具有κ活性的阿片受体拮抗剂和沃替西汀用于治疗具有忧郁特征的抑郁障碍的用途
发明领域
本发明涉及具有κ活性的用于在治疗具有忧郁特征的抑郁障碍中使用的 阿片拮抗剂。本发明进一步涉及用于在治疗具有忧郁特征的抑郁障碍中使用 的具有κ活性的阿片拮抗剂和沃替西汀的组合。本发明还涉及包含具有κ活性 的阿片拮抗剂、和沃替西汀的药物组合物。
发明背景
阿片拮抗剂是对阿片受体起作用的受体拮抗剂。纳洛酮和纳曲酮是常用 的阿片拮抗剂，它们是不会激活受体的竞争性拮抗剂。这有效阻断了受体， 从而防止身体对鸦片剂和内啡肽做出响应。
一些阿片拮抗剂不是纯拮抗剂，但是事实上的确产生一些弱阿片部分激 动剂效应，并且当以高剂量向阿片初试个体给予时，可以产生止痛作用。此 类化合物的实例包括烯丙吗啡和左洛啡烷。
对于一些目的而言，弱的部分激动剂效应可以是有用的，并且先前已经 用于以下目的，如使用烯丙吗啡对前阿片成瘾者的长期维持；然而，它还可 以具有以下缺点，如加重已经服用过量非阿片镇静剂(如酒精或巴比妥酸 盐)的患者的呼吸抑制。另一方面，纳洛酮没有部分激动剂效应，并且事实 上是μ阿片受体的部分反向激动剂，并且因此是用于治疗阿片服药过量的优选 解毒药。
纳曲酮也是部分反向激动剂，并且在阿片成瘾的治疗中利用了这种特 性，因为持续疗程的低剂量纳曲酮可以逆转改变的稳态，改变的稳态由阿片 激动剂药物的长期滥用造成。
丁丙诺啡是既具有部分激动剂作用又具有拮抗剂作用的阿片。去甲-双纳 托啡亚胺(nor-binaltorphimine)(去甲-BNI)是选择性κ-阿片受体拮抗剂。
作为阿片拮抗剂的实例的纳美芬[17-(环丙基甲基)-4,5-α-环氧-6-亚甲基吗 啡喃-3,14-二醇]具有以下分子通式：
并且可以使用本领域中熟知的方法制备，例如通过从去甲羟基吗啡酮生产纳 曲酮，如在WO2012/059103中所述的，并且随后从纳曲酮生产纳美芬，例如 通过维蒂希(Wittig)反应，如在WO2010/136039中所述的。盐酸纳美芬二水 合物披露于WO2010/136039中。
纳美芬是具有不同μ、δ和κ受体谱的阿片系统调节剂。体外研究已经证 明，纳美芬是对μ和δ受体具有拮抗剂活性并且对κ受体具有部分激动剂活性的 选择性阿片受体配体。
纳美芬的主要特征在于它在1.6nM的Ki/EC50下对κ-阿片受体具有活性。 对μ-阿片受体和δ-阿片受体的活性分别为(1.8nM的Ki/EC50)和(40nM的 Ki/EC50)。对κ阿片系统在介导心境中的作用的理解在过去十年中大幅增长。 κ-选择性阿片激动剂(包括U-69593和U-50488)在啮齿动物模型(包括颅内 自我刺激和强迫游泳测试)中产生兴趣缺乏和促抑郁表型。在人类中，κ激动 剂给予(例如，MR2034或丹酚(salvinorin)A)产生稳健的解离效应和认知 分裂，它们和与经典血清素能致幻剂相关的症状部分地但不完全地重叠。此 外，啮齿动物中的通过应激或κ受体激活产生的促抑郁表型通过κ拮抗剂或通 过强啡肽或κ阿片受体的基因缺失被阻断。
已经在由灵北公司(Lundbeck)进行的三个III期研究(两个确认性的6 个月的疗效研究和一个1年的安全研究)(Mann(曼)等人.Extendingthe TreatmentOptionsinAlcoholDependence:ARandomizedControlledStudyofAs- NeededNalmefene(扩展酒精依赖的治疗方案：按需纳美芬的随机对照研究). Biol.Psychiatry.(生物精神病学)(2013)73(8):706-713；Gual(瓜尔)等人. Arandomised,double-blind,placebo-controlled,efficacystudyofnalmefene,as- neededuse,inpatientswithalcoholdependence(纳美芬的随机、双盲、安慰剂 对照疗效研究，在患有酒精依赖的患者中按需使用).Eur. Neuropsychopharmacol.(欧洲神经精神药理学)(2013)11:1432-1442)以及由 Biotie公司进行的五个酒精使用障碍研究(Karhuvaara(卡尔胡瓦拉)等人. Alcohol.ClinExpRes.(酒精中毒-临床与实验研究)(2007)31:1179-1187)中 评估了纳美芬在酒精依赖的治疗中的疗效和耐受性。
在2013年2月在欧盟(EU)准予了用于减少患有酒精依赖的成年患者的 酒精消耗的口服纳美芬(商品名)的上市许可，这些患者具有高饮 酒风险水平(DRL)而没有躯体戒断症状并且不需要立即解毒。
沃替西汀[1-[2-(2,4-二甲基-苯基硫烷基)-苯基]-哌嗪]具有以下分子通式：
包括WO03/029232和WO2007/144005在内的国际专利申请披露了沃替西汀及 其药学上可接受的盐。沃替西汀从前在文献中被称为LUAA21004。
沃替西汀是5-HT3、5-HT7和5-HT1D受体的拮抗剂，是5-HT1A受体的激动 剂和5-HT1B受体的部分激动剂并且是血清素转运体抑制剂。另外，已经证明 沃替西汀在脑的特定区域中增强神经递质血清素、去甲肾上腺素、多巴胺、 乙酰胆碱以及组胺的水平。所有这些活性被认为是临床相关的并且可能涉及 该化合物的作用机制(J.Med.Chem.(药物化学杂志)(2011)，54:3206- 3221；Eur.Neuropshycopharmacol.(欧洲神经精神药理学)(2008)，18(增刊4): S321；欧洲神经精神药理学(2011)，21(增刊4):S407-408；Int.J.Psychiatry ClinPract.(精神病学与临床实践国际杂志)(2012)，5:47)。
在临床试验中已经显示沃替西汀是一种用于抑郁的安全且有效的治疗。 由阿尔瓦雷斯(Alvares)等人(Adouble-blind,randomized,placebo-controlled, activereferencestudyofLuAA21004inpatientswithmajordepressivedisorder (在患有重性抑郁障碍的患者中进行的LuAA21004的双盲、随机、安慰剂对 照活性参考研究).Int.J.Neuropsychopharmacol.(国际神经精神药理学杂 志)(2012)；15(5):589-600)描述了来自一项概念验证研究的结果，该研究在 患有重性抑郁障碍(MDD)的患者中评估该化合物的疗效和耐受性。来自这 一在每组中具有大约100位患者的为时六周、随机的、以安慰剂为对照的研究 的结果显示，沃替西汀与安慰剂在治疗患有MDD的患者的抑郁和焦虑症状中 区别显著。还报道了，在临床实验室结果、生命体征、体重或ECG参数中未 见到临床上相关的变化。来自一项长期研究的结果还显示，沃替西汀可有效 预防罹患MDD的患者的复发(Eur.Neuropsychopharmacol.(欧洲神经精神药 理学)21(增刊3)，S396-397，2011)。在国际临床精神药理学杂志(Int.Clin. Psychopharm.(2012)，27:215-227)中报道的关于老年抑郁患者的研究显示， 沃替西汀可以用来治疗认知功能障碍。
在2013年9月，FDA批准了在商品名BrintellixTM下的用于治疗重性抑郁障 碍的沃替西汀。
特征在于心境消极、动机降低以及有时兴趣缺乏和精力减少的重性抑郁 每年影响全球几乎5％的人。当前的抗抑郁药对于一些患者而言效果良好，但 是约60％的患者遭受未解决的残余症状或不足的治疗应答。
