医疗用途、方法和用途与流程

　　opin clin nutr metab care.)》2012；15:641-648)。7.此外，维生素e或维生素e与其它药物的组合对经活检证实的nash患者的肝损伤的影响已在一些小型研究中进行了调查，但观察到了相互矛盾的结果(sanyal aj等人,“用于非酒精性脂肪性肝炎的吡格列酮、维生素e或安慰剂(pioglitazone,vitamin e,or placebo for nonalcoholic steatohepatitis.)”《新英格兰医学杂志(n engl j med.)》2010；362:1675-1685；harrison sa等人,“维生素e和维生素c治疗可改善非酒精性脂肪性肝炎患者的纤维化(vitamin e and vitamin c treatment improves fibrosis in patients with nonalcoholic steatohepatitis.)”《美国胃肠病学杂志(am j gastroenterol.)》2003；98:2485-2490；和dufour jf等人,“熊去氧胆酸与维生素e在非酒精性脂肪性肝炎中的随机安慰剂对照试验(randomized placebo-controlled trial of ursodeoxycholic acid with vitamin e in nonalcoholic steatohepatitis.)”《临床胃肠病学与肝病学(clin gastroenterol hepatol.)》2006；4:1537-1543)。8.最近，两项大型多中心随机对照试验调查了维生素e在nafld受试者中的功效。在“pivens”试验中，在患有侵袭性nash且没有糖尿病或肝硬化的成年患者中，与吡格列酮或安慰剂治疗组相比，高剂量维生素e补充剂(800ui q.d.)显著改善nash组织学；然而，据报道，胰岛素抵抗和血浆甘油三酯水平增加(sanyal aj等人,2010)。相比之下，“tonic”试验发现，在实现儿童nafld患者alt水平持续降低的主要结果方面，维生素e和二甲双胍均不优于安慰剂(lavine je等人,“维生素e或二甲双胍治疗儿童和青少年非酒精性脂肪性肝病的效果：tonic随机对照试验(effect of vitamin e or metformin for treatment of nonalcoholic fatty liver disease in children and adolescents:the tonic randomized controlled trial.)”《美国医学协会杂志(jama.)》2011；305:1659-1668)。9.因此，尽管有一些关于补充维生素e在nafld/nash中的功效的报道，但对其安全性存在担忧。此外，在将抗氧化剂的作用解释为完全或甚至主要是由于化合物的抗氧化性质时，需要谨慎。一个相关的问题是即使是公认的抗氧化剂化合物的非标准剂量。如维生素e、维生素c和辅酶q等药剂发挥作用，因为它们是单电子受体，但也可以充当具有高反应性的单电子供体。在高浓度下，维生素c和辅酶q都可以成为促氧化剂，并有可能导致肝损伤(abudu n等人,“人体动脉硬化中的维生素，重点强调维生素c和维生素e(vitamins in human arteriosclerosis with emphasis on vitamin c and vitamin e.)”《临床化学学报(clin chim acta.)》2004；339:11-25)。10.缺乏有益影响，并且在一些情况下，观察到有害影响突出了新治疗方法的重要性。此外，目前的肝脏疾病诊断涉及侵入性技术，并且因此可以诊断氧化应激并鉴定易患胰岛素抵抗、2型糖尿病、nash和肝细胞癌的患者的非侵入性技术将是有益的。技术实现要素：11.在此背景下，发明人惊奇地发现，肝脏中特定的微小rna(mirna)，即mir-144的沉默通过增加抗氧化反应来降低肝脏中的氧化应激。因此，发明人的发现鉴定了一种用于肝脏疾病和/或肝脏病状的新型疗法。靶向内源性抗氧化反应(而不是使用最终阻断内源性反应的外源性抗氧化剂)为肝脏胰岛素抵抗和nash提供了一种有吸引力的疗法。12.此外，发明人惊奇地发现，可以容易地测量这种mirna，用于诊断易患肝脏疾病和/或肝脏病状(如nash)的肝脏氧化应激。13.因此，在第一方面，本发明提供了一种抑制微小rna-144(mir-144)的药剂，所述药剂用于在受试者中治疗或预防其中氧化应激是促成因素的肝脏疾病和/或肝脏病状。14.在第二方面，本发明提供了一种抑制微小rna-144(mir-144)的药剂在制备用于在受试者中治疗或预防其中氧化应激是促成因素的肝脏疾病和/或肝脏病状的药物中的用途。15.在第三方面，本发明提供了一种用于在受试者中治疗或预防其中氧化应激是促成因素的肝脏疾病和/或肝脏病状的方法，其中所述方法包括向所述受试者施用抑制微小rna-144(mir-144)的药剂。16.如本文所述，发明人惊奇地发现，肝脏中的核因子红细胞2相关因子2(nrf2)受由肝脏巨噬细胞并在肥胖胰岛素抵抗患者血液中高水平表达的mirna(mir-144)调节。肥胖小鼠肝脏巨噬细胞中mir-144的特异性沉默增加了nrf2蛋白质水平，从而导致巨噬细胞和肝细胞释放的ros减少，并且氧化应激和葡萄糖耐受性总体降低。17.如所附实例所述，抗氧化防御在肥胖胰岛素抵抗患者的肝脏中无效，但在苗条或肥胖的胰岛素敏感个体中有效。这是由于与健康对照组相比，肥胖胰岛素抵抗人类和小鼠的肝脏中的核因子红细胞2相关因子2(nrf2)蛋白质水平显著降低。18.核因子红细胞2相关因子2(nrf2；也被称为“nfe2l2”和“nrf2”)是一种碱性亮氨酸拉链转录因子和氧化还原稳态的主要调节剂。在正常生理条件下，nrf2通过与kelch样ech相关蛋白1(keap1)的结合而靶向蛋白酶体降解。相反，在氧化应激下，这种复合物解离，并且nrf2转移到细胞核，在所述细胞核处其与抗氧化反应元件(are)结合，从而驱动抗氧化反应。19.mirna是小的(通常为17个到27个核苷酸)非编码rna，其通过影响mrna的稳定性和翻译，参与多细胞生物中基因表达的转录后调节。mirna各自由较长的前体rna分子(“前体mirna”)加工而成。前体mirna是从非蛋白质编码基因转录而来的。前体可以具有至少50个、60个、66个、70个、75个、80个、85个、100个、150个、200个或更多个核苷酸的长度。前体mirna有两个互补区域，所述两个互补区域可以形成茎环或折回样结构，所述结构在动物中被名为dicer和drosha的酶切割。dicer和drosha是核糖核酸酶ill样核酸酶。加工后的mirna通常是茎的一部分。20.加工后的mirna(也被称为“成熟的mirna”)被整合到被称为rna诱导的沉默复合物(risc)的大型复合物中，并且在动物中，基于mirna的基因调节主要通过以下过程发生：成熟的mirna通过部分碱基配对与mrna靶位点结合，从而导致靶mrna的翻译抑制或不稳定。21.术语“微小rna”或“mirna”包含长度为至少约6个核苷酸的单链或双链非编码rna，其可以通过降解靶mrna或抑制其翻译来调节转录后水平的基因表达。22.mir-144是一种由肝脏巨噬细胞并在肥胖胰岛素抵抗患者血液中高水平表达的mirna。mir-144的生物学活性或生物学作用是指在体内(即在蛋白质的天然生理环境中)或体外(即在实验室条件下)测量或观察到的由天然存在的和/或野生型形式的mir-144表现或执行的任何功能。23.mir-144的生物学活性包含但不限于降低其靶nrf2的蛋白质水平，并因此降低nrf2靶基因的表达(如表3(s9)中的那些)。24.mir-144的生物学活性可以通过本领域已知的方法测量，包含但不限于通过蛋白质印迹和/或使用针对nrf2的抗体的elisa测量nrf2蛋白质水平、通过实时pcr测量nrf2靶基因和/或通过检测如本文所公开的活性氧来测量氧化应激。[0025]“抑制微小rna-144(mir-144)的药剂”包含抑制(例如，下调、拮抗、抑制、减少、预防、降低、阻断和/或逆转)mir-144的表达和/或生物学活性和/或作用的任何化合物的含义。更具体地说，抑制剂可以以这样的方式起作用，使得mir-144的生物学活性以与mir-144的天然、野生型作用拮抗(例如，对抗、逆转、相反)的方式降低。[0026]在优选的实施例中，所述药剂是细胞可渗透的，不能快速排泄，在体内是稳定的，并且以高特异性和亲和力与mir-144结合。[0027]在一个实施例中，所述药剂可以是选择性抑制mir-144的药剂。例如，所述药剂可以抑制和/或降低mir-144的表达和/或生物学活性，其程度大于其抑制无关mirna(如mir-532)的程度。如所附实例所示，用安塔够妙(antagomir)药剂沉默mir-144对mir-532没有影响。优选地，所述药剂抑制和/或降低mir-144的表达和/或生物学活性的程度是其抑制另一种无关mirna的至少5倍、或至少10倍、或至少50倍。更优选地，所述药剂抑制和/或降低mir-144的表达和/或生物学活性的程度是其抑制另一种无关mirna的至少100倍、或至少1,000倍、或至少10,000倍。[0028]“治疗(treating或treatment)”包含以改善或稳定受试者的疾病的方式施用疗法以逆转、减少、减轻、阻止或治愈特定病症、疾病、损伤或病状的症状、临床体征和/或潜在病理学。因此，治疗是指将药剂施用于有需要的患者，期望他们将获得治疗益处。[0029]在受试者中“治疗(treating或treatment)”其中氧化应激是促成因素的肝脏疾病和/或肝脏病状包含改善以下一项或多项：肝细胞死亡、免疫细胞浸润和/或纤维化。在本发明的上下文中，治疗可以包含上调受试者肝脏中的抗氧化反应。因此，可以在不治愈特定疾病或病状而是优选地涵盖包含以下一项或多项的结果的情况下实现治疗益处：疾病或病状的减轻、与疾病或病状相关的症状的减少、疾病或病状的消除、由原发性疾病或病状的发生引起的继发性疾病或病状(例如，由nash的进展引起的肝细胞癌)的预防或减轻，和/或疾病或病状的预防。治疗益处可以由本领域普通技术人员和/或由正在治疗受试者的受过训练的临床医生评估。[0030]术语“预防”是本领域公认的，并且当关于如肝脏疾病和/或肝脏病状或任何其它医学病状等病状使用时，其包含施用一种药剂/组合物，相对于未接受所述分子/组合物的个体，所述药剂/组合物减少受试者中特定病症、疾病、损伤或医学病状的症状、临床体征和/或潜在病理学的频率或延迟其发作。术语“预防性”治疗是本领域公认的，并且可以与“预防(preventing和prevention)”互换使用。“预防性治疗”包含在不良病状(例如nash)的临床表现之前施用分子/化合物(即，其保护个体免于发展出不良病状)，而如果在不良病状的表现之后施用，则治疗是治疗性的(即，其旨在减少、改善或稳定现有的不良病状或相关的副作用)。[0031]在本发明的上下文中，“预防”肝脏疾病和/或肝脏病状还可以包含防止一种形式的肝脏疾病和/或肝脏病状进展为更严重的肝脏疾病和/或病状。[0032]在一个实施例中，以治疗有效量向患有或疑似患有或易患其中氧化应激是促成因素的肝脏疾病和/或肝脏病状的受试者(包含人)施用治疗有效量的药剂。[0033]“治疗有效量”是指可以向患有或疑似患有或易患其中氧化应激是促成因素的肝脏疾病和/或肝脏病状的受试者(包含人)提供治疗性、姑息性或预防性缓解的量。