸有区别,不能混用。制假的鹿茸片是用鹿等动物皮毛包裹后切片制作,放水中浸泡后会出现皮部分离的现象。
雪域奇珍――冬虫夏草
为冬虫夏草菌寄生于蝙蝠蛾幼虫后,从虫子头部生出的真菌子座与寄主蝙蝠蛾幼虫的复合体。产于青海、等海拔达3500米以上的高原。
功效
本品具有补肺益肾之功效,可用于久咳虚喘等症。
鉴别要点
购买时要注意区别于亚香棒虫草、新疆虫草等混淆品,防止用淀粉、石膏等压模做成的假虫草和用植物块根冒充的假虫草,还要注意有无用竹签等插接、用泥土增重等行为,并注意与人工培养的北虫草(虫草花)相区分。
1、正品冬虫夏草的特点:同时具有虫子及其寄生真菌的子座(习称草)二个部分:虫子体表具有很多环纹,腹部有8对足,其中中间4对比较明显;子座黑褐色,上部有时膨大,表面有较多瘤点,有时可见尖长的不孕顶部。
2、亚香棒虫草的特点:虫子的环纹和足不明显,子座顶部常膨大,但无不孕顶端,表面无瘤点。新疆虫草的特点是只有虫子而无子座。
3、人工压模制作的假虫草是用面粉和石膏等为材料,通过模具压模制作而成;植物冒充的假虫草一般是用唇形科植物地笋的块根,该品在酱菜中作为螺丝菜食用较多。
4、北虫草:系人工培养虫草,又称虫草花,为经固体培养基接种长出的北虫草子座,分枝条状,黄棕色,味鲜美似草菇类。
药食两用补品――燕窝
金丝燕用其唾液做成的窝巢,产于印度尼西亚、泰国等东南亚的沿海地区。按生态环境划分,野生于悬崖峭壁山洞内者称“洞燕”,饲养于屋檐下的称“屋燕”;按色泽分,白色的称“白燕”或“官燕”;带有较多羽毛的称“毛燕”。
功效
本品具有补气养阴作用,适用于虚损咳喘、喉咙干燥的症状。
鉴别要点
购买时要注意区分不同的规格,还要注意防止水分太多的增重以及用淀粉胶水粉刷的增重行为等,尽量不去购买断碎品,防止被掺假。
燕窝的特点:呈凹陷的窝状,内面形成丝瓜络样:有羽毛黏附其中:水中浸泡后软化而散开呈粉丝状,有弹性可挑起而不易碎断;长时间煎炖后能溶化于水。
集天地精华――灵芝
为多孔菌科真菌赤芝或紫芝的子实体,多寄生于树木上。分野生品和栽培品两类,以栽培品为主。赤芝呈紫红色,苦味明显;紫芝紫黑色,味略淡。
功效
本品具有安神益气、止咳等作用。
鉴别要点
鹿茸的功效与作用第6篇
1实验方法
1.1马鹿茸干品总肽粗品的制备马鹿茸干品经50%乙醇浸泡1w,切片,37℃烘干。称取60g鹿茸切片,粉碎成粉末,5mmol/LHAc-NaAc(pH3.5)缓冲溶液900mL浸提,4℃磁力搅拌16h。10000r/min离心20min,收集上清,40%的乙醇沉淀,4℃静置3h。10000r/min离心20min,收集上清,经0.45μm滤膜过滤,滤液35℃下旋转蒸发浓缩至300mL,加去离子水至900mL复溶,0.45μm滤膜过滤,得马鹿茸干品总肽溶液,冻干后为鹿茸总肽粗品。
1.2马鹿茸多肽分离纯化及分子质量测定将总肽溶液经10000MWCO(PES)超滤膜包超滤,透过液再用5000MWCO(PES)超滤膜包截留浓缩,得Mr5000~10000组分。该组分经Superdex30凝胶层析柱、C18反相柱。分离所得多肽Mr委托中国科学院上海生命科学研究院生物化学和细胞生物学研究所蛋白质组研究分析中心采用MALDI-TOFMS测定。
1.3马鹿茸总肽体内降糖作用的研究