在精神疾病诊断与统计手册(DiagnosticandStatisticalManualofMental Disorders，第5版(DSM-V)，美国精神病学协会(AmericanPsychiatric Association)，2013)中；具有忧郁特征的抑郁障碍的特征在于例如：
A.以下项之一：
1.对所有或几乎所有活动丧失愉悦感；
2.对通常可产生愉悦感的刺激缺乏反应性(即使当遇到好事时仍不感到 好受些)；
B.以下项中的三项或更多项：
1.深深的沮丧，绝望
2.在早晨常常更糟糕的抑郁
3.清晨觉醒
4.显著的精神运动性阻滞或激动
5.明显的食欲减退或体重减轻
6.过度的或不当的内疚。
如果在发作的最严重阶段存在这些特征，则应用指示语“具有忧郁特 征”。几乎完全没有愉悦能力，不仅仅是减少。用于评估缺乏心境反应性的 准则是即使高度期望的事件也与心境的豁然开朗无关。心境一点也不开朗， 或它仅部分地开朗(例如，每次仅持续数分钟，达到正常的20％-40％)。特 征为“具有忧郁特征”指示语的心境的“独特特性”与在非忧郁抑郁发作期 间的体验存在质的不同。被描述为仅仅更严重、持续更长时间或无理由性存 在的抑郁的心境在特性上不被认为是独特的。精神运动变化几乎总是存在并 且可被其他人观察到。忧郁特征仅在同一个体中展现出适度倾向的跨发作重 复。相对于门诊患者，它们在入院患者中更频繁；与更严重的重性抑郁发作 相比，不太可能出现在较轻的抑郁发作中；并且更可能出现在具有精神病特 征的那些中(精神疾病诊断与统计手册，第5版(DSM-V)，美国精神病学协 会，2000)。
酒精依赖和抑郁障碍的共发病是常见的并且主要地是基于来自对在一方 面为酒精依赖并且在另一方面为心境障碍之间的共发病的复杂性进行说明的 流行病学研究的发现(Grant(格兰特)和Hartford(哈特福德)，Drugand AlcoholDependence(药物与酒精依赖)，(1995)，第39卷:197-206.； Swendsen(斯文德森)等人，ComprehensivePsychiatry(综合精神病学)， (1998)，第38卷(4):176-184；斯文德森和Merikangas(梅里凯加斯)，Clin. Psychol.Rev.(临床心理学评论)，(2000)，第20卷(2):173-189；Kessler(凯 斯勒)等人，Arch.Gen.Psychiatry(普通精神病学档案)，(1997)，第54卷: 313-321)。
这些研究还已经显示，抑郁障碍与酒精依赖之间存在高水平的终生共发 病。与未患抑郁的患者相比，患有抑郁障碍的患者具有增加的患上酒精依赖 的风险。同样地，与未患酒精依赖的患者相比，患有酒精依赖的患者具有增 加的共患抑郁障碍的风险。
一项最近的研究估计16％的抑郁患者还患有可诊断的成瘾障碍(Sher (谢尔)等人，J.Clin.Psychiatry(临床精神医学杂志)，69(2008)，第907- 915页)。这样的共发病将患者置于更大的风险。抑郁患者中的共患物质使用 与更大的症状严重性、不足的治疗应答、更差的预后(包括增加的自杀风 险)以及抑郁症状的持久性相关(Thase(萨塞)等人，J.Clin.Psychiatry (临床精神医学杂志)，62(增刊20)(2001)，第32-41页以及Blanco(布兰 科)等人，临床精神医学杂志，73(2012)，pp.865-873)。因此，对有效治疗 抑郁症状和酒精依赖两者的药物疗法存在极大需要。
κ-阿片受体及其内源神经肽配体强啡肽A密集地定位于包含脑奖赏系统 和应激系统的边缘区和皮质区中，并且在调节这些区域的神经传递中发挥关 键作用。在临床前模型中，应激产生了促抑郁表型，其被认为与κ-阿片受体 的激活和后续下游信号传导事件相关。应激效应(应激)增加强啡肽(一种 κ-阿片受体内源配体)的释放(Knoll(克诺尔)和Carlezon(卡尔索恩)， BrainRes(脑研究)(2010)，1314:56-73)。通过强啡肽激活κ-阿片受体将降 低伏核中的多巴胺浓度，从而引起缺乏快感的抑郁症状。κ-阿片受体拮抗剂 给药将缓解这种效应。
与这种假设一致，κ受体激动剂在动物和人类体内产生致焦虑样效应和 促抑郁样效应(Pfeiffer(普菲弗尔)A、Brantl(布兰特)V、Herz(赫茨) A、Emrich(埃姆里奇)HM(1986)，Science(科学)233:774-776P和 Todtenkopf(托德登科普夫)MS、Marcus(马库斯)JF、Portoghese(波图格 黑塞)PS和Carlezon(卡尔索恩)WAJr(2004)，Psychopharmacology(精神 药理学)172:463-470，但是还参见M.T.Harden(哈登)、S.E.Smith(史密 斯)、J.A.Niehoff(尼霍夫)、C.R.McCurdy(麦柯迪)、G.T.Taylor(泰 勒)(2012)，BehaviouralPharmacology(行为药理学)，23(7)第710-715 页)，然而κ受体拮抗剂在预测心情和情感域中的疗效的动物模型中可靠地展 现出抗抑郁样效应(Mague(玛古埃)SD、Pliakas(普拉卡斯)AM、托德登 科普夫MS、Tomasiewicz(托马西艾维奇)HC、Zhang(张)Y、Stevens(史 蒂文斯)WCJr、Jones(琼斯)RM、波图格黑塞PS和卡尔索恩WAJr (2003)，JPharmacolExpTher(药理学和实验治疗学杂志)305:323-330；B.B. Land(兰德)、M.R.Bruchas(布鲁查斯)、S.Schattauer(沙陶尔)、W.J. Giardino(吉尔迪诺)、M.Aita(艾塔)、D.Messinger(梅辛杰)(2009)， PNAS(美国国家科学院院刊)106(45)第19168-19173页和Carr(凯尔) GV、Bangasser(班加瑟)DA、Bethea(贝萨)T、Young(杨)M、 Valentino(瓦伦蒂诺)RJ、Lucki(吕克)I(2010)，Neuropsycho- pharmacology(神经精神药理学)35:752-763)。
虽然一些阿片拮抗剂在酒精中毒动物模型中是有效的，但是它们在动物 或人类体内不产生可靠的抗抑郁样效应或抗焦虑样效应，可能是由于在μ与κ 受体之间的功能对抗。类似地，抗抑郁药在减少患有共患成瘾障碍的抑郁患 者的酒精消耗方面是微弱且不一致地有效的。因为κ拮抗剂在预测心境和成瘾 障碍中的疗效的动物模型中展示出疗效，所以它们具有治疗患有共患酒精依 赖的患者的潜力。
对用于在患有具有忧郁特征的抑郁障碍的患者中使用的新治疗存在需 要。此外，对用于在患有具有忧郁特征的抑郁障碍的、患有酒精依赖的患者 中使用的新治疗存在需要。具体而言，对与现有治疗相比可以产生例如像改 进的疗效和/或不同的副作用谱等优点的新治疗存在需要。
发明概述
本发明涉及具有κ-阿片受体活性的阿片拮抗剂，用于治疗具有忧郁特征 的抑郁障碍。
本发明进一步涉及用于在治疗具有忧郁特征的抑郁障碍中使用的具有κ- 阿片受体活性的阿片拮抗剂，其中所述使用包括以下步骤：
a)鉴定患有具有忧郁特征的抑郁障碍的患者，并且
b)向步骤a)中鉴定的该患者给予治疗有效量的具有κ-阿片受体活性的 所述阿片拮抗剂和任选地治疗有效量的沃替西汀。
本发明进一步涉及用于治疗具有忧郁特征的抑郁障碍的具有κ-阿片受体 活性的阿片拮抗剂和沃替西汀。
本发明进一步涉及包含具有κ-阿片受体活性的阿片拮抗剂和沃替西汀连 同药学上可接受的赋形剂的药物组合物。
附图简要说明
图1和图2说明了运载体和测试化合物对雄性威斯达(Wistar)大鼠的慢 性轻度应激的作用(对照大鼠和暴露于慢性轻度应激的大鼠)。
X轴：治疗周数；Y轴：蔗糖摄入(g)。值是平均值+/-SEM。
图1.