应当理解，药剂的治疗有效量将是能够抑制受试者中微小rna-144的表达和/或生物学活性的量。[0034]术语“患有或疑似患有或易患”表明，相对于此类受试者的一般人群，受试者已被确定为或被怀疑为患如本文所定义的肝脏疾病和/或肝脏病状的风险增加。[0035]例如，受试者可能具有个人和/或家族病史，包含频繁发生的特定疾病或病症，例如，肥胖症可能是如本文所定义的肝脏疾病和/或肝脏病状发展的促成因素。作为另一个实例，受试者可能具有通过本发明的方法确定的这种易感性，所述方法包含确定mir-144的表达和/或生物学活性。[0036]“受试者”包含需要治疗和/或预防本文所述疾病或病状的患者或个体的含义。所述受试者可以是脊椎动物，如脊椎动物哺乳动物。[0037]在一个实施例中，所述受试者选自包括以下的组：灵长类动物(例如，人；猴子；猿)；啮齿动物(例如，小鼠、大鼠、仓鼠、豚鼠、沙鼠、兔子)；犬科动物(例如，狗)；猫科动物(例如，猫)；马(例如，马)；牛(例如，母牛)；和/或猪(例如，猪)。[0038]最优选地，所述受试者是人类受试者。[0039]如本文所使用的，术语“氧化应激”是对活性氧ros(也被称为“自由基”)的产生与抗氧化防御之间平衡的干扰。氧化应激可以通过本领域已知的、如本文所述的以及如所附实例中所述的方法测量。[0040]由于正常的细胞代谢和环境因素(如空气污染物或香烟烟雾)，活生物体会产生活性氧(ros)。ros是高反应性分子，并且可以破坏如碳水化合物、核酸、脂质和蛋白质等细胞结构并改变其功能。氧化剂和抗氧化剂之间的平衡向有利于氧化剂的转变被称为“氧化应激”。还原和氧化(氧化还原)状态的调节对于细胞活力、活化、增殖和器官功能至关重要。好氧生物具有整合的抗氧化系统，所述系统包含酶和非酶抗氧化剂，它们通常能有效阻断ros的有害影响。然而，在病理情况下，抗氧化系统可能会不堪重负(birben e.,“氧化应激和抗氧化防御(oxidative stress and antioxidant defense)”,《世界过敏器官杂志(world allergy organ journal)》,2012,5(1):9-19)。[0041]“其中氧化应激是促成因素的肝脏疾病和/或肝脏病状”包含其中至少部分病理学由氧化应激介导的任何肝脏生物学或医学病状或病症的含义。还包含了疾病的主要部位是肝脏。肝脏疾病和/或肝脏病状可能是由氧化应激引起的，或者可以简单地以氧化应激为特征。氧化应激可能通过产生引起病理学的产物(例如ros)而直接起作用，和/或氧化应激可能通过改变抗氧化反应基因的表达以引起病理学而间接起作用。氧化应激导致dna损伤、脂质过氧化，从而导致质膜双层破坏、蛋白质片段化和信号传导中断。所有这些影响都会导致肝脏细胞死亡、炎症和纤维化，这是如nash和肝硬化等肝脏疾病的标志。因此，预期减少氧化应激将预防、改善或治疗如此表征的病状。[0042]下面描述了特定肝脏疾病和/或肝脏病状的实例。[0043]优选地，药剂降低肝脏细胞中的mir-144表达和/或活性。[0044]“mir-144表达”包含mir-144的水平、数量、浓度或丰度。术语“表达”还可以指mir-144的量、浓度的变化率。表达可以例如通过mir-144的量或合成速率来表示。该术语可用于指代样品中mir-144的绝对量或mir-144的相对量，包含在稳态或非稳态条件下确定的量或浓度。表达也可以指与mir-144的量、浓度或变化率相关的测定信号。可以相对于对照样品中的mir-144水平确定mir-144的表达。[0045]核苷酸序列的表达水平(或编码的mirna分子，例如mir-144，的稳态水平)的降低优选地是，与对照(如健康受试者)中相应核苷酸序列的表达水平(或相应编码的mirna分子或其等价物或来源的稳态水平)相比，使用如本文所述的方法可检测到的核苷酸表达水平(或编码的mirna分子的稳态水平或mir-144的生物学活性的任何可检测的变化)的降低。[0046]可以使用本领域已知的任何技术进行mir-144表达的检测。对mir-144的表达水平或存在的评估优选地使用合适的测定法进行，如实时(rt)定量pcr(rt-qpcr)、微阵列、珠阵列、原位杂交和/或northern印迹分析。[0047]优选地，肝脏细胞中mir-144表达的降低包含，与使用合适的方法在不存在抑制剂的情况下肝脏细胞中mir-144的表达相比，肝脏细胞中mir-144的表达降低至少10％。更优选地，肝脏细胞中mir-144表达的降低是指，与使用合适的方法在不存在抑制剂的情况下肝脏细胞中mir-144的表达相比，降低至少15％，甚至更优选，至少20％、至少30％、至少40％、至少50％、至少60％、至少70％、至少80％、至少90％或100％。在这种情况下，肝脏细胞中没有可检测到的mir-144表达。[0048]在一个实施例中，与使用合适的方法在不存在抑制剂的情况下肝脏细胞中mir-144的表达相比，所述药剂将肝脏细胞中mir-144的表达降低至少2倍、或至少5倍、或至少10倍、或至少50倍。更优选地，与使用合适的方法在不存在抑制剂的情况下肝脏细胞中mir-144的表达相比，所述药剂将肝脏细胞中mir-144的表达降低至少100倍、或至少1,000倍、或至少10,000倍。[0049]“mir-144活性”包含mir-144的生物学活性或生物学作用，并且这是指在体内(即在蛋白质的天然生理环境中)或体外(即在实验室条件下)测量或观察到的由天然存在的和/或野生型形式的mir-144表现或执行的任何功能。[0050]在一个实施例中，所述药剂可以是与在不存在抑制剂的情况下mir-144的生物学活性相比，将肝脏细胞中mir-144的生物学活性降低至少2倍、或至少5倍、或至少10倍、或至少50倍的药剂。更优选地，与在不存在抑制剂的情况下肝脏细胞中mir-144的生物学活性相比，所述药剂将肝脏细胞中mir-144的生物学活性降低至少100倍、或至少1,000倍、或至少10,000倍。[0051]在一个实施例中，使用针对mir-144活性的特异性测定法来量化mir-144活性的降低。优选的测定法是rt-qpcr。[0052]在优选的实施例中，所述药剂是与mir-144结合以抑制mir-144的生物学活性的药剂。更优选地，所述药剂是与mir-144选择性结合的药剂。[0053]“选择性结合”到mir-144的药剂包含以下含义：药剂与mir-144结合的亲和力高于与无关mirna(如mir-532)结合的亲和力。优选地，药剂以比与无关mirna结合的亲和力高至少5倍、或至少10倍或至少50倍的亲和力与mir-144结合。更优选地，药剂以比与无关mirna结合的亲和力高至少100倍、或至少1,000倍、或至少10,000倍的亲和力与mir-144结合。这种结合可以通过本领域熟知的方法确定，包含rna荧光原位杂交(fish)、rna荧光体内杂交(fivh)、表面等离子体共振(spr)、电泳迁移率变动分析以及交联、连接和杂交物测序(clash)。[0054]应当理解，在药剂与mir-144结合之后对mir-144的抑制可以被称为“直接抑制”。直接抑制的实例是mirna分子与反义rna(即与mirna分子具有反向互补序列的rna)相互作用，从而形成双链体，所述双链体导致mirna分子降解。[0055]在一个实施例中，所述药剂不与mir-144结合以抑制mir-144的生物学活性。应当理解，这可以被称为“间接抑制”。间接抑制的实例是抑制参与mirna分子的转录和/或加工从而导致其表达降低的蛋白质。[0056]在一个实施例中，mir-144表达的下调优先发生在肝脏细胞中。[0057]优选地，将药剂递送至肝脏细胞。[0058]“递送至肝脏细胞”包含：药剂靶向肝脏细胞并将在肝脏细胞中具有活性。优选地，将药剂选择性地递送至肝脏细胞。例如，如果将药剂选择性地递送至肝脏细胞，则与不同器官(例如，脑或肾)的细胞相比，肝脏细胞将在更大程度上选择性地含有药剂。因此，在将药剂递送至肝脏细胞后，mir-144将在肝脏细胞中被抑制，而不影响mir-144在其它器官(如脑)的细胞中的表达和/或活性。[0059]因此，优选地，药剂的递送是通过局部递送。“局部递送”包含将药剂直接递送至生物体内的靶标部位。例如，可以通过直接注射到肝脏中来局部递送化合物。[0060]本发明的药剂包含但不限于安塔够妙、反义寡核苷酸、抑制性rna分子或mir-144表达和/或活性的其它调节剂，其可以通过本领域技术人员已知的适合递送至肝脏的任何方法施用，如以下文献中所述的方法：juliano r.l.,“治疗性寡核苷酸的递送(the delivery of therapeutic oligonucleotides)”,《核酸研究(nucleic acids res.)》,2016；44(14):6518-6548。[0061]在一个实施例中，在施用后24小时、48小时、72小时和/或96小时可检测到药剂(如核酸药剂)在肝脏细胞中的存在。在一个实施例中，在施用后24小时、48小时、72小时和/或96小时可检测到mir-144表达的下调。[0062]优选地，肝脏细胞是吞噬性肝脏细胞、肝细胞、内皮细胞和/或嗜中性粒细胞。[0063]肝脏由多种细胞类型组成。[0064]肝细胞呈多面体形状，直径大小从12到25μm不等，并且每个细胞中含有一个或有时含有两个不同的细胞核。肝细胞占所有肝脏细胞的60％–80％，并且它们执行肝脏的代谢、生物合成、解毒和胆汁分泌功能。[0065]血窦由内皮细胞、吞噬性枯否细胞、星状细胞(ito细胞)和凹坑细胞构成。[0066]肝脏巨噬细胞或枯否细胞负责通过清除细菌和死细胞等病原体来为肝脏解毒。它们还有助于胆汁酸的形成(jager j.,“肝脏先天免疫细胞和胰岛素抵抗：枯否细胞的多个方面(liver innate immune cells and insulin resistance:the multiple facets of kupffer cells.)”,《内科杂志(j intern med.)》2016年8月；280(2):209-20)。它们还可以直接调节肝细胞中的胰岛素信号传导(morgantini c.,“肝脏巨噬细胞通过非炎症因子调节全身代谢(liver macrophages regulate systemic metabolism through non-inflammatory factors)”,2019,《自然代谢(nature metabolism》1,445–459)[0067]肝脏的内皮细胞包含肝窦内皮细胞(lsec)，它是肝脏中最丰富的非实质细胞。lsec是高度专业化和独特的血管内皮细胞，因为它们缺乏基底膜，并且有大量的窗孔来调节大分子(包含脂质和脂蛋白)跨血窦的运输。[0068]中性粒细胞(也被称为中性粒细胞)是大多数哺乳动物中最丰富的粒细胞类型和最丰富的(60％到70％)白细胞类型。它们构成先天免疫系统的重要组成部分。中性粒细胞是一种吞噬细胞并且通常在血流中发现。在炎症的开始(急性)阶段，中性粒细胞是炎症细胞向炎症部位迁移的第一应答者之一。它们在被称为趋化性的过程中通过血管迁移。已经表明，中性粒细胞不适当的活化和归巢到微脉管系统会导致多种肝脏疾病的病理学表现，如病毒性肝炎、非酒精性脂肪性肝病、肝纤维化和肝硬化。(xu r等人,“中性粒细胞在肝脏疾病发展中的作用(the role of neutrophils in the development of liver diseases)”,《细胞分子免疫学(cell mol immunol.)》2014年5月；11(3):224–231)。[0069]树突状细胞(dc)是哺乳动物免疫系统的抗原呈递细胞(也被称为辅助细胞)。