1.3.1小鼠糖尿病模型的建立[11]60只雄性C57BL/6J小鼠(6~8w)根据体重随机分为正常对照组和造模组,正常对照组小鼠给予基础饲料,造模组小鼠给予高脂饲料喂养,实验前适应性喂养lw。夜间禁食不禁水10h,造模组小鼠给予ipSTZ(50mg/kg,4℃避光保存;用10mmol/L的柠檬酸缓冲液在冰浴下配制成1%STZ溶液,调至pH4.5,现用现配),其他动物给予相应体积柠檬酸缓冲液。连续给药7d。给药结束1w后,夜间禁食不禁水10h,检测各实验组的空腹血糖,血糖≥16.5mmol/L者造模成功。
1.3.2马鹿茸总肽对糖尿病小鼠血糖的影响将造模组小鼠随机分为5组:糖尿病模型组(ip等体积生理盐水),阳性药对照组(二甲双胍200mg/kg灌胃),鹿茸总肽高(300mg/kg),中(150mg/kg),低(75mg/kg)剂量组。正常对照组ip等体积生理盐水。盐酸二甲双胍和鹿茸总肽按所要求的剂量分别溶于生理盐水,动物摄食、饮水自由。阳性对照组每天定时灌胃一次,其余各组小鼠每天定ip一次,持续给药5w,每周眼眶取血进行空腹血糖值的测定,监测给药后小鼠空腹血糖水平。
1.4鹿茸多肽DAP对STZ损伤的胰岛β细胞修复的影响[12]RINm5f细胞用含10%胎牛血清的RPMI-1640培养基,37℃,5%CO2培养。0.25%胰蛋白酶消化,每3d按1∶4的比例传代。将对数生长期的RINm5f细胞调整浓度为106个/mL,每孔100μL铺于96孔板中,37℃,5%CO2培养至细胞完全贴壁。吸去孔中培养液,加入100μL无血清培养基配制的4mmol/LSTZ损伤4h。正常对照组加入100μL无血清培养基。设空白对照组、模型组、阳性药对照组(Exendin-4终浓度20nmol/L)、DAP组(2,20,200nmol/L),每组设5个复孔。给药48h后,MTT法检测细胞存活率,考察不同浓度DAP对STZ损伤后胰岛β细胞的修复作用。
1.5数据处理实验数据以x珋±s表示,用Excel软件统计分析,t检验进行组间比较,P<0.05认为具有显著性差异,P<0.01认为具有极显著性差异。
2实验结果
2.1粗品的提取将马鹿茸干品采用醋酸缓冲液提取、醇沉、旋蒸浓缩和冻干,得到粗品,为淡黄色粉末,BCA法测定蛋白含量,BSA作标准曲线,计算得到回归方程为:y=0.001x+0.0044(R2=0.9984)。测得收率为7.4‰。
2.2马鹿茸多肽纯化及相对分子质量测定多肽粗品经过超滤分离、分子筛层析、反相层析纯化获得一个多肽组分,命名为DAP,采用MALDI-TOFMS测定DAP分子质量,DAP在质谱图上呈现明显的分子离子峰,Mr为7214.36。
2.3马鹿茸总肽对糖尿病小鼠空腹血糖水平的影响马鹿茸总肽对糖尿病小鼠空腹血糖水平的影响如图1所示,STZ造模7d后,小鼠空腹血糖水平迅速上升,糖尿病模型组空腹血糖量在2~7w内稳定在17.5mmol/L左右,表明模型建立成功且稳定。随着给药时间的延长,鹿茸总肽低、中、高剂量组空腹血糖量与糖尿病模型组比较均有所降低,且有较好的剂量依赖性,其中高剂量组降血糖效果与阳性药对照组相仿。3.4DAP对STZ损伤的胰岛β细胞修复的影响DAP对损伤的胰岛β细胞修复的影响如图2所示,模型组细胞数目较正常对照组显著减少(P<0.01),表明STZ损伤模型造模成功。与模型组比较,DAP低、中、高剂量组均表现出显著地促进损伤RINm5f细胞修复活性。