使用运载体和丙咪嗪的慢性治疗的效果(10mg/kg，IP，每日一次)。
○＝对照/运载体；◇＝对照/丙咪嗪；●＝应激的/运载体；◆＝应 激的/丙咪嗪。
*-p<0.05，**-p<0.01，***-p<0.001；相对于经运载体或经药物处 理的对照组。
#-p<0.05，##-p<0.01，###-p<0.001；相对于第0周的经药物处理的 应激动物。
图2.
使用运载体、沃替西汀(10mg/kg，IP，每日一次)、纳美芬(1 mg/kg，IP，每日一次)和联合给予两种药物的慢性治疗的效果。
○＝对照/运载体；△＝对照/沃替西汀；◇＝对照/纳美芬；
▽＝对照/沃替西汀+纳美芬；●＝应激的/运载体；▲＝应激的/ 沃替西汀；
◆＝应激的/纳美芬；＝应激的/沃替西汀+纳美芬。
**-p<0.01，***-p<0.001；相对于经运载体或经药物处理的对照组。
#-p<0.05，##-p<0.01，###-p<0.001；相对于第0周的经药物处理的 应激动物。
定义
贯穿本说明书，“具有κ-阿片受体活性的阿片受体拮抗剂”、“具有κ- 阿片受体活性的阿片拮抗剂”、“具有κ活性的阿片受体拮抗剂”和“具有κ 活性的阿片拮抗剂”可互换地使用。所有都旨在包括选自但不限于以下各项 的具有κ活性的阿片拮抗剂：纳美芬、纳曲酮、纳洛酮、去甲-BNI(去甲-双 纳托啡亚胺)、丁丙诺啡、纳曲苯(naltriben)、烯丙吗啡、左洛啡烷、 LY2456302((S)-3-氟4-(4-((2-(3,5-二甲基苯基)吡咯烷-1-基)甲基)苯氧基)苯甲 酰胺)、强啡肽、JDTic((3R)-7-羟基-N-{(1S)-1-{[(3R,4R)-4-(3-羟基苯基)- 3,4-二甲基-1-哌啶基]甲基}-2-甲基丙基}-1,2,3,4-四氢-3-异喹啉-甲酰胺)以及 其他具有κ活性的阿片拮抗剂。在一个实施例中，本发明的具有κ活性的阿片 拮抗剂选自纳美芬、纳曲酮、纳洛酮、去甲-BNI(去甲-双纳托啡亚胺)、丁 丙诺啡、烯丙吗啡以及左洛啡烷。特别提及的是纳美芬。
贯穿本说明书，术语“纳美芬”旨在包括该化合物的任何形式，例如游 离碱和药学上可接受的盐。游离碱和药学上可接受的盐包括无水形式和溶剂 化形式(如水合物)。无水形式包括无定形形式和结晶形式，并且溶剂化物 包括结晶形式。在一个具体实施例中，纳美芬处于盐酸盐的形式。在一个更 具体实施例中，纳美芬处于盐酸盐二水合物的形式。贯穿本说明书，当针对 纳美芬指定一个剂量时，所述剂量计算为游离碱，即当该纳美芬剂量是18mg 时，这对应于18mg的纳美芬游离碱。
贯穿本说明书，术语“沃替西汀”旨在包括该化合物的任何形式，例如 游离碱和药学上可接受的盐。特别提及的是HBr盐和(DL)-乳酸盐。贯穿本说 明书，当针对沃替西汀指定一个剂量时，所述剂量计算为游离碱，即当该沃 替西汀剂量是10mg时，这对应于10mg的沃替西汀游离碱。
在本背景下，药物载体和药用赋形剂包括惰性固体稀释剂或填料、无菌 水溶液以及不同有机溶剂。固体载体的实例包括乳糖、白土、蔗糖、环糊 精、滑石、明胶、琼脂、果胶、阿拉伯胶、硬脂酸镁、硬脂酸以及纤维素的 低级烷基醚。液体载体的实例包括但不限于，糖浆、花生油、橄榄油、磷 脂、脂肪酸、脂肪酸胺、聚氧化乙烯以及水。类似地，该载体可以包括单独 或与蜡混合的本领域中已知的任何持续释放物质，例如单硬脂酸甘油酯或二 硬脂酸甘油酯。
在本背景下，“药物组合物”是指一种剂型，例如口服剂型，如固体口 服剂型，典型地是片剂或胶囊剂。“本发明的药物组合物”是指由权利要求 书和说明书涵盖的所有药物组合物。
在本背景下，“单位剂型”是指药物组合物的配制单位，例如一片片剂 或一个胶囊剂。
在本背景下，当一种化合物(例如具有κ活性的阿片拮抗剂，如纳美 芬)与另一种化合物(例如沃替西汀)组合使用时，在一个实施例中这指示 所述两种化合物可以例如在包含两种化合物的药物组合物中同时给予。在另 一个实施例中，当一种化合物(例如具有κ活性的阿片拮抗剂，如纳美芬)与 另一种化合物(例如沃替西汀)组合使用时，这指示所述两种化合物在适合 的单独的药物组合物中分开给予。这些单独的组合物可以例如以固定间隔在 早上或晚上每天同时给予一次，或者它们可以独立地给予，例如一种化合物 以固定间隔在早上每天给予一次并且另一种化合物以固定间隔在晚上每天给 予一次。
在本背景下，当具有κ活性的阿片拮抗剂(例如纳美芬)被用作“独立 治疗”时，这指示具有κ活性的所述阿片拮抗剂在治疗具有忧郁特征的抑郁障 碍中不与沃替西汀组合使用，即具有κ活性的所述阿片拮抗剂用在未用沃替西 汀进行治疗的患者中。
如在此所述的化合物的“治疗有效量”意指足以在包括给予所述化合物 的治疗性介入中治愈、缓解或部分阻止给定疾病及其并发症的临床表现的 量。将足以实现以上的量定义为“治疗有效量”。“治疗有效量”将尤其取 决于疾病及其严重性，以及取决于有待治疗的患者的年龄、体重、身体状况 以及反应性而变化。在具有κ活性的阿片拮抗剂被用作独立治疗时和在具有κ 活性的阿片拮抗剂与沃替西汀组合使用时两者情况下，“治疗有效量”还将 取决于具有κ活性的阿片拮抗剂的选择而变化。具有κ活性的阿片拮抗剂的 “治疗有效量”可以进一步取决于具有κ活性的阿片拮抗剂是与沃替西汀组合 使用还是被用作独立治疗而变化。此外，如果具有κ活性的阿片拮抗剂或具有 κ活性的阿片拮抗剂和沃替西汀与一种或多种其他化合物组合，则“治疗有效 量”可以变化。
在本背景下，“治疗”和“进行治疗”是指管理并护理患者用于抗击病 症(例如疾病或障碍)的目的。该术语旨在包括对患者所患的给定病症的治 疗的完整范围，例如给予活性化合物以缓解症状或并发症、以延迟疾病、障 碍或病症的进展、以缓解或减轻症状及并发症、和/或以治愈或消除疾病、障 碍或病症以及以预防病症，其中将预防理解为管理并护理患者用于抗击疾 病、病症或障碍的目的并且包括给予活性化合物以预防症状或并发症的发 作。在本发明的一个方面，“治疗”和“进行治疗”是指预防性(防预性) 治疗。在另一个方面，“治疗”和“进行治疗”是指(治愈性)治疗。待治 疗的患者优选是哺乳动物，特别是人。
术语“具有忧郁特征的抑郁障碍”被描述于例如第5版的精神疾病诊断 与统计手册(精神疾病诊断与统计手册，第5版(DSM-V)，美国精神病学协 会，2013)中。术语“具有忧郁特征的抑郁障碍”在此的特征在于例如：
A.以下项之一：
1.对所有或几乎所有活动丧失愉悦感；
2.对通常可产生愉悦感的刺激缺乏反应性(即使当遇到好事时仍不感到 好受些)；
B.以下项中的三项或更多项：
1.深深的沮丧，绝望
2.在早晨常常更糟糕的抑郁
3.清晨觉醒
4.显著的精神运动性阻滞或激动
5.明显的食欲减退或体重减轻