它们的主要功能是处理抗原物质并将其在细胞表面呈递给免疫系统的t细胞。它们充当先天免疫系统和适应性免疫系统之间的信使。肝脏中的dc在监测门静脉循环方面具有独特的优势，它们对于调节对血源性病原体的反应、肝脏免疫耐受、肝脏稳态和纤维化至关重要。(rahman a.,“树突状细胞和肝纤维化(dendritic cells and liver fibrosis)”,《生物化学与生物物理学学报(biochim biophys acta.)》2013年7月；1832(7):998–1004)[0070]在一个实施例中，吞噬性肝脏细胞是肝脏巨噬细胞(lm)。[0071]在一个实施例中，将药剂递送至肝脏细胞导致肝脏细胞，例如吞噬细胞、肝细胞、内皮细胞和/或嗜中性粒细胞中的mir-144表达和/或活性降低。[0072]从随附的实例中可以看出，使用葡聚糖封装的rnai粒子(gerp)技术，所述技术在lm中特异性递送sirna并使基因沉默，而不影响肝脏或身体其它部位的其它细胞中的基因表达，发明人发现，选择性地使lm中的mir-144沉默足以通过拯救肥胖小鼠中的nrf2而减少lm和肝细胞的ros释放，并最终减少在整个肝脏中积聚。后一种结果令人惊讶，因为gerp无法被递送到非吞噬细胞(如肝细胞)，但被认为是lm和肝细胞之间的串扰。从随附的实例中可以看出，lm中mir-144的选择性敲低导致肝细胞中mir-144转录的减少。[0073]不受理论的束缚，发明人假设在所有肝脏细胞中靶向mir-144将是有益的。例如，在nash中观察到的炎症的一个突出特征是中性粒细胞积聚，并且肝脏中性粒细胞功能障碍已被描述为与几种肝脏疾病有关，包含非酒精性脂肪性肝病、酒精性肝病、肝硬化、肝功能衰竭和肝细胞癌(xu r等人,《细胞分子免疫学)》2014年5月；11(3):224-31)。此外，内皮细胞已被证明有助于nafld/nash中的氧化应激(matsumoto m等人,《自由基生物学与医学(free radic biol med.)》2018年2月1日；115:412-420；和peters km等人,《脂质学最新观点(curr opin lipidol.)》2018年10月；29(5):417-422)。[0074]在一个实施例中，氧化应激是由肥胖症、酒精、环境污染物和/或如抗炎药、抗镇痛药、抗癌药和/或抗抑郁药等药物诱导的。[0075]在一个实施例中，肝脏中的氧化应激是由肥胖症诱导的。应当理解，如果受试者的体重指数超过30，则将其归类为肥胖。脂肪肝是由于肥胖症相关的胰岛素抵抗中脂肪组织的脂肪储存能力较低而导致的过量脂质积聚的结果。肝脏无法处理这种脂肪超载会导致异常的脂质过氧化、活性氧(ros)的过量产生和氧化应激。[0076]在一个实施例中，肝脏中的氧化应激是由酒精诱导的。过量产生的自由基被认为在酒精引起的损伤的许多通路中起着核心作用。自由基可以导致氧化应激，其特征在于自由基产生和自由基清除之间的平衡受到干扰，包含修复受损分子。自由基是含有至少一个不成对电子的原子簇。因此，已知酒精会诱导氧化应激(wu d.等人,《胃肠病学和肝病杂志(j gastroenterol hepatol.)》2006年10月；21增刊3:s26-9)。[0077]在一个实施例中，氧化应激是由环境污染物诱导的。汞等环境污染物会增加细胞内活性氧的含量并诱导氧化应激，从而导致组织损伤效应，因为这种金属的毒性与超氧化物的产生和谷胱甘肽(gsh)的消耗有关(bando i等人,《生物化学与分子毒理学杂志(j biochem mol toxicol.)》2005；19(3):154-61)。[0078]在一个实施例中，肝脏中的氧化应激是由包含抗炎药、抗镇痛药、抗癌药和/或抗抑郁药在内的药物诱导的。包含抗炎药、抗镇痛药、抗癌药和/或抗抑郁药在内的几种药物，如柳氮磺胺吡啶(sulfasalazine)、唑来膦酸(zoledronic acid)、扑热息痛(paracetamol)、吗啡(morphine)、多柔比星(doxorubicin)、紫杉醇(paclitaxel)和多西他赛(docetaxel)、尼美舒利(nimesulide)、氟西汀(fluoxetine)/氯氮平(clozapine)和异烟肼(isoniazid)均与诱导氧化应激有关(linares v等人,《毒理学(toxicology.)》2009年2月27日；256(3):152-6；karabulut ab等人,《移植学会会报(transplant proc.)》2010年11月；42(9):3820-2；d等人,《食品和化学毒理学(food chem toxicol.)》2009年4月；47(4):866-70；samarghandian s等人,《国际临床与实验医学杂志(int j clin exp med.)》2014年5月15日；7(5):1449-53；a等人,《医学进展(adv med sci.)》2013；58(1):104-11；kale vm等人,《化学毒理学研究(chem res toxicol.)》2010年5月17日；23(5):967-76；j等人,《欧洲药学杂志(eur j pharm sci.)》2014年8月1日；59:20-30；shuhendler aj等人,《自然生物技术(nat biotechnol.)》2014年4月；32(4):373-80)。[0079]优选地，氧化应激是肝脏细胞中的氧化应激。[0080]优选的肝脏细胞包含上述那些，即吞噬细胞(如巨噬细胞)、肝细胞、内皮细胞和嗜中性粒细胞。[0081]因此，在一个实施例中，肝脏细胞中的氧化应激是由肥胖症、酒精、环境污染物和/或如抗炎药、抗镇痛药、抗癌药和/或抗抑郁药等药物诱导的。[0082]在一个实施例中，肝脏中的氧化应激的特征在于以下至少一项：[0083]a)增加的脂质过氧化；[0084]b)活性氧(ros)增加和/或积聚；[0085]c)降低的核因子红细胞2相关因子2(nrf2)活性和/或蛋白质水平；和/或[0086]d)增加的mir-144的表达和/或活性。[0087]在一个实施例中，肝脏中的氧化应激的特征在于增加的脂质过氧化。增加的脂质过氧化是氧化应激的常见标志物，其中例如。“脂质过氧化”包含这样一个过程，在所述过程中，如自由基等氧化剂攻击含有碳-碳双键的脂质，尤其是多不饱和脂肪酸。脂质过氧化可以通过本领域已知的并且如所附实例中所述的方法测量，例如通过测量丙二醛(mda)，一种在脂质过氧化过程中产生的反应性醛(参见例如来自abcam的测定试剂盒；ab118970))。应当理解，如果与对照样品(如来自健康和/或苗条受试者)相比，测试样品(例如来自肥胖受试者)中的脂质过氧化增加，则这可能表明存在氧化应激。[0088]在一个实施例中，与对照受试者(如苗条和/或健康受试者)中的脂质过氧化相比，脂质过氧化增加了至少2倍、或至少5倍、或至少10倍、或至少50倍。优选地，与对照受试者(如苗条和/或健康受试者)中的脂质过氧化相比，脂质过氧化增加了至少100倍、或至少1,000倍、或至少10,000倍。[0089]在一个实施例中，肝脏中的氧化应激的特征在于活性氧增加和/或积聚。“活性氧(ros)”，也被称为“自由基”和“氧自由基”，包含一种不稳定的分子，其含有氧气并且很容易与细胞中的其它分子发生反应。细胞内ros的积聚可能对dna、rna和蛋白质造成损害，并可能导致细胞死亡。ros增加和/或积聚可以通过本领域已知的并且如所附实例中所述的方法测量，例如细胞内ros可以通过oxiselecttm体外ros/rns测定试剂盒(nordicbiosite；sta-347)测量并且细胞外ros可以通过amplextm red过氧化氢/过氧化物酶测定试剂盒(thermofisher；a22188)测量。应当理解，如果与对照样品(如来自健康和/或苗条受试者)相比，测试样品(例如来自肥胖受试者)中的ros水平增加，则这可能表明存在氧化应激。[0090]在一个实施例中，与对照受试者(如苗条和/或健康受试者)中的ros相比，受试者中的ros增加了至少2倍、或至少5倍、或至少10倍、或至少50倍。优选地，与对照受试者(如苗条和/或健康受试者)中的ros相比，ros增加了至少100倍、或至少1,000倍、或至少10,000倍。[0091]在一个实施例中，肝脏中的氧化应激的特征在于降低的核因子红细胞2相关因子2(nrf2)活性和/或蛋白质水平。如上所述，nrf2，也被称为“nfe2l2”和“nrf2”，是一种碱性亮氨酸拉链转录因子，是氧化还原稳态的主要调节剂。在正常生理条件下，nrf2通过与kelch样ech相关蛋白1(keap1)的结合而靶向蛋白酶体降解。相反，在氧化应激下，这种复合物解离，并且nrf2转移到细胞核，在所述细胞核处其与抗氧化反应元件(are)结合，从而驱动抗氧化反应。用于测量nrf2的蛋白质水平的方法包含本领域已知的并且如所附实例中所述的方法，例如使用nrf2抗体(abcam；ab62352)通过蛋白质印迹，或使用针对nrf2的抗体使用染色质免疫沉淀(chip)检查其与特定抗氧化反应元件(are)dna区域的结合。nrf2是一种转录因子，并且可以通过rtqpcr测量其靶基因(包含但不限于nqo1、hmox1、ces2g和gstp1)的表达来分析其活性。如果nrf2是活跃的，则其靶基因的表达就会增加。应当理解，如果与对照样品(如来自健康和/或苗条受试者)相比，测试样品(例如来自肥胖受试者)中的nrf2活性和/或表达降低，则这可能表明存在氧化应激。[0092]用h2o2处理的健康细胞也可用作对照，其诱导氧化应激和抗氧化反应/nrf2活化。由于健康细胞具有正常的抗氧化反应，nrf2将在存在h2o2的情况下被活化(参见图4h-k，其显示用h2o2处理的人肝球体或人非实质细胞表现出nrf2靶基因的表达增加，如通过rtqpcr所测量的)。[0093]从所附实例中可以看出，发明人在诱导型肥胖症模型中观察到肝脏巨噬细胞、肝细胞和整个肝脏中的nrf2蛋白质水平降低。然而，令人惊讶的是，nrf2 mrna水平和转录在诱导型肥胖症模型中保持不变。[0094]在一个实施例中，与对照受试者(如苗条和/或健康受试者)中的nrf2活性和/或蛋白质水平相比，受试者中的nrf2活性和/或蛋白质水平降低了至少2倍、或至少5倍、或至少10倍、或至少50倍。优选地，与对照受试者(如苗条和/或健康受试者)中的nrf2活性和/或蛋白质水平相比，nrf2活性和/或蛋白质水平降低了至少100倍、或至少1,000倍、或至少10,000倍。“nrf2蛋白质水平”包含nrf2的表达、量、浓度或丰度。术语“水平”还可以指nrf2的量、浓度的变化率。表达可以例如通过nrf2蛋白质的量或合成速率来表示。该术语可用于指代样品中nrf2的绝对量或nrf2的相对量，包含在稳态或非稳态条件下确定的量或浓度。可以相对于对照样品中的nrf2水平确定nrf2蛋白质水平。[0095]在一个实施例中，肝脏中的氧化应激的特征在于增加的mir-144表达和/或活性。术语“表达”如本文所定义。用于测量mir-144表达的方法包含本领域已知的并且如所附实例中所述的方法，例如通过使用rt-qpcr。用于测量mir-144活性的方法包含本文所述的方法。应当理解，如果与对照样品(如来自健康和/或苗条受试者)相比，测试样品(例如来自肥胖受试者)中的mir-144活性和/或表达增加，则这可能表明存在氧化应激。[0096]在一个实施例中，与对照受试者(如苗条和/或健康受试者)中的mir-144表达和/或活性相比，受试者中的mir-144表达和/或活性增加了至少2倍、或至少5倍、或至少10倍、或至少50倍。