3讨论
鹿茸的功效与作用第7篇
人参+酒补气虚
中医认为,人参性温,味甘、微苦,入脾、肺两经,具有大补元气的功效。现代药理研究表明,人参中含有的主要有效成分人参皂甙和黄酮类物质,具有抗衰老、提高免疫力、调节血脂、防止血管硬化等作用。
推荐——人参酒:将人参切成段或薄片,浸入优质白酒中,加盖密封,置于阴凉处,每日振摇1次,浸泡7天后饮用。具有大补元气、补脾益肺、安神益智的功效,尤适用于久病气虚、脾肺不足者。
阿胶+芝麻补血虚
中医认为,阿胶性平味甘,入肺、肝、肾三经,以滋阴养血著称。历代医家视阿胶为妇科良药,对调治各种妇科病有独特功效,尤得女士们青睐。
推荐——阿胶冰糖煲芝麻:取阿胶500克,浸在1500毫升黄酒内,待胶块呈海绵状时,隔水蒸成液体,趁热加冰糖1000克,当糖与胶融为一体时,加入炒熟的黑芝麻及敲碎的核桃仁各适量,制成黏稠膏滋,每日早晚各取1~2匙,温开水冲服。
鹿茸+小米补阳虚
李时珍在《本草纲目》中称:“鹿茸能生精补髓、养血益阳、强筋健骨,治一切虚损……”现代药理研究表明,鹿茸含多种氨基酸、骨胶原、蛋白质和矿物质,具有滋补、强壮的作用,服用后可使人精力充沛。
推荐——鹿茸小米粥:将鹿茸研为细末,每次取1克,放小米粥内服用。鹿茸性温,味甘、咸,入肝、肾两经,具有补肾壮阳的功效;小米性温,有养胃的功效,两者相配,滋补效果更好。
虫草+老鸭补阴虚
鹿茸的功效与作用第8篇
儿子患病面临瘫痪,最后一线希望系于鹿茸血
蒋玉莲1963年出生于江苏省仪征市,高中毕业后进了一家服装厂当出纳。1988年,下岗后的蒋玉莲嫁给了南京市的夏武斌。夏武斌大她6岁,是江苏省第一建筑安装公司的泥瓦工。1989年,蒋玉莲生下儿子夏贤忠。
儿子满周岁后,夏武斌从公司下岗,蒋玉莲和丈夫在宁海路上开了家服装店。因生意不景气,不久夫妻俩将服装店转让,在新街口附近摆摊卖起了烤羊肉串。蒋玉莲和丈夫起早贪黑,只想多挣点钱,把宝贝儿子培养成才。
2004年下半年,正读高一的夏贤忠的双腿、膝关节和胯骨开始隐隐作痛。蒋玉莲和丈夫带儿子到医院检查,结果儿子患上了风湿性脊柱炎。这种病被称为“不死的癌症”,是世界级医学难题,治愈的希望非常渺茫,最终患者会瘫痪在床,腰部弯曲如弓。
蒋玉莲和丈夫难以接受这一残酷的现实,为了控制儿子的病情,他们选择给儿子注射一种进口的生长激素,每天需要打两针,每针价格380元。一个多月下来,昂贵的药费不仅耗去家里的全部积蓄,家里还欠下不少外债。更令蒋玉莲痛心的是,儿子的病情未见好转,疼痛加剧,走路要靠拐杖,生活难以自理,连穿衣都需要她和丈夫帮忙。
蒋玉莲让丈夫留在家里照顾儿子,自己一头扎进图书馆和书店里,淘出与风湿性脊柱炎有关的图书和资料,逐一仔细钻研。终于,蒋玉莲查阅到,鹿茸血(采割梅花鹿的茸时流下的血液)富含胶原蛋白、蛋白聚糖、硫酸软骨素、生长激素等营养成分,和酒饮用,具有生精益血、补髓健骨、祛除风湿等功效。
蒋玉莲向老中医咨询后得知,鹿茸血对风湿性脊柱炎有一定的疗治作用,但能否让患者完全康复,国内尚无具体的病例。
尽管如此,蒋玉莲的眼前还是出现了希望的光芒。她对丈夫说:“哪怕砸锅卖铁,也要让儿子喝上鹿茸血!”