6.过度的或不当的内疚
如果在发作的最严重阶段存在这些特征，则应用指示语“具有忧郁特 征”。
术语“兴趣缺乏”和“兴趣缺乏症状”可互换地使用并且被定义为不能 从通常发现令人愉快的活动(例如锻炼、爱好、音乐、性活动或社交)中体 验到愉悦感。术语“兴趣缺乏”和“兴趣缺乏症状”与“具有忧郁特征的抑 郁障碍”的以上定义中的标准A.1.密切相关并且贯穿本说明书与临床前实验的 描述相关地进行说明。
术语“具有忧郁特征的抑郁障碍的治疗”包括对抑郁障碍和与其相关的 忧郁特征两者的治疗。
术语“酒精依赖”对于本领域的普通技术人员而言是公知术语，被描述 于例如修订的第4版的精神疾病诊断与统计手册(DSM-IV-TR)(精神疾病诊 断与统计手册，第4版文本修订，美国精神病学出版公司(American PsychiatricPublishing)，2000)中。如在此使用，术语“酒精依赖”被定义为 在同一12个月期间中，存在与酒精有关的七个生活损害方面中的三个或更多 个。这些损害包括1)耐受性，2)戒断，3)经常以比预期更大的量或更长的 时间服用酒精，4)持续性的欲望或削减或控制酒精摄入的不成功的努力，5) 在获得酒精、摄入酒精或从其效应中恢复所需的活动中花费大量时间，6)由 于酒精消耗而放弃或减少重要的社会、工作或休闲活动，7)尽管认识到具有 可能由酒精消耗导致或恶化的持续性或反复性生理或心理问题，仍继续使用 酒精。
发明详细说明
本发明的诸位发明人已经鉴定出具有κ活性的阿片拮抗剂(纳美芬)在 慢性轻度应激(CMS)模型中是有效的，这表明具有κ活性的阿片拮抗剂可以 用于治疗具有忧郁特征的抑郁障碍。此外，诸位发明人另外鉴定出当将具有κ 活性的所述阿片拮抗剂(纳美芬)与沃替西汀在所述CMS模型中组合时，实 现了更快的起效(实例1)。
因此，本发明涉及用于在治疗具有忧郁特征的抑郁障碍中使用的具有κ- 阿片受体活性的阿片受体拮抗剂。
本发明进一步涉及用于与沃替西汀组合在治疗具有忧郁特征的抑郁障碍 中使用的具有κ-阿片受体活性的阿片拮抗剂。
本发明进一步涉及用于在治疗具有忧郁特征的抑郁障碍中使用的具有κ- 阿片受体活性的阿片拮抗剂，其中所述使用包括以下步骤：
a)鉴定患有具有忧郁特征的抑郁障碍的患者，并且
b)向步骤a)中鉴定的该患者给予治疗有效量的具有κ-阿片受体活性的 所述阿片拮抗剂和任选地治疗有效量的沃替西汀。
本发明进一步涉及包含具有κ-阿片受体活性的阿片拮抗剂和沃替西汀连 同药学上可接受的赋形剂的药物组合物。
在一个实施例中，具有κ活性的所述阿片拮抗剂选自纳美芬、纳洛酮、 纳曲酮、去甲-BNI、丁丙诺啡、烯丙吗啡和左洛啡烷，它们全部是本领域的 普通技术人员已知的化合物并且可通过直接购买和/或从本领域已知的制备方 法获得。
在一个优选实施例中，具有κ活性的所述阿片拮抗剂是纳美芬。
已经通过如概述于实例1中的在蔗糖偏好测试(慢性轻度应激)中测试 纳美芬和纳美芬与沃替西汀的组合评估了具有κ活性的阿片拮抗剂作为独立治 疗和与沃替西汀组合对具有忧郁特征的抑郁障碍的治疗的效果，特别是对兴 趣缺乏的效果。当单独给予时，纳美芬在CMS模型中是有效的，而沃替西汀 在CMS模型中是无效的。沃替西汀和纳美芬两者的注射与单独给予纳美芬相 比在该模型中给出更快的起效。
用于评估在具有忧郁特征的抑郁障碍的治疗中的效果的另外的非临床模 型是如概述于实例2-3中的对天然强化物做出响应的累进比率和/或啮齿动物颅 内自我刺激(ICSS)测试。
根据本发明，可以按任何适合的方式给予具有κ活性的阿片拮抗剂和任 选地沃替西汀或这两种化合物中任一者的药学上可接受的盐，例如口服地、 经粘膜地或非经肠地，并且具有κ活性的阿片拮抗剂和/或沃替西汀可以按任何 适合这样的给予的形式呈现。在一个实施例中，并且根据本发明的目的，具 有κ活性的阿片拮抗剂和任选地沃替西汀均以固体药物实体的形式(适合地作 为片剂或胶囊剂)或以用于注射的悬浮剂、溶液或分散剂的形式给予。
根据本发明的药物组合物可以用药学上可接受的载体或稀释剂以及任何 其他已知的佐剂和赋形剂根据常规技术配制，这些常规技术是例如以下披露 的技术：《雷明顿：药学科学与实践》(Remington:TheScienceandPractice ofPharmacy)，第21版，郝博(Hauber)编辑，利平科特·威廉斯·威尔金斯出 版公司(LippincottWilliams&Wilkins)，2006。片剂可以因此通过将活性成 分与普通载体(如辅助剂和/或稀释剂)混合，并且随后在压片机中压缩混合 物来制备。
适合的药物载体和赋形剂包括惰性固体稀释剂或填料、无菌水溶液以及 不同有机溶剂。固体载体的非限制性实例是玉米淀粉、乳糖、白土、蔗糖、 环糊精、滑石、明胶、琼脂、果胶、阿拉伯胶、硬脂酸镁、硬脂酸以及纤维 素的低级烷基醚。液体载体的非限制性实例是糖浆、花生油、橄榄油、磷 脂、脂肪酸、脂肪酸胺、聚氧化乙烯以及水。
还可以使用任何其他辅助剂或添加剂，如着色剂、芳香剂和防腐剂，其 条件是它们与活性成分兼容。本发明的药物组合物因此典型地包含有效量的 具有κ活性的阿片拮抗剂和/或沃替西汀以及一种或多种药学上可接受的载体。
通过组合本发明中使用的化合物与药学上可接受的载体而形成的药物组 合物接着以多种适于所披露的给予途径的剂型容易地给予。
在本发明中使用的活性药物成分(即，具有κ活性的阿片拮抗剂和任选 地沃替西汀)可以单剂量或多剂量作为纯化合物单独给予或者与药学上可接 受的载体或赋形剂组合给予。
药物组合物可以被具体配制以通过任何适合途径给予，例如经口、经直 肠、经鼻、经肺、局部(包括经颊和舌下)、经皮以及非经肠(包括皮下、 肌内、静脉内、腹膜内和皮内)途径，经口途径是优选的。将领会的是，优 选途径将取决于欲治疗的受试者的一般状况及年龄、欲治疗的病症的性质以 及所选活性成分。
用于经口给予的药物组合物包括固体剂型，例如胶囊、片剂、糖衣丸、 丸剂、锭剂、粉剂以及颗粒剂。适当时，可以用包衣制备它们。
用于经口给予的液体剂型包括溶液、乳液、悬浮液、糖浆、滴剂以及酏 剂。
用于非经肠给予的药物组合物包括无菌水性及非水性可注射溶液、分散 液、悬浮液或乳液以及欲在使用之前在无菌可注射溶液或分散液中复水的无 菌散剂。
其他适合的给予形式包括栓剂、喷雾剂、软膏剂、乳膏剂、凝胶剂、吸 入剂、皮肤贴片、植入物等。
对于非经肠给予，可以采用这些化合物在无菌水溶液、水性丙二醇、水 性维生素E或芝麻油或花生油中的溶液。必要时应该适当缓冲此类水溶液并且 首先用足够盐水或葡萄糖使液体稀释剂变得等张。水溶液特别适于静脉内、 肌内、皮下及腹膜内给药。所采用的无菌水性介质都可通过本领域的普通技 术人员已知的标准技术容易地获得。