优选地，与对照受试者(如苗条和/或健康受试者)中的ros相比，mir-144表达和/或活性增加了至少100倍、或至少1,000倍、或至少10,000倍。[0097]如所附实例中所述，mir-144表达由gata4介导。不受理论的束缚，发明人假设ros作为辅助信使以将erk和gata4活化，从而导致mir-144的表达增加。因此，应当理解，测量erk和gata4的活化可能是mir-144表达增加的指示。gata4和erk活化可以通过本领域已知的方法测量，并且如实例中所述。[0098]在一个实施例中，氧化应激的特征在于(b)-(d)中的任一个。[0099]如所附实例中所述，当mir-144被诱导时，nrf2蛋白质水平降低，因为nrf2是mir-144的直接靶标。因此，应当理解，如果mir-144水平高且ros水平增加，则不需要测量nrf2。此外，氧化应激会增加mir-144水平，例如通过过量的ros积聚和/或产生，因此，mir-144的增加可以反映肝脏氧化应激。[0100]在一个实施例中，其中氧化应激是促成因素的肝脏疾病和/或肝脏病状选自包括以下的组：非酒精性脂肪性肝炎(nash)、非酒精性脂肪性肝病(nafld)、纤维化、肝硬化、肝细胞癌(hcc)和/或由酒精、环境污染物和/或如抗炎药、抗镇痛药、抗癌药和/或抗抑郁药等药物诱导的肝损伤。[0101]在一个实施例中，受试者表现出胰岛素抵抗和肥胖症中的至少一种。[0102]“胰岛素抵抗”包含胰岛素靶组织无法对胰岛素作出反应。在脂肪组织中，胰岛素不能诱导葡萄糖摄取和脂质储存，也不能阻止脂质释放；在肌肉中，胰岛素不能诱导葡萄糖摄取；在肝脏中，胰岛素不能阻止肝脏葡萄糖的产生。胰岛素敏感性可以通过本领域已知的方法来评估，如通过稳态模型评估(homa-ir)，如实例中所述。一般来说，胰岛素抵抗也可以通过以下任何测量结果来诊断：[0103]-使用homa-ir评估后超过2的值[0104]-口服葡萄糖耐量测试期间2小时的葡萄糖值：140到199mg/dl[0105]-hba1c循环水平：5.7％到6.4％[0106]所有这些测量结果的组合通常用于临床。[0107]“非酒精性脂肪性肝病(nafld)”包含以肝脏中脂肪堆积为特征的疾病状态，所述脂肪堆积通常在肥胖个体中观察到。包含了一种以肝脏脂肪炎症为特征的病状，所述肝脏脂肪炎症不是由于过度饮酒(例如，饮酒量超过20克/天)所致。在某些实施例中，nafld与胰岛素抵抗和代谢综合征有关。[0108]“非酒精性脂肪性肝炎(nash)”包含以炎症和肝脏中脂肪和纤维组织的积聚为特征的病状，这不是由于过度饮酒所致。nash是一种常见的肝脏疾病，其组织学特征为肝脏脂肪变性、小叶炎症和肝细胞气球样变；在多达15％的患者中，其会进展为肝硬化。目前还没有经证明对nash有益的疗法。所述疾病与胰岛素抵抗和代谢综合征的特征密切相关，如肥胖症、高甘油三酯血症和2型糖尿病(sanyal aj等人,2010)。nash是nafld的一种极端形式。[0109]尽管脂质积聚失调发生在非酒精性脂肪性肝病光谱中，但肝细胞损伤的特征，肝细胞气球样变、细胞骨架变化(mallory-denk小体)和肝细胞凋亡，主要发生在nash中，并将nash与简单的脂肪变性区分开来。[0110]“纤维化”包含细胞外基质蛋白(包含肝脏中的胶原蛋白)的过度积聚。[0111]“肝硬化”包含肝脏瘢痕形成(纤维化)的晚期。[0112]“肝细胞癌(hcc)”包含主要发生在患有潜在慢性肝病和肝硬化的患者中的肝脏原发性恶性肿瘤。hcc现在是全球癌症死亡的第三大原因，超过500,000人受到影响。大多数抗癌药物对hcc无效。用于诊断hcc的方法包含超声、成像(ct扫描和mri)，但最准确的是肝活检后的病理学。目前针对hcc的治疗选项包含肝脏移植、切除癌症的手术、化学疗法和/或放射疗法。[0113]本领域技术人员可以诊断如nash、nafld、纤维化和肝硬化等肝脏病状，并且可以包含回顾病史、体检和各种测试。可以查看病史以了解风险因素，如体重/肥胖症、胰岛素抵抗、高水平的甘油三酯或血液中异常水平的胆固醇、代谢综合征和/或2型糖尿病。身体症状，包含肝脏肿大、胰岛素抵抗迹象(如指关节、肘部和膝盖上的皮肤变黑斑)和/或肝硬化迹象(如黄疸，这种情况会导致您的皮肤和眼白变黄)，可以提示肝脏疾病。用于诊断肝脏疾病的其它方法包含用于肝酶丙氨酸氨基转移酶(alt)和/或天冬氨酸氨基转移酶(ast)的血液测试。用于诊断肝脏疾病的其它方法包含影像学检查，包含腹部超声、磁共振成像(mri)、瞬时弹性成像、计算机断层扫描(ct)、超声弹性成像、mr弹性成像(mre)。[0114]以上都不是特别准确，并且非酒精性脂肪性肝炎(nash)的诊断是通过肝活检中特定组织学异常的存在和模式来定义的。病理学家观察脂肪、坏死性炎症和纤维化的组织学和评分。nash(是或否)、纤维化(f0到f4，f0为单纯性脂肪堆积，f4为严重纤维化/肝硬化)。一种对非酒精性脂肪性肝病(na)的特征进行评分的单独系统被称为nafld活性评分(nas)，其在本领域中是众所周知的，并且被开发为在治疗性试验期间测量nafld变化的工具。然而，一些研究使用nas的阈值，特别是nas≥5，作为nash的组织学诊断的替代指标(即在没有肝活检的情况下)。[0115]目前肝脏疾病的治疗因病因而异。医生通常会推荐旨在预防或延缓纤维化进展的治疗，如饮食改变、抗炎药物和胰岛素抵抗药物、胆固醇和糖尿病管理、运动和减肥和/或戒酒。[0116]在本发明的上下文中，“预防”肝脏疾病和/或肝脏病状还可以包含防止nafld或nash的进展(例如防止进展为纤维化和/或癌症)。在本发明的上下文中，预防还包含上调受试者肝脏中的抗氧化反应。预防还包含防止对治疗和/或疗法产生耐药性。例如，可以通过同时施用一种以上如本文所述的疗法/药物(组合疗法)来防止耐药性。[0117]优选地，mir-144在肝脏细胞中介导以下至少一项：[0118]i.nrf2活性和/或蛋白质水平；[0119]ii.细胞外ros的产生；[0120]iii.gata4磷酸化和/或活性；[0121]iv.细胞内糖原的水平；以及[0122]v.内源性抗氧化反应。[0123]“介导”包含以下含义：mir-144表达和/或活性负责或调节nrf2活性和/或蛋白质水平；细胞外ros的产生；gata4磷酸化和/或活性；细胞内糖原的水平；和/或内源性抗氧化反应。[0124]可以通过如在所附实例中描述的方法和通过本领域已知的方法测量gata4磷酸化，包含但不限于蛋白质印迹和染色质免疫沉淀(chip)，使用针对gata4的抗体来测量其与dna的结合。[0125]可以通过本领域已知的方法测量细胞内糖原的水平，包含但不限于使用糖原测定试剂盒(abcam；ab65620)。如所附实例中所述，发明人观察到用抑制mir-144的药剂处理的小鼠肝脏中储存的细胞内糖原水平增加(图5m)。与糖原储存增加一致，用抑制mir-144的药剂处理的小鼠的葡萄糖耐量测试显示，与对照小鼠相比，葡萄糖稳态得到改善(图5n)。[0126]如本文所使用的，“内源性抗氧化反应”包含细胞在不添加(外源性)抗氧化剂的情况下对氧化应激的自然反应。nrf2驱动内源性反应，因为它由细胞本身产生，并诱导编码能够清除ros的蛋白质的基因的表达。可以通过本领域已知的方法测量内源性抗氧化反应糖原，包含但不限于测量nrf2活性和蛋白质水平以及ros水平。[0127]优选地，mir-144表达和/或活性的降低在肝脏细胞中导致以下至少一项：[0128]i.nrf2活性和/或蛋白质水平增加；[0129]ii.细胞内ros降低和/或ros的释放降低；[0130]iii.gata4的磷酸化和/或活性降低；[0131]iv.细胞内糖原的水平增加；以及[0132]v.内源性抗氧化反应恢复和/或增加。[0133]在一个实施例中，mir-144的表达和/或活性降低导致葡萄糖稳态改善。[0134]可以在施用抑制mir-144的药剂后在受试者中测量上述参数中的每个参数。[0135]“nrf2活性和/或蛋白质水平增加”包含：在施用抑制mir-144的药剂后，与患有肝脏疾病和/或肝脏病状(其中氧化应激是促成因素)、未施用该药剂或施用了安慰剂的对照受试者相比，在患有肝脏疾病和/或肝脏病状(其中氧化应激是促成因素)的受试者中，nrf2活性和/或蛋白质水平增加。在一个实施例中，安慰剂是加扰对照寡核苷酸，如实例中描述的那些。可替代地，对照可以是包括用诱导氧化应激的h2o2处理但未用抑制mir-144的药剂处理的健康细胞的对照样品。[0136]在一个实施例中，与在不存在抑制剂的情况下nrf2活性和/或蛋白质水平相比，nrf2活性和/或蛋白质水平增加了至少2倍、或至少5倍、或至少10倍、或至少50倍。优选地，与在不存在抑制剂的情况下nrf2活性和/或蛋白质水平相比，nrf2活性和/或蛋白质水平增加了至少100倍、或至少1,000倍、或至少10,000倍。[0137]不受理论的束缚，因为已知mirna调节转录和翻译，并且mir-144的表达在肥胖受试者的肝脏细胞中增加，这与nrf2蛋白质水平的降低相关，发明人假设mir-144靶向nrf2的翻译。因此，mir-144的沉默或下调导致nrf2活性和/或蛋白质水平的增加。[0138]“细胞内ros降低和/或ros的释放降低”包含：在施用抑制mir-144的药剂后，与患有肝脏疾病和/或肝脏病状(其中氧化应激是促成因素)、未施用该药剂或施用了安慰剂的对照受试者相比，在患有肝脏疾病和/或肝脏病状(其中氧化应激是促成因素)的受试者中，细胞内ros和/或ros的释放减少。[0139]在一个实施例中，与在不存在抑制剂的情况下细胞内ros和/或ros的释放相比，细胞内ros和/或ros的释放降低了至少2倍、或至少5倍、或至少10倍、或至少50倍。优选地，与在不存在抑制剂的情况下细胞内ros和/或ros的释放相比，细胞内ros和/或ros的释放降低了至少100倍、或至少1,000倍、或至少10,000倍。[0140]“gata4的磷酸化和/或活性降低”包含：在施用抑制mir-144的药剂后，与患有肝脏疾病和/或肝脏病状(其中氧化应激是促成因素)、未施用该药剂或施用了安慰剂的对照受试者相比，在患有肝脏疾病和/或肝脏病状(其中氧化应激是促成因素)的受试者中，gata4活性和/或磷酸化减少。从所附实例中可以看出，当lm中的mir-144沉默时，肝细胞中的gata4磷酸化减少。[0141]在一个实施例中，与在不存在抑制剂的情况下gata4活性和/或磷酸化相比，gata4活性和/或磷酸化降低了至少2倍、或至少5倍、或至少10倍、或至少50倍。优选地，与在不存在抑制剂的情况下gata4活性和/或磷酸化水平相比，gata4活性和/或磷酸化降低了至少100倍、或至少1,000倍、或至少10,000倍。[0142]“细胞内糖原的水平增加”包含：在施用抑制mir-144的药剂后，与患有肝脏疾病和/或肝脏病状(其中氧化应激是促成因素)、未施用该药剂或施用了安慰剂的对照受试者相比，在患有肝脏疾病和/或肝脏病状(其中氧化应激是促成因素)的受试者中，细胞内糖原的水平增加。[0143]在一个实施例中，与在不存在抑制剂的情况下细胞内糖原的水平相比，细胞内糖原的水平增加了至少2倍、或至少5倍、或至少10倍、或至少50倍。优选地，与在不存在抑制剂的情况下细胞内糖原的水平相比，细胞内糖原的水平增加了至少100倍、或至少1,000倍、或至少10,000倍。[0144]“内源性抗氧化反应恢复”包含：在施用抑制mir-144的药剂后，内源性抗氧化反应在患有肝脏疾病和/或肝脏病状(其中氧化应激是促成因素)的受试者中恢复到与在未患有肝脏疾病和/或肝脏病状(其中氧化应激是促成因素)并且未施用该药剂的对照受试者中观察到的水平基本相似的水平。