卖掉房子加上举债20多万元,她和丈夫进山办起养鹿场
蒋玉莲跑遍了城内大大小小的医院和药店,都买不到鹿茸血。她得知,鹿茸血稀少而珍贵,出产地在东北三省,而且很容易掺假使杂,甚至有以普通鹿血冒充的假货。
2005年12月初,蒋玉莲坐火车来到辽宁省沈阳市,在郊外的深山里找到一家养鹿场。这家养鹿场有用酒保存的鹿茸血,每斤价格6400元。
蒋玉莲算了一笔账:按这种价格购买鹿茸血给儿子饮用,每天1两,要花640元,一年下来,就要花费23.4万元。这个数字,让蒋玉莲吓了一跳。无奈之下,她买了两斤鹿茸血酒。养鹿场的老板同情她的处境,建议她回南京办个养鹿场,这样就能让儿子喝上新鲜的鹿茸血了,但是至少需要投入50万元。
蒋玉莲决定自办养鹿场。2006年春节后,她在丈夫的支持下,卖掉了家里100平方米的房子,得款30多万元,又向亲友借款20多万元。她把因病休学的儿子送给婆婆照顾,自己和丈夫一起外出寻找合适的场地。
蒋玉莲得知南京六合区平山林场附近有个骡子山,山上有一大片松林,林间的空地上杂草丛生,具备养鹿的条件,便和丈夫跑去察看。他们对此处环境非常满意,于是找到林场负责人,以每年1万多元的租金,租下了20亩林间空地,租期为20年。
随后,蒋玉莲和丈夫购来建筑材料,雇了泥瓦工,在骡子山上建起了一排鹿舍和几间砖瓦房。
2006年4月,蒋玉莲从吉林引进了98头成年梅花鹿(其中60头母鹿)。由于没有养鹿经验,她买来好多参考书籍,完全是“摸着石头过河”。
完全圈养的成年梅花鹿,每头每年要消耗2000多斤草料和700多斤大白菜、胡萝卜、南瓜、玉米、麦麸等精饲料。为节省饲料钱,蒋玉莲和丈夫除了在山上开荒种菜,为梅花鹿提供大白菜、胡萝卜、南瓜等食物,每天还要忙着割草、采摘嫩树叶喂鹿,连山下农户丢掉的庄稼秸秆,他们也要捡回来,切碎后作为鹿饲料……
困难再大也不放弃,母爱演绎出两大传奇
好不容易盼来首次“收割”鹿茸的日子。2006年6月25日早晨,蒋玉莲和丈夫选择一头长得最健壮的公鹿,悄悄靠近它,给它打了麻醉针。待公鹿睡倒后,夏武斌先用碘酒在鹿角根部消毒,然后用钢锯锯鹿茸,蒋玉莲端着不锈钢盆,接纳喷溅出来的鹿茸血。
锯下鹿茸,夏武斌赶紧用草木灰给公鹿敷伤口,接着打解药针。蒋玉莲得到了4两多新鲜的鹿茸血,激动得泪水涟涟。她把鹿茸血倒入白酒里,用瓶子装好,赶到南京市区的婆婆家里,交到儿子的手里。当时,夏贤忠已喝完了母亲从沈阳买回的两斤鹿茸血酒,但病情未见好转,双腿行走不便,只能躺在床上自学高中各门功课。
此后,蒋玉莲隔三岔五给儿子送去新鲜的鹿茸血酒。
每次锯完鹿茸,收集好鹿茸血,蒋玉莲的心里都会很难过。她经常对丈夫说,她和这些鹿有感情了,不忍心看它们流血、疼痛。为给献出鹿茸血的鹿加强营养,她买来黄豆磨豆浆给它们喝,自己却舍不得喝上一口。
夏贤忠每天早、中、晚都要饮用1两多鹿茸血酒,刚开始没什么不适的反应,后来却流鼻血、浑身燥热。蒋玉莲带着儿子去看老中医,才知道儿子喝鹿茸血酒过量了。在老中医的建议下,夏贤忠每天只喝一次鹿茸血酒,控制在1两以内。这样,他的身体不再出现流鼻血等异常反应。
让蒋玉莲心里没底的是,儿子喝了鹿茸血后,病情一直不见好转,连下地都困难。
2006年秋,养鹿场里的母梅花鹿快要下崽了,鹿舍需要扩建;近百头鹿,每天要消耗大量饲料。这些都需要钱,蒋玉莲面临严重的资金短缺。思来想去,蒋玉莲决定养鸡赚钱贴补养鹿场。她拿出仅有的两三万元积蓄,在骡子山上养了5000多只小鸡,雇了两名下岗工人来管理。
半年过去了,鸡长大了,蒋玉莲正盼着鸡生蛋,卖出钱来改变养鹿场的困境,命运再次给她当头一击:5000多只即将生蛋的鸡染上瘟病,两天之内全部死光。蒋玉莲急得不知如何是好,夏武斌劝她把养鹿场转让出去,他俩回城里买套房子,再去卖烤羊肉串。蒋玉莲坚决不肯放弃,说:“我们如果不养鹿了,那么儿子的康复就没有任何希望了……”