适于经口给予的本发明的配制品能以不连续单位形式呈现，例如各自含 有预定量的活性成分并且可包括适合的赋形剂的胶囊剂或片剂。此外，经口 可用配制品可以呈散剂或颗粒剂、水性或非水性液体中的溶液或悬浮液，或 水包油或油包水液体乳液的形式。
若将固体载体用于经口给予，则该制剂可以处于片剂形式或以粉剂或丸 粒形式置于硬明胶胶囊中、或处于糖锭或锭剂形式。固体载体的量可变化， 但通常是从约25mg至约1g。
若使用一种液体载体，则该制剂可以呈糖浆、乳液、软明胶胶囊或无菌 可注射液体(例如水性或非水性液体悬浮液或溶液)形式。
可以通过混合活性成分与普通佐剂和/或稀释剂，随后在常规压片机中压 紧该混合物来制备片剂。佐剂或稀释剂的实例包括：玉米淀粉、马铃薯淀 粉、滑石、硬脂酸镁、明胶、乳糖、树胶以及类似物。可以使用通常用于此 类目的的任何其他佐剂或添加剂，例如着色剂、调味剂、防腐剂等，其条件 是它们与活性成分兼容。
纳美芬的一种适合的口服配制品描述于WO2012/059103中。沃替西汀的 一种适合的口服配制品描述于WO2011/136376中。
当设想具有κ活性的阿片拮抗剂和沃替西汀的同时给予时，包含具有κ活 性的阿片拮抗剂和沃替西汀两者的组合物可以是特别方便的。可替代地，具 有κ活性的阿片拮抗剂和沃替西汀可以按适合的组合物的形式分开给予。这些 组合物可以如上文所述的制备。在本发明的一个实施例中，同时给予具有κ活 性的阿片拮抗剂和沃替西汀的分开的单位形式，例如两种化合物以固定间隔 在早上或晚上每天给予一次。在另一个实施例中，独立地给予具有κ活性的阿 片拮抗剂和沃替西汀的分开的单位形式，例如沃替西汀以固定间隔在早上每 天给予一次并且具有κ活性的阿片拮抗剂以固定间隔在晚上每天给予一次，或 反之亦然。
本发明还包括试剂盒，其包含含有具有κ活性的阿片拮抗剂的不连续单 位剂型和含有沃替西汀的不连续单位剂型，所有单位剂型都被包含在相同的 容器或包装(例如泡罩包装)中。
根据本发明的药物组合物和试剂盒优选地包含治疗有效量的具有κ活性 的阿片拮抗剂和/或沃替西汀。纳美芬的每日剂量优选在1mg与30mg之间， 更优选在5mg与20mg之间，如18mg。沃替西汀的每日剂量优选在1mg与30 mg之间，更优选在5mg与20mg之间，如5mg、10mg、15mg或20mg。
在此所引用的所有文献(包括出版物、专利申请、以及专利)均通过引 用以其全部内容由此结合，并且引用的程度如同每个文献被个别地并且明确 地指示通过引用结合并且以其全部内容在此阐述(至法律允许的最大程 度)，而不考虑在此其他地方做出的特定文件的任何单独提供的结合。
除非在此另外指示或与上下文明显矛盾，否则在描述本发明的上下文 中，术语“一个/种”和“该”以及类似指称对象的使用应解释为包括单数和 复数二者。例如，除非另外指示，否则短语“该化合物”应理解为是指本发 明的多种“化合物”或具体描述的方面。
除非另外陈述或与上下文明显矛盾，否则在此使用涉及一种或多种要素 的术语如“包括(comprising)”、“具有(having)”、“包括 (including)”或“包含(containing)”的本发明的任何一方面或多方面的 描述，旨在提供对“由那一种或多种特定要素组成”、“基本上由那一种或 多种特定要素组成”或“基本上包含那一种或多种特定要素”的本发明的类 似一方面或多方面的支持(例如，除非另外陈述或与上下文明显矛盾，否则 在此所述的包含特定要素的组合物应理解为也描述由那个要素组成的组合 物)。
应理解的是，在此提到的本发明的多个方面、实施例、实施方式以及特 征可以单独地或以任何组合要求保护。
根据本发明的实施例
在下文披露本发明的实施例。第一实施例表示为E1，第二实施例表示为 E2，等等。
E1.用于在治疗具有忧郁特征的抑郁障碍中使用的具有κ活性的阿片拮 抗剂和沃替西汀。
E2.用于在治疗具有忧郁特征的抑郁障碍中使用的具有κ活性的阿片拮 抗剂和沃替西汀，其中所述使用包括以下步骤：
a)鉴定患有具有忧郁特征的抑郁障碍的患者，并且
b)向步骤a)中鉴定的该患者给予治疗有效量的具有κ活性的所述阿片 拮抗剂、和沃替西汀。
E3.根据实施例1-2中任一项所述的具有κ活性的阿片拮抗剂和沃替西 汀，其中具有κ活性的所述阿片拮抗剂选自纳美芬、纳洛酮、纳曲酮、去甲- BNI、丁丙诺啡、烯丙吗啡和左洛啡烷。
E4.根据实施例3所述的具有κ活性的阿片拮抗剂和沃替西汀，其中具有 κ活性的所述阿片拮抗剂是纳美芬。
E5.根据实施例4所述的纳美芬和沃替西汀，其中纳美芬的剂量在1mg 与30mg之间。
E6.根据实施例5所述的纳美芬和沃替西汀，其中纳美芬的剂量在5mg 与20mg之间。
E7.根据实施例6所述的纳美芬和沃替西汀，其中纳美芬的剂量是18 mg。
E8.根据实施例1-7中任一项所述的具有κ活性的阿片拮抗剂和沃替西 汀，其中沃替西汀的剂量在1mg与30mg之间。
E9.根据实施例8所述的具有κ活性的阿片拮抗剂和沃替西汀，其中沃替 西汀的剂量在5mg与20mg之间。
E10.根据实施例9所述的具有κ活性的阿片拮抗剂和沃替西汀，其中沃替 西汀的剂量是5mg、10mg、15mg或20mg。
E11.根据实施例1-10中任一项所述的具有κ活性的阿片拮抗剂和沃替西 汀，其中同时给予具有κ活性的所述阿片拮抗剂和沃替西汀。
E12.根据实施例1-10中任一项所述的具有κ活性的阿片拮抗剂和沃替西 汀，其中独立地给予具有κ活性的所述阿片拮抗剂和沃替西汀。
E13.根据实施例1-12中任一项所述的具有κ活性的阿片拮抗剂和沃替西 汀，其中具有κ活性的所述阿片拮抗剂和沃替西汀被包含在分开的单位剂型 中。
E14.根据实施例1-11中任一项所述的具有κ活性的阿片拮抗剂和沃替西 汀，其中具有κ活性的所述阿片拮抗剂和沃替西汀被包含在同一单位剂型中。
E15.根据实施例1-14中任一项所述的具有κ活性的阿片拮抗剂和沃替西 汀，其中所述治疗包括具有忧郁特征的抑郁障碍的治疗和酒精依赖的治疗两 者。
E16.用于在治疗具有忧郁特征的抑郁障碍中使用的具有κ活性的阿片拮 抗剂。
E17.用于在治疗具有忧郁特征的抑郁障碍中使用的具有κ活性的阿片拮 抗剂，其中所述使用包括以下步骤：
a)鉴定患有具有忧郁特征的抑郁障碍的患者，并且
b)向步骤a)中鉴定的该患者给予治疗有效量的具有κ活性的所述阿片 拮抗剂。
E18.根据实施例16-17中任一项所述的具有κ活性的阿片拮抗剂，其中具 有κ活性的所述阿片拮抗剂在具有忧郁特征的抑郁障碍的治疗中被用作独立治 疗。
E19.根据实施例16所述的具有κ活性的阿片拮抗剂，其中具有κ活性的所 述阿片拮抗剂在具有忧郁特征的抑郁障碍的治疗中与沃替西汀组合使用。