[0145]“内源性抗氧化反应增加”包含：在施用抑制mir-144的药剂后，与患有肝脏疾病和/或肝脏病状(其中氧化应激是促成因素)、未施用该药剂或施用了安慰剂的对照受试者相比，在患有肝脏疾病和/或肝脏病状(其中氧化应激是促成因素)的受试者中，内源性抗氧化反应增加。[0146]在一个实施例中，与在不存在抑制剂的情况下内源性抗氧化反应相比，内源性抗氧化反应增加了至少2倍、或至少5倍、或至少10倍、或至少50倍。优选地，与在不存在抑制剂的情况下内源性抗氧化反应相比，内源性抗氧化反应增加了至少100倍、或至少1,000倍、或至少10,000倍。如上所述，可以通过本领域已知的方法测量内源性抗氧化反应，包含但不限于测量nrf2活性和蛋白质水平以及ros水平。[0147]在一个实施例中，nrf2活性和/或蛋白质水平增加、细胞内ros减少和/或ros的释放减少、gata4的磷酸化和/或活性减少和/或内源性抗氧化反应恢复在肝细胞和/或肝脏巨噬细胞中发生。在一个实施例中，细胞内糖原的水平增加发生在肝细胞中。在一个实施例中，细胞内ros减少和/或ros的释放减少发生在内皮细胞和/或嗜中性粒细胞中。[0148]优选地，所述药剂选自包括以下的组：核酸分子和小分子[0149]“核酸”，也被称为“寡核苷酸”、“核酸序列”、“核酸分子”和“多核苷酸”，包含dna序列或其类似物，或rna序列或其类似物。核酸由核苷酸形成。“核苷酸”包含葡萄糖胺，所述葡萄糖胺包括核碱基和具有磷酸基团的糖，所述磷酸基团与糖共价连接。核苷酸可以用多种取代基中的任何一种进行修饰。[0150]在一些实施例中，核酸药剂被修饰，例如，以进一步稳定以抵抗核酸降解。示例性修饰包含核苷酸碱基或糖部分的修饰。核酸药剂可以包含经修饰的接头药剂，如在核苷酸序列的5'或3'末端的至少第一、第二或第三核苷酸间键中的硫代磷酸酯。在一个实施例中，核酸药剂包含2'-修饰的核苷酸，例如，2'-脱氧、2'-脱氧-2'-氟、2'-o-甲基、2'-o-甲氧基乙基(2'-0-moe)、2'-o-氨基丙基(2'-0-ap)、2'-o-二甲基氨基乙基(2'-o-dmaoe)、2'-o-二甲基氨基丙基(2'-0-dmap)、2'-o-二甲基氨基乙氧基乙基(t-0-dmaeoe)或2'-o-n-甲基乙酰胺基(2'-0-nma)。在特别优选的实施例中，核酸药剂包含至少一个2'-o-甲基修饰的核苷酸，并且在一些实施例中，核酸药剂的所有核苷酸包含2'-o-甲基修饰。在一些实施例中，核酸的糖部分可以被替换为例如非糖部分，如pna。[0151]关于特定修饰寡核苷酸的合成的教导可以在以下文献中找到：beaucage,serge l.“经修饰的寡核苷酸和缀合物的合成(synthesis of modified oligonucleotides and conjugates.)”《核酸化学实验室指南(current protocols in nucleic acid chemistry)》20(1):4.0.1-4.0.4.(2005)。[0152]在一个实施例中，核酸药剂可以是适体。适体可以被认为是具有基于核苷酸的疗法的性质的化学抗体。适体是特异性结合到分子靶标(如蛋白质)的小核酸分子。与通过与另一个核酸靶标杂交起作用的核酸治疗剂不同，适体形成允许与酶、生长因子、受体、病毒蛋白和免疫球蛋白特异性结合的三维形状。核酸适体通常包含允许适体形成二级结构(例如，通过形成茎环结构)的一级核苷酸序列，所述二级结构允许适体结合其靶标。在本发明的上下文中，适体可以包含dna、rna、核酸类似物(例如，肽核酸)、锁核酸、经化学修饰的核酸或其组合。可以通过本领域已知的各种程序为给定的配体设计适体。适体也可用于递送本发明的药剂(zhou j.,“适体靶向的细胞特异性rna干扰(aptamer-targeted cell-specific rna interference)”,《silenc》,2010,1:4)。[0153]在一个实施例中，药剂是小分子，包含但不限于可以直接结合到mir-144的小的合成有机分子。它们的分子量通常小于800da，并且具有以下性质，包含良好的溶解性、生物利用度、pk/pd、代谢等。可以设计小分子抑制剂以在至少三个不同阶段之一靶向mirna；它们可以干扰一级rna转录，它们可以通过dicer和risc抑制pre-mirna过程，或者它们可以抑制risc和靶mrna相互作用。关于特定修饰寡核苷酸的合成的教导可以在以下文献中找到：wen d.,“靶向微小rna的小分子用于癌症疗法：前景和障碍(small molecules targeting microrna for cancer therapy:promises and obstacles)”《控释杂志(j control release.)》2015年12月10日；219:237–247。[0154]术语“小分子”包含有机小分子、药物、前药和/或化合物。合适的小分子可以通过以下方法来鉴定：如筛选化合物大型文库(beck-sickinger和weber(2001)“生物学和化学的组合策略(combinational strategies in biology and chemistry)”(约翰威利父子出版社(john wiley&sons),奇切斯特,苏塞克斯)；通过核磁共振的结构-活性关系(shuker等人(1996)“发现蛋白质的高亲和力配体：nmr的sar(discovering high-affinity ligands for proteins:sar by nmr.)”《科学(science)》274:1531–1534)；编码的自组装化学文库(melkko等人(2004)“编码的自组装化学文库(encoded self-assembling chemical libraries.)”《自然生物技术》22:568–574)；dna模板化学(gartner等人(2004)“dna模板有机合成和大环文库的选择(dna-templated organic synthesis and selection of a library of macrocycles.)”《科学》305:1601-1605)；动态组合化学(ramstrom和lehn(2002)“通过动态组合文库发现药物(drug discovery by dynamic combinatorial libraries.)”《自然评论药物发现(nature rev.drug discov.)》1:26-36)；拘束(tethering)(arkin和wells(2004)“蛋白质-蛋白质相互作用的小分子抑制剂：朝着梦想前进(protein-protein interactions:progressing towards the dream.)”《自然评论药物发现》3:301-317)；和速度筛选(muckenschnabel等人(2004)“速度筛选：基于无标记液相色谱-质谱的高通量筛选，用于发现孤儿蛋白配体(speedscreen:label-free liquid chromatography-mass spectrometry-based high-throughput screening for the discovery of orphan protein ligands.)”《分析生物化学(anal.biochem.)》324:241–249)。通常，有机小分子对于多肽的解离常数在纳摩尔范围内，具体地说，对于具有空腔的抗原。大多数有机小分子粘合剂的优点包含易于制造、缺乏免疫原性、组织分布性质、化学修饰策略和口服生物利用度。优选分子量小于5000道尔顿的小分子，例如小于400、3000、2000或1000道尔顿，或小于500道尔顿。[0155]小分子还包含其前药的含义。例如，药剂可以作为前药施用，一旦进入受试者体内，所述前药就会被代谢或以其它方式转化为其活性形式。如本文所使用的，术语“前药”是指药物活性物质的前体或衍生物形式，其与母体药物相比活性较低并且能够被酶促活化或转化为更具活性的母体形式(参见，例如，d.e.v.wilman“癌症化疗前药(prodrugs in cancer chemotherapy)”《生化学会汇刊(biochemical society transactions)》14,375-382(第615次会议,贝尔法斯特,1986)和v.j.stella等人“前药：靶向药物递送的化学方法(prodrugs:chemical approach to targeted drug delivery)”《定向药物递送(directed drug delivery)》r.borchardt等人(编辑)第247-267页(人类出版社(humana press),1985))。[0156]优选地，所述药剂是选自包括以下的组的核酸分子：反义寡核苷酸和抑制性rna分子。[0157]“rna”包含包括至少一个核糖核苷酸残基的分子。“核糖核苷酸”包含在β-d-呋喃核糖部分的2'位置处具有羟基的核苷酸。所述术语涵盖双链rna、单链rna、具有双链和单链区域的rna、分离的rna如部分纯化的rna、基本上纯的rna、合成的rna、重组产生的rna以及改变的rna或类似物rna(通过添加、缺失、取代和/或改变一个或多个核苷酸而与天然存在的rna不同)。此类改变可以包含添加非核苷酸材料，如添加到sirna的末端或内部，例如在rna的一个或多个核苷酸处。本公开主题的rna分子中的核苷酸还可以包括非标准核苷酸，如非天然存在的核苷酸或化学合成的核苷酸或脱氧核苷酸。这些改变的rna可以被称为天然存在的rna的类似物或类似物。[0158]反义寡核苷酸的实例包含但不限于安塔够妙、合成肽核酸(pna)、lna/dna共聚物和缺口聚体(gapmer)。[0159]可以通过施用靶向mir-144序列的反义寡核苷酸来实现mirna功能的抑制。反义寡核苷酸通过沃森-克里克(watson-crick)结合形成mirna-反义寡核苷酸双链体而发挥作用，从而通过抑制与靶mrna的结合或通过募集rnase h进行降解而导致mirna失活。对mir-144具有更高亲和力或比mrna靶标具有更高丰度的反义寡核苷酸将防止mir-144的功能效应。[0160]产生反义寡核苷酸的方法在本领域是众所周知的，并且可以容易地适应产生靶向任何多核苷酸序列的反义寡核苷酸，参见例如joana filipa lima等人(2018)“抗mirna寡核苷酸：设计综合指南(anti-mirna oligonucleotides:a comprehensive guide for design)”,《rna生物学(rna biology)》,15:3,338-352。对给定靶标(即mir1-44)序列具有特异性的反义寡核苷酸序列的选择是基于对所选靶序列的分析和对二级结构、tm、结合能和相对稳定性的确定。可以基于它们相对不能形成二聚体、发夹或其它二级结构来选择反义寡核苷酸，所述二级结构会减少或阻止与宿主细胞中的靶mrna的特异性结合。mrna的高度优选的靶区域包含在aug翻译起始密码子处或附近的那些区域以及与mrna的5'区域基本上互补的那些序列。例如，可以使用oligo引物分析软件(molecular biology insights)的v.4和/或blastn2.0.5算法软件进行这些二级结构分析和靶标位点选择考虑(altschul等人,《核酸研究》1997,25(17):3389-402)。[0161]因此，在优选的实施例中，药剂是拮抗性反义寡核苷酸。