平山林场和六合区政府相关部门负责人得知这一情况后,给蒋玉莲送来了两万余元补贴款。南京市总工会小额创业贷款担保中心也伸出了援手,给蒋玉莲提供5万元无息贷款。蒋玉莲的养鹿场这才得以绝处逢生。
2007年3月中旬的一天,蒋玉莲给儿子送鹿茸血酒时,只见儿子从床上爬起来,在地上走了几步,激动地说:“妈妈,我的腿不疼了,一点儿也不疼了!”蒋玉莲不敢相信这是真的,让儿子又走了几步,才紧紧抱住儿子大哭了一场。
随后,蒋玉莲带着行走自如的儿子去鼓楼区中医院复诊。结果表明,儿子完全康复,连主治医生都感叹这是医学界的一个奇迹。
点点滴滴鹿茸血,饱含着绵绵无尽的母爱。为回馈亲爱的妈妈,夏贤忠萌生了考大学的念头。而这时距高考仅有两个多月,蒋玉莲把儿子接到骡子山上,进行高考前的冲刺。
2007年8月中旬,夏贤忠收到了南京财经大学法律系的录取通知书。蒋玉莲与儿子紧紧相拥,喜极而泣。
蒋玉莲养鹿救子,儿子考上大学的喜讯经当地媒体报道后,她的养鹿场声名大振,所养殖的梅花鹿被人们视为“神鹿”、“吉祥鹿”。许多市民来到骡子山上,慷慨解囊,认养梅花鹿。还有的市民前来购买鹿茸、鹿茸血、鹿胎盘、鹿筋、鹿肉等产品。
很快,蒋玉莲还清了外债,养鹿场经济效益越来越好。2009年,蒋玉莲不仅买了一辆十几万元的私家车,还拿出100多万元,在麒麟门附近买了一套240平方米的跃层式住宅。
更令蒋玉莲欣慰的是,2011年6月,心怀感恩的儿子大学毕业后,放弃留在城里当白领的机会,来到骡子山上协助父母打理养鹿场。有了儿子的帮助,蒋玉莲的担子减轻了不少。
鹿茸的功效与作用第9篇
【摘要】文章探讨了鹿茸多肽对β淀粉样蛋白诱导脊髓神经元细胞凋亡的保护作用。
【主题词】鹿茸多肽 作用 分析
脊髓损伤(spinal cord injury,SCI)是外科常见的创伤,其年发病率逐年升高。在脊髓损伤中,除了原发的物理打击因素造成神经细胞损伤外,已发现损伤区及临近部位的神经细胞存在迟发性的死亡现象,这种死亡与常见的坏死不同,表现为一种程序性死亡(细胞凋亡),细胞凋亡可能参与了脊髓损伤的病理生理过程。caspase3是凋亡过程中最重要的蛋白酶,降低其的表达有助于脊髓损伤的修复和再生。鹿茸系鹿科动物梅花鹿或马鹿的雄鹿未骨化密生绒毛的幼角。关于鹿茸多肽混合物,近两年,有学者通过实验证明鹿茸多肽对脊髓损伤后的神经细胞有保护作用,本实验应用鹿茸多肽作用于β淀粉样蛋白诱导的脊髓神经元细胞凋亡的保护作用,以进一步阐述其对脊髓神经细胞保护作用的机理。
一 仪器材料
15d孕鼠购自吉林大学实验动物中心;DMEM培养基、胎牛血清、胰蛋白酶购自invitrogen公司;细胞培养瓶和培养板购自Castar公司;神经生长因子(NGF)购自Sigma公司;鹿茸多肽由长春中医药大学惠赠;β淀粉样蛋白(Aβ25-35)、四甲基偶氮唑盐(MTT)、二甲基亚砜(DMSO)购自(Sigma公司);兔多克隆caspase3抗体购自北京中杉金桥生物技术有限公司。
二 方法
1 凝聚态Aβ25-35的制备用超纯水将冻干的Aβ25-35溶解配成100 μmol/L的储存液,于-20℃ 保存,使用前配成所需浓度,于37℃孵育24 h备用。
2 胎鼠脊髓细胞悬液制备及培养取孕15d大鼠,10%水合氯醛腹腔麻醉后,无菌状态下取出胎鼠。用Hank’s液冲洗数遍后,放于培养皿中。在解剖显微镜下从背侧完全暴露脑干以下整条脊髓,从正中沟处用钨丝针切除双侧脊髓的后外侧部。将取下的脊髓腹侧组织,经Hank’s液冲洗后,剥去表面的血管等,用显微剪子细剪切成糜状,越细越好;然后用0.25%胰酶37℃消化20min后,用吸管轻轻吹打数次,经200目滤网过滤,离心弃上清,用含15%胎牛血清培养基以1×106/ml接种于塑料培养瓶中。