E20.根据实施例17所述的具有κ活性的阿片拮抗剂，其中具有κ活性的所 述阿片拮抗剂在具有忧郁特征的抑郁障碍的治疗中与沃替西汀组合使用；其 中步骤b)进一步包括向步骤a)中鉴定的该患者给予治疗有效量的沃替西汀。
E21.根据实施例16-20中任一项所述的具有κ活性的阿片拮抗剂，其中具 有κ活性的所述阿片拮抗剂选自纳美芬、纳洛酮、纳曲酮、去甲-BNI、丁丙诺 啡、烯丙吗啡和左洛啡烷。
E22.根据实施例21所述的具有κ活性的阿片拮抗剂，其中具有κ活性的所 述阿片拮抗剂是纳美芬。
E23.根据实施例22所述的纳美芬，其中纳美芬的剂量在1mg与30mg之 间。
E24.根据实施例23所述的纳美芬，其中纳美芬的剂量在5mg与20mg之 间。
E25.根据实施例24所述的纳美芬，其中纳美芬的剂量是18mg。
E26.根据实施例19-25中任一项所述的与沃替西汀组合使用的具有κ活性 的阿片拮抗剂，其中沃替西汀的剂量在1mg与30mg之间。
E27.根据实施例26所述的与沃替西汀组合使用的具有κ活性的阿片拮抗 剂，其中沃替西汀的剂量在5mg与20mg之间。
E28.根据实施例27所述的与沃替西汀组合使用的具有κ活性的阿片拮抗 剂，其中沃替西汀的剂量是5mg、10mg、15mg或20mg。
E29.根据实施例19-28中任一项所述的与沃替西汀组合使用的具有κ活性 的阿片拮抗剂，其中同时给予具有κ活性的所述阿片拮抗剂和沃替西汀。
E30.根据实施例19-28中任一项所述的与沃替西汀组合使用的具有κ活性 的阿片拮抗剂，其中独立地给予具有κ活性的所述阿片拮抗剂和沃替西汀。
E31.根据实施例19-30中任一项所述的与沃替西汀组合使用的具有κ活性 的阿片拮抗剂，其中具有κ活性的所述阿片拮抗剂和沃替西汀被包含在分开的 单位剂型中。
E32.根据实施例19-29中任一项所述的与沃替西汀组合使用的具有κ活性 的阿片拮抗剂，其中具有κ活性的所述阿片拮抗剂和沃替西汀被包含在同一单 位剂型中。
E33.根据实施例16-32中任一项所述的具有κ活性的阿片拮抗剂，其中所 述治疗包括具有忧郁特征的抑郁障碍的治疗和酒精依赖的治疗两者。
E34.用于治疗具有忧郁特征的抑郁障碍的方法，该方法包括向有需要的 患者给予治疗有效量的具有κ活性的阿片拮抗剂。
E35.用于治疗具有忧郁特征的抑郁障碍的方法，该方法包括以下步骤；
a)鉴定患有具有忧郁特征的抑郁障碍的患者，并且
b)向步骤a)中鉴定的该患者给予治疗有效量的具有κ活性的阿片拮抗 剂。
E36.根据实施例34-35中任一项所述的方法，其中具有κ活性的所述阿片 拮抗剂在具有忧郁特征的抑郁障碍的治疗中被用作独立治疗。
E37.根据实施例34所述的方法，其中所述方法进一步包括给予治疗有效 量的沃替西汀。
E38.根据实施例35所述的方法，其中步骤b)进一步包括向步骤a)中鉴 定的该患者给予治疗有效量的沃替西汀。
E39.根据实施例34-38中任一项所述的方法，其中具有κ活性的所述阿片 拮抗剂选自纳美芬、纳洛酮、纳曲酮、去甲-BNI、丁丙诺啡、烯丙吗啡和左 洛啡烷。
E40.根据实施例39所述的方法，其中具有κ活性的所述阿片拮抗剂是纳 美芬。
E41.根据实施例40所述的方法，其中纳美芬的所述治疗有效量在1mg与 30mg之间。
E42.根据实施例41所述的方法，其中纳美芬的所述治疗有效量在5mg与 20mg之间。
E43.根据实施例42所述的方法，其中纳美芬的所述治疗有效量是18 mg。
E44.根据实施例37-43中任一项所述的方法，其中沃替西汀的所述治疗 有效量在1mg与30mg之间。
E45.根据实施例44所述的方法，其中沃替西汀的所述治疗有效量在5mg 与20mg之间。
E46.根据实施例45所述的方法，其中沃替西汀的所述治疗有效量是5 mg、10mg、15mg或20mg。
E47.根据实施例37-46中任一项所述的方法，其中同时给予具有κ活性的 所述阿片拮抗剂和沃替西汀。
E48.根据实施例37-46中任一项所述的方法，其中独立地给予具有κ活性 的所述阿片拮抗剂和沃替西汀。
E49.根据实施例37-48中任一项所述的方法，其中具有κ活性的所述阿片 拮抗剂和沃替西汀被包含在分开的单位剂型中。
E50.根据实施例37-47中任一项所述的方法，其中具有κ活性的所述阿片 拮抗剂和沃替西汀被包含在同一单位剂型中。
E51.根据实施例34-50中任一项所述的方法，其中所述治疗包括具有忧 郁特征的抑郁障碍的治疗和酒精依赖的治疗两者。
E52.具有κ活性的阿片拮抗剂在生产用于治疗具有忧郁特征的抑郁障碍 的药物中的用途。
E53.具有κ活性的阿片拮抗剂在生产用于治疗患者的具有忧郁特征的抑 郁障碍的药物中的用途，其中所述患者已经被诊断患有具有忧郁特征的抑郁 障碍。
E54.根据实施例52-53中任一项所述的用途，其中所述药物进一步包括 沃替西汀。
E55.根据实施例52-54中任一项所述的用途，其中具有κ活性的所述阿片 拮抗剂选自纳美芬、纳洛酮、纳曲酮、去甲-BNI、丁丙诺啡、烯丙吗啡和左 洛啡烷。
E56.根据实施例55所述的用途，其中具有κ活性的所述阿片拮抗剂是纳 美芬。
E57.根据实施例56所述的用途，其中所述药物包括1mg-30mg的纳美 芬。
E58.根据实施例57所述的用途，其中所述药物包括5mg-20mg的纳美 芬。
E59.根据实施例58所述的用途，其中所述药物包括18mg的纳美芬。
E60.根据实施例54-59中任一项所述的用途，其中所述药物包括1mg-30 mg的沃替西汀。
E61.根据实施例60所述的用途，其中所述药物包括5mg-20mg的沃替西 汀。
E62.根据实施例61所述的用途，其中所述药物包括5mg、10mg、15mg 或20mg的沃替西汀。
E63.根据实施例52-62中任一项所述的用途，其中所述治疗包括具有忧 郁特征的抑郁障碍的治疗和酒精依赖的治疗两者。
E64.包含具有κ活性的阿片拮抗剂、和沃替西汀连同药学上可接受的赋 形剂的药物组合物。
E65.根据实施例64所述的药物组合物，其中具有κ活性的所述阿片拮抗 剂选自纳美芬、纳洛酮、纳曲酮、去甲-BNI、丁丙诺啡、烯丙吗啡和左洛啡 烷。
E66.根据实施例65所述的药物组合物，其中具有κ活性的所述阿片拮抗 剂是纳美芬。
E67.根据实施例66所述的药物组合物，包含1mg-30mg的纳美芬。
E68.根据实施例67所述的药物组合物，包含5mg-20mg的纳美芬。
E69.根据实施例68所述的药物组合物，包含18mg的纳美芬。
E70.根据实施例64-69中任一项所述的药物组合物，包含1mg-30mg沃 替西汀。
E71.根据实施例70所述的药物组合物，包含5mg-20mg沃替西汀。
E72.根据实施例71所述的药物组合物，包含5mg、10mg、15mg或20 mg沃替西汀。