反义寡核苷酸可以包括核糖核苷酸或脱氧核糖核苷酸。在一些实施例中，反义分子可以是单链或双链序列。应当理解，单链反义寡核苷酸可用于拦截和降解成熟的mirna。[0162]磷酸骨架与硫代磷酸酯(ps)键的胆固醇缀合和修饰都已被用于增强反义寡核酸的体内递送。3'胆固醇-缀合的、2'-o-me-修饰的安塔够妙已成为一种经过充分-验证的用于体内抑制mirna的实验工具(van rooij e等人《embo分子医学(embo mol med.)》2014年7月；6(7):851-64)。[0163]优选地，反义寡核苷酸具有至少一种化学修饰。标准化学修饰是本领域技术人员已知的并且包含2'-o-甲基或甲氧基乙基核苷酸、2'-f核苷酸和硫代磷酸酯骨架修饰的寡核苷酸，所有这些都已显示成功地干扰mirna效应。[0164]示例性修饰包含核苷酸碱基或糖部分的修饰。反义寡核苷酸可以由一种或多种“锁核酸”组成。锁核酸(lna)，也被称为“不可接近的rna”，是一种经修饰的rna核苷酸。lna核苷酸的核糖部分用连接2'和4'碳的额外桥进行修饰。该桥将核糖“锁定”在3'-内结构构象中，所述构象通常存在于dna或rna的a型中。lna核苷酸可以在需要时与寡核苷酸中的dna或rna碱基混合。锁定的核糖构象增强了碱基堆叠和骨架预组织，从而显著提高了寡核苷酸的热稳定性(熔化温度)。lna碱基可以包括在dna骨架中，但它们也可以包括在lna、2'-o-甲基rna、2'-甲氧基乙基rna或2'-氟rna的骨架中。这些分子可以包括磷酸二酯或硫代磷酸酯骨架。[0165]反义寡核苷酸可以包括肽核酸(pna)，其含有基于肽的骨架而不是糖-磷酸骨架。肽核酸(pna)是dna的合成类似物，具有通过接头与嘌呤和嘧啶核碱基连接的重复的n-(2-氨基乙基)-甘氨酸肽骨架。在一些实施例中，核苷酸的糖部分可以被替换为例如非糖部分，如pna。[0166]反义寡核苷酸可能含有的其它化学修饰包含但不限于糖修饰，如t-o-烷基(例如2'-o-甲基、2'-o-甲氧基乙基)、2'-氟和4'硫代修饰以及骨架修饰，如一种或多种硫代磷酸酯、二氨基磷酸酯吗啉代低聚物(pmo)或膦酰基羧酸酯键。本领域已知，2'-氧和4'-碳原子之间的亚甲基桥提供更高的结构刚性和增加的对rna反向链的选择性亲和力。还应理解，硫代磷酸酯骨架修饰足以稳定寡核苷酸以防止降解，并导致与血浆蛋白的高度结合，这减少了快速消除。反义寡核苷酸可以在核苷酸序列的5'或3'末端的至少第一、第二或第三核苷酸间键中包含硫代磷酸酯。在一个实施例中，反义寡核苷酸在5'端包括2个硫代磷酸酯键并且在3'端包括4个硫代磷酸酯键，并且任选地在3'端包括胆固醇修饰。硫代磷酸酯几乎分布于所有器官和组织(大脑除外)，但偏爱肝脏和肾脏。额外的2'-甲氧基或甲氧基乙烯修饰增加了稳定性并允许使用更低的剂量(baumann,v.和winkler,j.(2014).“基于mirna的疗法：寡核苷酸和非寡核苷酸药剂的策略和递送平台(mirna-based therapies:strategies and delivery platforms for oligonucleotide and non-oligonucleotide agents.)”《未来医药化学(future medicinal chemistry)》,6(17),1967–1984)。[0167]增强稳定性和提高功效的反义寡核苷酸的其它修饰，如以下文献中所述的修饰：urban e,“反义寡核苷酸的结构修饰(structural modifications of antisense oligonucleotides)”《farmaco.》2003年3月；58(3):243-58(其通过引用整体并入本文)，是本领域已知的并且适用于本发明的方法。[0168]在一个实施例中，反义寡核苷酸是反义吗啉代。吗啉代(mo)，也被称为吗啉代低聚物和磷酰二胺吗啉代低聚物(pmo)，是一种低聚物分子。其分子结构具有与dna和rna寡核苷酸相似的亚基，不同之处在于它们具有通过二氨基磷酸酯基团连接的亚甲基吗啉环骨架。此功能仍允许mo进行沃森-克里克碱基配对，但与常规寡核苷酸相比，其具有显著优势。mo不通过rnaseh机制发挥作用，而是专门结合其选定的靶标位点，以阻止细胞组分访问该靶标位点。该性质可用于阻断mrna分子的翻译起始位点、干扰mrna剪接、阻断mirna或其靶标以及阻断核酶活性。[0169]翻译阻断：通过空间阻断翻译起始复合物，吗啉代可以完全敲低许多靶序列的表达，以至于在等待现有蛋白质降解后，靶蛋白条带从蛋白质印迹中消失。吗啉代通常不会导致其rna靶标的降解；相反，它们会阻断靶标rna的生物学活性，直到该rna自然降解，从而释放吗啉代。[0170]剪接阻断：通过阻断参与剪接pre-mrna的位点，吗啉代可用于修饰和控制正常的剪接事件。这种活性可以通过rt-pcr方便地测定，其中成功的剪接修饰表现为电泳凝胶上rt-pcr产物条带的变化。该条带可能会转移到一个新的质量，或者，如果剪接修饰触发了无义介导的转录物衰减，则野生剪接的条带将失去强度或消失。[0171]在一些实施例中，反义寡核苷酸是安塔够妙(amir)。“安塔够妙”是与mirna序列至少部分互补的单链、经化学修饰的核糖核苷酸。与经典反义寡核苷酸的主要区别在于，安塔够妙旨在特异性靶向成熟mirna的“种子”序列，从而阻断mirna在ago2上的加工，并因此抑制mirna的功能。安塔够妙可以包括一种或多种经修饰的核苷酸，如2'-o-甲基-糖修饰。在一些实施例中，安塔够妙仅包括经修饰的核苷酸。安塔够妙还可以包括一个或多个硫代磷酸酯键，从而产生部分或完整的硫代磷酸酯骨架。安塔够妙可以在其3'端与胆固醇或其它部分连接，以促进体内递送和稳定性。已显示，胆固醇修饰的安塔够妙寡核苷酸在肝脏中积聚(park j.k.,“mir-221沉默阻断肝细胞癌并促进存活(mir-221silencing blocks hepatocellularcancer and promote survival)”,2011,《癌症研究(cancer res.)》,71(24):7608-7616)。安塔够妙以一种尚未被完全了解的方式使mirna沉默；据认为，mirna/安塔够妙双链体诱导mirna的降解和安塔够妙的再循环。[0172]在一个实施例中，反义寡核苷酸是“缺口聚体”。缺口聚体利用细胞内酶rnase h，其降解rna-dna异源双链体中的rna链。为了防止快速催化，这种反义寡核苷酸通常用硫代磷酸酯骨架合成。为了增加亲和力并保护寡核苷酸免受外切核酸酶的影响，已经在寡核苷酸的每一端插入了许多经化学修饰的核酸类似物，以产生所谓的缺口聚体。中间有六到八个未修饰的dna核苷酸的缺口介导rnase h降解的有效诱导。在这个dna缺口内只允许很少的碱基修饰，以免干扰催化。在一些实施例中，合适的反义分子是“缺口聚体”。在一个实施例中，缺口聚体是2'-o-甲氧基乙基缺口聚体，其在5'和3'末端均含有2'-o-甲氧基乙基修饰的核糖核苷酸，中心至少有十个脱氧核糖核苷酸。[0173]优选地，反义寡核苷酸包括与seq id no:1、seq id no:2、seq id no:3和/或seq id no:4中存在的核苷酸序列的至少一部分互补的核苷酸序列。[0174][0175]表1：mir-144的序列。[0176]“成熟mirna”包含完全加工的mirna链，或进入risc的sirna。在一些情况下，mirna具有一条成熟的链，其长度可以在约17-28个核苷酸之间变化。在其它情况下，mirna可以具有两条成熟的链，并且链的长度可以在约17个到28个核苷酸之间变化。[0177]反义寡核苷酸可以包括与mir-144的前体mirna序列(pre-mirna)部分互补或基本上互补的核苷酸序列。反义寡核苷酸可以包括与mir-144的茎环mirna序列部分互补或基本上互补的核苷酸序列。在一个实施例中，mir-144抑制剂是包括与5'-ggcugggauaucaucauauacuguaaguuugugaugagacacuacaguauagaugauguacuaguc-3'(seq id no:1)部分互补的序列的反义寡核苷酸。在一个实施例中，mir-144功能抑制剂是具有与mir-144的pre-mir-144序列(seq id no:1)基本上互补的序列的反义寡核苷酸。在一些实施例中，反义寡核苷酸包括与定位在pre-mir-144序列的茎环区之外的序列基本上互补的序列。[0178]在某些实施例中，反义寡核苷酸和靶核酸彼此互补。在某些此类实施例中，反义化合物与靶核酸完全互补。在某些实施例中，反义化合物包含一个错配。在某些实施例中，反义化合物包含两个错配。在某些实施例中，反义化合物包含三个或更多个错配。[0179]如本文所使用的，“互补的(complementary)”和“互补性(complementarity)”是可互换的，并且是指多核苷酸彼此形成碱基对的能力。碱基对通常通过反向平行的多核苷酸链或区域中的核苷酸单元之间的氢键形成。互补的多核苷酸链或区域可以以沃森-克里克方式进行碱基配对(例如，a与t、a与u、c与g)。完全互补性或100％互补性是指其中一个多核苷酸链或区域的每个核苷酸都可以与第二个多核苷酸链或区域的每个核苷酸发生氢键合的情况。小于完全互补性是指其中两个链或两个区域的一些(但不是全部)核苷酸可以彼此发生氢键合的情况。[0180]“部分互补”是指与靶mirna序列至少约50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％或90％互补的序列。[0181]“基本上互补”是指与靶mirna序列至少约90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％相同和互补的序列。还包含了与靶mirna序列具有100％互补性的序列。包含了：如果两个序列基本上互补，则可以在它们之间形成双链体。双链体可能有一个或多个错配，但双链体形成的区域足以下调mirna的表达。[0182]用于确定寡核苷酸之间或寡核苷酸与靶核酸之间的适当数量的错配的方法，如通过确定解链温度(tm)。tm或tn可以通过本领域已知的技术来计算，如在以下文献中描述的技术：freier等人(《核酸研究》,1997,25,22:4429-4443)。[0183]优选地，反义寡核苷酸包括与成熟mir-144序列中存在的核苷酸序列的至少一部分互补的核苷酸序列。[0184]在一个实施例中，反义寡核苷酸靶向mir-144的成熟序列(例如seq id no:2和/或3)。[0185]优选地，反义寡核苷酸包括与seq id no:1、seq id no:2和/或seq id no:3至少50％互补的核苷酸序列。[0186]反义寡核苷酸可以包括与成熟mir-144序列至少部分互补的序列，例如，与成熟mir-144序列至少约50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％或90％互补的序列。[0187]在一些实施例中，反义寡核苷酸可以与成熟mir-144序列基本上互补，即与成熟mir-144序列至少约90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％互补。在一个实施例中，反义寡核苷酸包括与成熟mir-144序列100％互补的序列。在一个实施例中，mir-144抑制剂是包括与5'-ggauaucaucauauacuguaagu-3'(seq id no:2)和/或5'-uacaguauagaugauguacu-3'(seq id no:3)部分互补的序列的反义寡核苷酸。