将细胞培养在含15%胎牛血清、100U/ml氨苄青霉素及100U/ml链霉素的DMEM培养基中,于37℃、饱和湿度、5 %CO2浓度下培养,2~3d 换液一次。实验均取对数生长期细胞,实验前12 h细胞换用无血清培养液,观察不同浓度Aβ25-35的作用。
3 MTT比色法检测细胞活力观察不同终浓度(0、5、10、20、25、30μmol/L)的Aβ25-35作用24 h后,细胞活力的变化,细胞接种于96孔板24 h后加入不同浓度的Aβ25-35作用24 h,每个浓度设4个复孔L,同时设与实验孔平行的空白对照,最后比色时以对照孔调零。共同孵育24 h后更换培养基,每孔加入180μl的培养基和20μl的MTT(5 mg/ml),置37℃、5%CO2培养箱培养4 h,弃培养液,每孔加入200μl DMSO,37℃孵育30 min,至结晶物充分溶解。在多功能酶标仪上测定570nm的吸光度(D570),其与对照吸光度的比值作为相对细胞活力。
4 流式细胞仪检测将细胞接种于24孔板,待达到80%融合时,按下列分组进行实验:A.对照组,B. Aβ25-35(25μmol/L),C. Aβ25-35(25μmol/L)+鹿茸多肽(400mg/ml)[3],D.照射Aβ25-35(25μmol/l)+NGF(20ng/ml)组。各组均6复孔。将24h以后各组细胞用0.25%胰蛋白酶消化,1000 r/min 离心5min,弃上清;用500μl 5mmol/L EDTA/0.01mol/L PBS洗涤细胞;再加入50μl 10g/L RNaseA,室温下孵育30min;最后加入500μl 100mg/LPI染色液,旋转混匀,置4℃避光孵育30min后,流式细胞仪测定。
5 免疫细胞化学染色将1cm×lcm盖玻片经浸酸及消毒等处理后,放入24孔培养板中,加入10倍稀释的多聚赖氨酸液,置于CO2 孵箱中1h;弃去多聚赖氨酸液,用DMEM培养基洗一次,将各组细胞悬液分别接种于各孔,继续培养24h;弃去原培养液,用37℃预热的0.1mol/L PBS轻洗3次;余按免疫组织化学试剂盒说明操作。
三 统计
应用统计分析软件SPSS14.0分析数据,数据以均数±标准差(x±s)表示,两两比较采用t检验,P
四 结果
1 脊髓神经元细胞的培养及鉴定单细胞悬液接种后第2d,细胞聚集成团状,第3d出现大量悬浮的neurosphere(约30~60个细胞),而且neurosphere越来越多。到第7d细胞胞体十分饱满,轮廓清晰,有的细胞可见明显的鸟眼状细胞核,也有的细胞伸出树枝状突起,突起相互连成网络。用神经元特异烯醇化酶(NSE)标记神经元。镜下观察,可见实验组细胞胞体饱满,突起明显并连成网状。
2 流式细胞仪检测结果以400mg/ml剂量观察鹿茸多肽对Aβ25-35诱导脊髓细胞凋亡的抑制作用,并用NGF作为对照。结果显示,Aβ(25μmol/L)+鹿茸多肽(400mg/ml)组细胞凋亡百分数是19.35±6.74与Aβ组凋亡百分数37.42±12.55比较,有显著性差异,P
3 免疫组化检测caspase3结果caspase3阳性细胞胞质着棕色。结果显示:对照组无caspase3阳性染色的细胞;Aβ(25μmol/L)+鹿茸多肽(400mg/ml)组caspase3阳性细胞数减少,比单纯Aβ(25μmol/L)组少,其作用与NGF阳性对照组比较无差异,鹿茸多肽对脊髓细胞凋亡具有抑制作用。
五 讨论
脊髓损伤的治疗是神经科学领域内一道尚未解决的难题,虽然人们采取了许多种方法促进损伤后的脊髓轴突再生修复,但存在许多限制因素,很难达到理想效果,许多学者进行了深入研究脊髓神经组织损伤后再生不良,其重要原因是伤后继发性损害不断加重所致,而细胞凋亡是继发性损伤的关键,抑制细胞凋亡是阻止或减少继发性损伤,保护神经功能的治疗所在。