E73.根据实施例64-72中任一项所述的药物组合物，包含5mg-20mg的 纳美芬和5mg-20mg的沃替西汀。
E74.包含具有κ活性的阿片拮抗剂连同沃替西汀的试剂盒。
E75.根据实施例74所述的试剂盒，其中具有κ活性的所述阿片拮抗剂选 自纳美芬、纳洛酮、纳曲酮、去甲-BNI、丁丙诺啡、烯丙吗啡和左洛啡烷。
E76.根据实施例75所述的试剂盒，其中具有κ活性的所述阿片拮抗剂是 纳美芬。
E77.根据实施例74-76中任一项所述的试剂盒，其被适配用于同时给予 具有κ活性的所述阿片拮抗剂和沃替西汀。
E78.根据实施例74-76中任一项所述的试剂盒，其被适配用于独立地给 予具有κ活性的所述阿片拮抗剂和所述沃替西汀。
实例
如概述于实例1中的在慢性轻度应激模型(CMS)中评估了具有κ活性的 阿片拮抗剂(纳美芬)和沃替西汀对兴趣缺乏的治疗效果。
实例1：蔗糖偏好测试(慢性轻度应激模型(CMS))。
啮齿动物固有地对甜的食物或液体有兴趣。暴露于应激条件降低了对甜 的食物或溶液的兴趣，从而指示对奖赏的敏感性降低。这可以例如在蔗糖偏 好测试中进行评估，在该测试中应激诱导的蔗糖溶液摄入减少被用作兴趣缺 乏(对奖赏的敏感性降低)的量度。大鼠中的这种应激诱导的蔗糖摄入减少 是良好建立的兴趣缺乏动物模型(Nielsen(尼耳森)、Arnt(阿恩特)和 Sánchez(桑切斯).Intracranialself-stimulationandsucroseintakedifferas hedonicmeasuresfollowingchronicmildstress:interstrainandinterindividual differences(在慢性轻度应激之后颅内自我刺激和蔗糖摄入随享乐措施而变 化：品系间和个体间差异).Behav.Brain.Res.(行为脑研究)(2000)，107(1- 2):21-33)。
材料与方法
动物。
在实验开始之前一个月将雄性威斯达大鼠(查尔斯河实验室(Charles River)，德国)带到实验室。除了如下所述的，使这些动物单独居住，食物 和水可自由获取，并且维持在12-h光暗循环(在08.00开灯)和恒定温度 (22℃±2℃)和湿度(50％±5％)条件下。在此项研究中使用的所有程序 都符合86/609/EEC指令(86/609/EECDirective)的规则和原则，并且得到了 位于波兰克拉科夫的波兰科学院药理研究所(InstituteofPharmacology,Polish AcademyofSciences)的当地生物伦理委员会(LocalBioethicalCommittee) 的批准。
应激程序。
在对实验室和居住条件适应3周的时间段之后，训练这些动物消费1％的 蔗糖溶液；训练由九个1h基线测试组成，在这些测试中在14h禁食和禁水之 后在居住笼中呈递蔗糖。通过在测试结束时称量包含蔗糖溶液的预称重的瓶 子来测量蔗糖摄入。随后，贯穿整个实验，以按周计的间隔在类似条件下监 测蔗糖消费。
在它们在最终基线测试中的蔗糖摄入的基础上，将这些动物分成两个匹 配组。一组动物经受慢性轻度应激程序，持续连续8周的时间段。每周的应激 方案由以下项组成：两个时段的禁食或禁水，两个时段的45度笼倾斜，两个 时段的间歇照明(每2h开关灯)，两个时段的脏笼(浇250ml水到锯屑垫 中)，一个时段的成对居住，两个时段的低强度频闪照明(150闪/min)以及 三个时段的无应激。所有应激原不分昼夜地持续10h-14h，并且单独和持续 应用。使对照动物居住在分开的房间中并且没有与应激动物接触。在每个蔗 糖测试之前它们被禁食和禁水14h，但是在其他方面居住笼中的食物和水可自 由获取。
药物给予。
在它们在2周初始应激之后的蔗糖摄入的基础上，将应激组和对照组两 组各自进一步分为匹配亚组(n＝8)，并且持续随后的五周，它们每天接受 IP给予运载体(0.9％盐水，1ml/kg)、沃替西汀(10mg/kg)、纳美芬(1 mg/kg)、沃替西汀(10mg/kg)和纳美芬(1mg/kg)的联合注射或丙咪嗪 HCl(10mg/kg)(作为参考处理)。所有注射的体积都是1ml/kg。在大约 10.00给予药物并且在最后的药物注射之后24h进行每周的蔗糖测试。五周之 后，终止所有处理并且在一周戒断之后进行一个另外的蔗糖测试。贯穿整个 处理和戒断时期持续进行应激。
统计学。
通过具有三个受试者间因素(应激/对照、药物处理和连续蔗糖测试)的 多方差分析对此项研究中获得的所有结果进行分析(Windows版本6.0的 Statistica软件)。费舍尔(Fisher)的LSD检验被用于平均值的事后比较。
结果
慢性轻度应激导致1％蔗糖溶液消费方面的逐渐减少。在最终的基线测试 中，所有动物喝了大约13g的蔗糖溶液。最初的两周应激之后，在对照中摄入 保持在类似水平但是在应激动物中降至大约7g，从而产生了显著的组效应 (F(1,76)＝113.835；p<0.001)。对照和经运载体处理的应激动物之间的这 种差异在实验的剩余部分以类似水平持续(参见图1和2)。
CMS中的丙咪嗪(图1)
丙咪嗪被用作阳性对照。用运载体和丙咪嗪(10mg/kg，IP，每天一 次)进行慢性处理在对照(空心符号)和暴露于慢性轻度应激的动物(实心 符号)中对1％蔗糖溶液消费的作用。在2周初始应激之后开始处理。值是平 均值+/-SEM。
与运载体给予相比，丙咪嗪在对照动物中对蔗糖摄入没有显著作用 [F(1,84)＝0.219；NS]并且在应激动物中逐渐增加蔗糖消费，从而产生了显著 的处理效应[F(1,84)＝51.676；p<0.001]和处理与周数相互作用[F(5,84)＝ 4.286；p<0.01]。
与0周的得分相比，在处理三周后给予丙咪嗪的应激动物中的蔗糖摄入 增加达到统计显著性(p＝0.013)并且这种效应在接下来的几周以及在从丙 咪嗪处理戒断一周之后得到增强。
*-p<0.05，**-p<0.01，***-p<0.001；相对于经运载体或经药物处 理的对照组。
#-p<0.05，##-p<0.01，###-p<0.001；相对于第0周的经药物处理的应 激动物。
CMS中的沃替西汀和纳美芬(图2)
用运载体、沃替西汀(10mg/kg，IP)、纳美芬(1mg/kg，IP)和两种 药物的联合注射进行慢性处理在对照(空心符号)和暴露于慢性轻度应激的 动物(实心符号)中对1％蔗糖溶液消费的作用。在2周初始应激之后开始处 理。值是平均值+/-SEM。
与运载体给予相比，沃替西汀在对照[F(1,84)＝0.069；NS]或应激 [F(1,84)＝2.979；NS]动物中对蔗糖摄入没有显著作用。