在一个实施例中，mir-144抑制剂是包括与5'-ggauaucaucauauacuguaagu-3'(seq id no:2)和/或5'-uacaguauagaugauguacu-3'(seq id no:3)基本上互补的序列的反义寡核苷酸。[0188]在某些此类实施例中，靶向seq id no:1的反义寡核苷酸与seq id no:1至少90％互补。在某些此类实施例中，靶向seq id no:1的反义寡核苷酸与seq id no:1至少95％互补。在某些此类实施例中，靶向seq id no:1的反义寡核苷酸与seq id no:1 100％互补。在某些此类实施例中，靶向seq id no:2的反义寡核苷酸与seq id no:2至少90％互补。在某些此类实施例中，靶向seq id no:2的反义寡核苷酸与seq id no:2至少95％互补。在某些此类实施例中，靶向seq id no:2的反义寡核苷酸与seq id no:2 100％互补。在某些此类实施例中，靶向seq id no:3的反义寡核苷酸与seq id no:3至少90％互补。在某些此类实施例中，靶向seq id no:3的反义寡核苷酸与seq id no:3至少95％互补。在某些此类实施例中，靶向seq id no:3的反义寡核苷酸与seq id no:3 100％互补。在某些此类实施例中，靶向seq id no:4的反义寡核苷酸与seq id no:4至少90％互补。在某些此类实施例中，靶向seq id no:4的反义寡核苷酸与seq id no:4至少95％互补。在某些此类实施例中，靶向seq id no:4的反义寡核苷酸与seq id no:4 100％互补。[0189]“成熟mir-144序列”包含完全加工的mirna链，或进入risc的sirna。在一些情况下，mirna具有一条成熟的链，其长度可以在约17-28个核苷酸之间变化。可替代地，mirna可以具有两条成熟的链，并且链的长度可以在约17个到28个核苷酸之间变化。[0190]优选地，与mir-144序列中存在的核苷酸序列的至少一部分互补的核苷酸序列的长度为15个、16个、17个、18个、19个、20个、20个、21个、22个或23个核苷酸。[0191]在一些实施例中，反义寡核苷酸是例如安塔够妙，其长度为约6个到约30个核苷酸、约10个到约30个核苷酸、约12个到约28个核苷酸。适用于抑制mirna的反义寡核苷酸的长度可以为约15个到约50个核苷酸，更优选地长度为约18个到约30个核苷酸，更优选地长度为约19个到约30个核苷酸，并且最优选地长度为约19个到约25个核苷酸。在一些实施例中，反义寡核苷酸的长度为至少约3个、4个、5个、6个、7个、8个、9个、10个、11个、12个、13个、14个、15个、16个、17个、18个、19个、20个、21个、22个、23个、24个、25个、26个、27个、28个、29个、30个或更多个核苷酸。在一些实施例中，反义寡核苷酸的长度为至少19个核苷酸。[0192]在某些实施例中，反义寡核苷酸的长度为8个核苷酸。在某些实施例中，反义寡核苷酸的长度为9个核苷酸。在某些实施例中，反义寡核苷酸的长度为10个核苷酸。在某些实施例中，反义寡核苷酸的长度为11个核苷酸。在某些实施例中，反义寡核苷酸的长度为12个核苷酸。在某些实施例中，反义寡核苷酸的长度为13个核苷酸。在某些实施例中，反义寡核苷酸的长度为14个核苷酸。在某些实施例中，反义寡核苷酸的长度为15个核苷酸。在某些实施例中，反义寡核苷酸的长度为16个核苷酸。在某些实施例中，反义寡核苷酸的长度为17个核苷酸。在某些实施例中，反义寡核苷酸的长度为18个核苷酸。在某些实施例中，反义寡核苷酸的长度为19个核苷酸。在某些实施例中，反义寡核苷酸的长度为20个核苷酸。[0193]在一些实施例中，反义寡核苷酸是安塔够妙，其长度为约6个到约30个核苷酸、约10个到约30个核苷酸、约12个到约28个核苷酸、约19个到约25个核苷酸。适用于抑制mirna的安塔够妙的长度可以为约15个到约50个核苷酸，更优选地长度为约18个到约30个核苷酸，并且最优选地长度为约19个到约25个核苷酸。在一些实施例中，mirna分子的安塔够妙的长度为至少约3个、4个、5个、6个、7个、8个、9个、10个、11个、12个、13个、14个、15个、16个、17个、18个、19个、20个、21个、22个、23个、24个、25个、26个、27个、28个、29个、30个或更多个核苷酸。在一些实施例中，mirna分子的安塔够妙的长度为至少19个核苷酸。[0194]在一个实施例中，反义寡核苷酸基本上是单链的并且包括与成熟mir-144的核苷酸序列或pre-mir-144核苷酸序列的19个连续核苷酸基本上互补和/或与成熟mir-144的核苷酸序列或pre-mir-144核苷酸序列的种子序列中的6个连续核苷酸基本上互补的序列。优选地，反义寡核苷酸包括与pre-mir-144核苷酸序列相差不超过1个、2个、3个、4个或5个核苷酸的核苷酸序列。优选地，反义寡核苷酸包括与成熟mir-144核苷酸序列相差不超过1个、2个、3个、4个或5个核苷酸的核苷酸序列。[0195]优选地，反义寡核苷酸包括与seq id no:4至少80％、85％、90％、95％或100％互补的核苷酸序列。[0196]在一个实施例中，反义寡核苷酸靶向mir-144的种子序列(例如seq id no:4)。种子区域是6-8个核苷酸长的序列，位于mirna的5'末端(成熟mirna的2-7位或2-8位核苷酸)。[0197]反义寡核苷酸可以包括与mir-144序列至少部分互补的序列，例如，与mir-144序列的种子序列至少约50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％或90％互补的序列。在一些实施例中，反义寡核苷酸可以与mir-144序列的种子序列基本上互补，即与成熟mir-144序列至少约90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％互补。在一个实施例中，反义寡核苷酸包括与mir-144序列的种子序列100％互补的序列。在一个实施例中，mir-144抑制剂是包括与5'-gauauca-3'(seq id no:4)部分互补的序列的反义寡核苷酸。在一个实施例中，mir-144抑制剂是包括与5'-gauauca-3'(seq id no:4)基本上互补的序列的反义寡核苷酸。[0198]在一些实施例中，mir-144抑制剂是包括与成熟mir-144序列互补的序列的安塔够妙。在一个实施例中，mir-144抑制剂是具有与(seq id no:1)部分互补或基本上互补的序列的安塔够妙。在另一个实施例中，mir-144抑制剂是具有与(seq id no:2)部分互补或基本上互补的序列的安塔够妙。在另一个实施例中，mir-144抑制剂是具有与(seq id no:3)部分互补或基本上互补的序列的安塔够妙。在另一个实施例中，mir-144抑制剂是具有与(seq id no:4)部分互补或基本上互补的序列的安塔够妙。[0199]如上文所讨论的，在一些实施例中，mir-144抑制剂是经化学修饰的反义寡核苷酸。在一个实施例中，mir-144抑制剂是包括与(seq id no:1)基本上互补的序列的经化学修饰的反义寡核苷酸。在另一个实施例中，mir-144抑制剂是包括与(seq id no:2)基本上互补的序列的经化学修饰的反义寡核苷酸。在另一个实施例中，mir-144抑制剂是包括与(seq id no:3)基本上互补的序列的经化学修饰的反义寡核苷酸。在另一个实施例中，mir-144抑制剂是包括与(seq id no:4)基本上互补的序列的经化学修饰的反义寡核苷酸。[0200]在优选的实施例中，药剂是一种靶向mir-144的反义寡核苷酸，例如可从dharmacon商购的miridian微小rna mmu-mir-144-5p发夹抑制剂；ih-301058-02，或可从dharmacon商购的miridian微小rna hsa-mir-144-3p发夹抑制剂；ih-300612-06。[0201]在某些实施例中，靶向mir-144的反义寡核苷酸包括选自表2中所示核苷酸序列的核苷酸序列。在某些实施例中，靶向seq id no:1-2和4中任一个的反义寡核苷酸包括选自表2中所示核苷酸序列的核苷酸序列。[0202]表2中seq id no中示出的核苷酸序列独立于任何修饰。因此，由seq id no定义的反义寡核苷酸可以独立地包括如本文所述的一种或多种修饰。[0203]表2展示了靶向mir-144的反义寡核苷酸的实例。[0204]在一个实施例中，反义寡核苷酸包括与seq id no:8、seq id no:9、seq id no:10、seq id no:11、seq id no:12和/或seq id no:13中存在的核苷酸序列的至少一部分相同的核苷酸序列。[0205]靶标序列(5'-3')seq id nomir-144acuacaguauagaugaugucu8mir-144acuacaguauagaugauaucu9mir-144cuuacaguauaugaugauauc10mir-144aguacaucaucuauacugua11mir-144(x)nugauguc(x)n12mir-144(x)nugauauc(x)n13[0206]表2.靶向mir-144的反义寡核苷酸的实例[0207]在一个实施例中，“x”是任何核苷酸并且“n”是1-10的整数。在一个实施例中，n是1、2、3、4、5、6、7、8、9或10中的任一个。[0208]在一个实施例中，表2中的序列可以包括如本文所讨论的一种或多种化学修饰。在一个实施例中，seq id no:10被如下修饰：5'-mc/zen/mu mumamc mamgmu mamuma mumgma mumgma mumamu mc/3zen/-3'，其中“m”代表2'-o-甲基修饰的寡核苷酸，“zen”代表n,n-二乙基-4-(4-硝基萘-1-基唑)-苯胺，用于提高结合亲和力并减少外切核酸酶降解。[0209]在一个实施例中，seq id no:11被如下修饰：5'-asgsuacaucaucuauacusgsusas-chol-3'，其中下标‘s’代表硫代磷酸酯键，并且‘chol’代表连接的胆固醇。如上文所讨论的，一种或多种核苷酸可以是2'-o-甲基修饰的寡核苷酸。[0210]反义寡核苷酸或其一部分可以与表2中公开的seq id no具有确定的同一性百分比。如本文所使用的，如果序列具有相同的核苷酸配对能力，则它与本文公开的序列相同。例如，含有尿嘧啶代替胸苷的rna将被认为是相同的，因为它们都与腺嘌呤配对。这种同一性可以在寡聚化合物的整个长度上，或在反义寡核苷酸的一部分中(例如，可以将27聚体的核苷酸1-20与20聚体进行比较，以确定寡聚化合物与seq id no.的同一性百分比)。本领域技术人员理解，反义寡核苷酸不需要具有与本文所述的序列相同的序列，以便与本文所述的反义寡核苷酸具有相似的功能。[0211]百分比同一性是根据具有相同碱基配对的碱基数计算的，所述碱基配对对应于与其比较的seq id no或反义寡核苷酸。不相同的碱基可以彼此相邻，分散在整个寡核苷酸中，或两者兼而有之。例如，与20聚体的核苷酸2-17具有相同序列的16聚体与20聚体具有80％的同一性。可替代地，含有与20聚体不同的四个核苷酸的20聚体也与20聚体具有80％的同一性。与18聚体的核苷酸1-14具有相同序列的14聚体与18聚体具有78％的同一性。这种计算是本领域技术人员已知的。[0212]在另一个实例中，包括20个核苷酸靶序列的互补物的完整序列的30个核苷酸反义寡核苷酸将包括与20个核苷酸靶序列的互补物具有100％同一性的部分，同时进一步包括额外的10个核苷酸部分。在优选的实施例中，本文提供的寡核苷酸与本文公开的靶序列(即mir-144)的互补物的至少一部分具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的同一性。[0213]两个核酸分子之间的百分比序列同一性可以使用合适的计算机程序来确定，例如针(emboss)比对工具(madeira f等人,《核酸研究》,2019年4月12日)。[0214]在某些实施例中，反义寡核苷酸可以包括与表2列出的任何序列具有至少约50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％或90％同一性的序列。在一些实施例中，反义寡核苷酸可以与表2列出的任何序列具有至少约90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％的同一性。[0215]在本发明的其它实施例中，mir-144抑制剂可以是抑制性rna分子，如核酶、mirna海绵、sirna或shrna。[0216]用于抑制mir-144功能的另一种方法是施用具有与成熟mir-144序列至少部分相同和部分互补的双链区的抑制性rna分子。抑制性rna分子可以是双链小干扰rna(sirna)或包括茎环结构的短发夹rna分子(shrna)。[0217]术语“小干扰rna”、“短干扰rna”、“小发夹rna”、“sirna”和shrna可互换使用，并且是指能够介导rna干扰(rnai)或基因沉默的任何核酸分子。在一个实施例中，sirna包括双链多核苷酸分子，所述双链多核苷酸分子包括互补的有义区和反义区，其中反义区包括与靶核酸分子(例如，编码brcaa1的核酸分子)的区域互补的序列。在另一个实施例中，sirna包括单链多核苷酸，所述单链多核苷酸具有自身互补的有义区和反义区，其中反义区包括与靶核酸分子的区域互补的序列。在另一个实施例中，sirna包括具有一个或多个环结构的单链多核苷酸和包括自身互补的有义区和反义区的茎，其中反义区包括与靶核酸分子的区域互补的序列，并且其中多核苷酸可以在体内或体外加工以产生能够介导rnai的活性sirna。如本文所使用的，sirna分子不必限于仅含有rna的那些分子，而是进一步涵盖经化学修饰的核苷酸和非核苷酸。[0218]优选地，抑制性rna分子包括双链区，并且优选地，其中所述双链区包括与seq id no:1、seq id no:2、seq id no:3和/或seq id no:4中存在的核苷酸序列的至少一部分基本上相同和基本上互补的核苷酸序列。[0219]优选地，所述双链区包括与seq id no:1、seq id no:2和/或seq id no:3中存在的核苷酸序列的至少一部分至少50％互补的核苷酸序列。[0220]优选地，所述双链区包括与成熟mir-144序列基本上相同和基本上互补的核苷酸序列。[0221]抑制性rna分子的双链区可以包括与成熟mirna序列至少部分相同和部分互补(例如，约50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％或90％相同和互补)的序列。在一些实施例中，抑制性rna的双链区包括与成熟mirna序列至少基本上相同和基本上互补的序列。[0222]“部分相同和部分互补”包含与靶多核苷酸序列至少约95％、96％、97％、98％或99％相同和互补的序列。[0223]“基本上相同和基本上互补”包含与靶多核苷酸序列至少约90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％相同和互补的序列。在其它实施例中，抑制性rna分子的双链区可以含有与靶mirna序列具有100％同一性和互补性的序列。如上文所讨论的，如果两个序列基本上互补，则可以在它们之间形成双链体。双链体可能有一个或多个错配，但双链体形成的区域足以下调mirna的表达。[0224]在一个实施例中，mir-144抑制剂是包括双链区的抑制性rna分子，其中所述双链区包括与成熟mir-144序列(例如seq id no:2和/或seq id no:3)具有100％同一性和互补性的序列。在另一个实施例中，mir-144抑制剂是包括双链区的抑制性rna分子，其中所述双链区包括与种子mir-144序列(例如seq id no:4)具有100％同一性和互补性的序列。在一些实施例中，mir-144功能抑制剂是包括双链区的抑制性rna分子，其中所述双链区包括与成熟mir-144序列具有至少约50％、55％、60％、65％、705、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％或99％同一性和互补性的序列。s.等人,《分子医学的发展趋势(trends mol.med.)》,2009,15:491-500)。[0235]优选地，使用以下任一种将药剂递送至肝脏细胞：[0236]-物理方法，如：肠胃外施用、直接注射或电穿孔；[0237]-递送载体(vehicle)，如：含葡聚糖的颗粒、含脂质的囊泡、含病毒的载体、含聚合物的载体、含肽的载体和外泌体。[0238]在一个实施例中，递送载体包含多于一个组分。例如，其可以包含一种或多种脂质部分、一种或多种肽、一种或多种聚合物、一种或多种病毒载体或其组合。[0239]例如，在本发明的某些实施例中，mir-144抑制剂可以通过物理方法施用，例如通过肠胃外施用，如静脉内注射或皮下注射，或通过直接注射到组织中(例如肝脏组织中)。在一些实施例中，可以通过口服、经皮、腹膜内、皮下、缓释、控释、延迟释放、栓剂或舌下施用途径施用mir-144抑制剂。在其它实施例中，mir-144的调节剂可以通过导管系统施用。[0240]在优选的实施例中，mir-144抑制剂通过静脉内施用递送。[0241]用于递送至肝脏的物理方法在本领域中是已知的并且包含通过针头注射、基因枪(弹道轰击)、电穿孔、超声介导的递送(声孔效应)和流体动力递送进行肝内递送(kamimura k,liu d.“用于将核酸递送至肝脏的物理方法(physical approaches for nucleic acid delivery to liver.)”《美国药剂学科学家协会杂志(aaps j.)》2008；10(4):589-595)。[0242]在本发明的某些实施例中，mir-144抑制剂可以通过含葡聚糖的颗粒来施用。如本文所使用的，“葡聚糖封装的”可以指为核酸药剂提供完全封装、部分封装或两者的调配物。在一些实施例中，核酸药剂完全封装在葡聚糖调配物中(例如，以形成核酸-葡聚糖颗粒)。[0243]用于制备含葡聚糖颗粒的方法在本领域中是已知的，并且在实例中进行了描述，参见例如wo2014134509(通过引用并入)，其公开了肽修饰的葡聚糖颗粒(pcgp)和/或胺修饰的葡聚糖颗粒(amgp)，用于向细胞递送有效载荷分子，具体地说，核酸有效载荷分子。其中还公开了制备此类颗粒的方法和使用此类颗粒的方法，例如，用于介导体外和体内基因沉默。wo2009058913中公开了用于使用酵母细胞壁颗粒将药剂(例如，基因沉默剂，如核酸)和分子递送至细胞的方法和组合物，所述文献通过引用并入。[0244]在一个实施例中，核酸药剂被封装在从酿酒酵母提取的并且主要由β-1,3-d-葡聚糖(凝集素-1受体和由巨噬细胞表达的其它受体的配体)构成的微米大小的葡聚糖壳(葡聚糖封装的sirna颗粒，gerp)中。[0245]在本发明的某些实施例中，mir-144抑制剂可以通过含脂质的囊泡来施用。“含脂质的囊泡”或“脂质颗粒”包含可用于将药剂递送至受试者的任何脂质组合物，包含但不限于脂质纳米颗粒和脂质体，其中水性体积被两亲性脂质双层封装；或其中脂质包被包括大分子组分的内部，如包括干扰rna序列的质粒，具有减少的水性内部；或脂质聚集体或胶束，其中封装的组分包含在相对无序的脂质混合物中。脂质颗粒被导向肝脏主要是因为它们的大小。[0246]“脂质体”包含由排列成一个或多个球形双层的两亲性脂质构成的囊泡。[0247]脂质体是具有水性内部和由亲脂性材料形成的膜的单层或多层囊泡。水性内部含有活性剂/药物。脂质体膜在结构上类似于生物膜，因此当脂质体被应用至组织时，脂质体开始与细胞膜合并，并且随着脂质体的合并和细胞进展，脂质体内容物被排空进入靶细胞，在所述靶细胞中活性剂可以起作用。因此，脂质体对于将活性成分转移以及递送至靶位点是有用的。[0248]脂质体分为两个广泛的类别。阳离子脂质体具有能够融合至细胞壁的优势。阳离子脂质体是带正电荷的脂质体，其与带负电荷的dna分子相互作用以形成稳定的复合物。带正电荷的dna/脂质体复合物结合至带负电荷的细胞表面并且内化于内体中。由于内体中的酸性ph，脂质体破裂，从而将其内容物释放到细胞质中。在一个实施例中，药剂与脂质(如阳离子脂质)复合。阳离子脂质可以是以下中的一种或多种：n,n-二油基-n,n-二甲基氯化铵(dodac)、n,n-二硬脂基-n,n-二甲基溴化铵(ddab)、n-(1-(2,3-二油酰氧基)丙基1)-n,n,n-三甲基氯化铵(dotap)、n-(1-(2,3-二油酰氧基)丙基1)-n,n,n-三甲基氯化铵(dotma)、n,n-二甲基1-2,3-二油基氧基)丙胺(dodma)及其混合物。[0249]非阳离子脂质体尽管不能够一样有效地与细胞壁融合，但是被体内巨噬细胞摄取。对ph敏感的或带负电荷的脂质体包埋dna而不是与其复合。由于dna和脂质均带有类似的电荷，所以会出现排斥而非复合物形成。然而，一些dna包埋于这些脂质体的水性内部。对ph敏感的脂质体已被用于将dna递送至培养中的细胞单层。在一个实施例中，药剂与脂质(如非阳离子脂质)复合。非阳离子脂质可以是以下中的一种或多种：二油酰磷脂酰乙醇胺(dope)、棕榈酰油酰磷脂酰胆碱(popc)、鸡蛋磷脂酰胆碱(epc)、二硬脂酰磷脂酰胆碱(dspc)、胆固醇及其组合。[0250]包括一种或多种糖脂的各种脂质体在本领域中是已知的，kraft jc,“脂质体和脂质纳米颗粒药物递送系统的新兴研究和临床发展趋势(emerging research and clinical development trends of liposome and lipid nanoparticle drug delivery systems.)”《药物科学杂志(journal of pharmaceutical sciences.)》2014；103(1):29-52。包括用一种或多种亲水性聚合物衍生化的脂质的许多脂质体及其制备方法是本领域已知的。脂质体通常包含多种组分，如阳离子脂质(例如氨基脂质)、靶向部分、融合性脂质和/或聚乙二醇化脂质中的一种或多种。[0251]“融合性”包含脂质体或其它药物递送系统与细胞膜融合的能力。膜可以是质膜或围绕细胞器的膜，如内体。[0252]含有脂质的囊泡及其制备方法公开于以下文献中：美国专利第5,705,385号；第5,981,501号；第5,976,567号；第6,586,410号；第6,534,484号；wo 96/40964；和wo 00/62813。[0253]包括核酸的许多脂质体在本领域中是已知的，参见例如wo 96/40062，其公开了一种用于将高分子量核酸封装在脂质体中的方法，所述方法提供了高核酸包埋效率。所得组合物提供增强的体外和