纳美芬在对照动物中对蔗糖摄入没有作用[处理效应：F(1,84)＝1.169； NS]并且在应激动物中逐渐增加蔗糖消费，从而产生了显著的处理效应 [F(1,84)＝19.986；p<0.001]，但是没有产生处理与周数相互作用[F(5,84)＝ 1.760；NS]。这可能由以下事实引起，即接受纳美芬的两个应激动物并不对 该药物做出响应，从而增加了SEM。
沃替西汀和纳美芬的联合给予并未显著增加对照动物中的摄入[处理效 应：F(1,84)＝2.453；NS]并且在应激动物中导致了高度显著的处理效应 [F(1,84)＝78.050；p<0.001]和处理与周数相互作用[F(5,84)＝4.886；p< 0.001]。
与0周的得分相比，在处理四周后给予纳美芬的应激动物中的蔗糖摄入 增加达到统计显著性(p＝0.043)并且这种效应在接下来的一周得到维持。 由与沃替西汀一起给予的纳美芬引起的摄入增加在第一周的处理之后已经是 显而易见的，在三周之后达到显著性(p<0.001)并且在此后得到维持。在 处理停止之后一周在所有组中摄入维持在类似水平。
**-p<0.01，***-p<0.001；相对于经运载体或经药物处理的对照组。
#-p<0.05，##-p<0.01，###-p<0.001；相对于第0周的经药物处理的应 激动物。
在应激程序启动之前(基线)，对照和有待被应激的动物具有类似的体 重(分别是326g和321g)并且在初始两周应激(0周)之后这种模式没有改 变(分别是347g与341g)。与经运载体处理的组相比，丙咪嗪和沃替西汀降 低对照[IMI(丙咪嗪)：F(1,14)＝9.040；p<0.05，沃替西汀：F(1,14)＝7.473； p<0.05]和应激[IMI：F(1,14)＝4.049；NS，沃替西汀：F(1,14)＝3.310；NS] 动物的体重。单独的纳美芬并不影响体重[Ctr(对照)：F(1,14)＝0.226；NS， Str(应激)：F(1,14)＝0.001；NS]。与纳美芬一起给予的沃替西汀降低对照 [F(1,14)＝7.862；p<0.05]和应激[F(1,14)＝1.107；NS]动物的体重。
表1：五周处理之后的体重(g)(平均值±SEM)
组 对照 应激的 运载体 376±4 356±12 丙咪嗪 350±7 326±7 沃替西汀 348±9 328±9 纳美芬 371±9 355±11 沃替西汀+纳美芬 348±8 339±10
结论
此项研究的结果与我们先前的数据一致，这些数据显示CMS程序导致1％ 蔗糖溶液的消费显著降低，并且这种不足可以通过用丙咪嗪处理五周得到完 全逆转。丙咪嗪的起效与在我们用该药物进行的其他CMS研究中观察到的起 效是可比较的。
纳美芬在CMS模型中是有效的；该化合物增加应激动物中的蔗糖饮用但 是不影响对照动物的行为。纳美芬的起效与丙咪嗪的起效是可比较的。
当单独给予时沃替西汀在CMS模型中是无效的，但是当与纳美芬一起注 射时，该化合物在第一周的给予之后已经增加了应激动物中的蔗糖饮用。
在接受沃替西汀和纳美芬的对照动物中观察到的蔗糖消费增强的时程与 这些药物在应激动物中的作用并不平行。这表明口渴动机的可能变化并不负 责由这些药物引起的应激诱导的兴趣缺乏的逆转。
实例2和3：
用于表征具有κ活性的阿片拮抗剂和沃替西汀对兴趣缺乏的治疗效果的 其他非临床模型是例如如概述于实例2-3中的对天然强化物做出响应的累进比 率和/或啮齿动物颅内自我刺激(ICSS)测试。在这些模型的每者中，可以给 予溶解在适当量的适当运载体中的具有κ活性的阿片拮抗剂并且例如通过口 服、皮下或腹膜内给药向动物给予适当的剂量。纳美芬可以例如按以下形式 给予，溶解在适当量的适当运载体(例如盐水或水)中的盐酸纳美芬，并且 例如通过口服、皮下或腹膜内给药向动物给予适当的剂量。沃替西汀可以例 如按以下形式给予，溶解在适当量的适当运载体(例如盐水、水或10％2-羟 基丙基-β-环糊精)中的氢溴酸沃替西汀、乳酸沃替西汀或其他盐，并且例如 通过口服、皮下或腹膜内给药向动物给予适当的剂量。另外，这些化合物可 以与动物饲料一起在专用配制品中给予。
实例2：对天然强化物做出响应的累进比率。
累进比率强化程序为消费奖赏的动机提供了量度(Hodos(霍多什) W，Progressiveratioasameasureofrewardstrength(作为奖赏强度的量度的累 进比率)，Science(科学)(1961)；134(3483):943-4；Markou(马尔库)等 人Animalmodelsofcraving(动物渴求模型).Psychopharmacology(精神药 理学)(1993)112:163-182)。这个程序评估动物乐意发出声音以获得奖赏 (例如蔗糖、食物或药物)的努力量。动物在累进比率程序中发出声音的努 力量的减少提供了无动机(即缺乏动机)的量度(除激励之外)。使用这种 方法来评估兴趣缺乏症状，因为经受应激原作用的动物或无助的动物并不会 为了奖赏而努力。最初在为期10天的固定比率方案1中训练动物。在固定比率 训练完成之后，将动物放置在累进比率程序中以获得强化，其中获得单一强 化所必需的响应需求根据以下累进而增加：1、2、4、8、16、32、64、128、 192、256、384、512、768、1024、1280，以接受奖赏。为了每次奖赏的压杆 数持续增加直到动物在允许的时间60min内未能获得下一奖赏为止。最终完 成的比率被定义为断点。断点的下降可能反映获得奖赏的动机降低。
动机减少是忧郁型抑郁的重要症状。因此，在基线收集测试之后，使这 些动物经受应激(例如慢性轻度应激、习得性无助)或药理学处理形式的实 验操纵。处理对断点的影响将是这些化合物的药理作用的量度。
实例3：啮齿动物颅内自我刺激(ICSS)。
ICSS是操作性行为范例，在该范例中动物学习将简短的电脉冲递送到它 们自己的脑的特定部分中，这些部分被假设为是介导天然和ICSS奖赏两者的 奖赏通路的一部分(Carlezon(卡尔索恩)和Chartoff(查特夫).Intracranial self-stimulation(ICSS)inrodentstostudytheneurobiologyofmotivation(用于研 究动机神经生物学的啮齿动物颅内自我刺激(ICSS)).NatProtoc.(自然方 案)(2007)；2(11):2987-95)。电刺激通常由一列100-500ms的重复脉冲的正 弦波或矩形波组成，持续时间通常是0.1ms。ICSS阈值的降低指示刺激的奖赏 值的增加，因为对于受试者察觉刺激是有奖赏而言需要更小的电刺激。相 反，阈值的升高指示自我刺激的奖赏值的降低，因为在受试者察觉刺激是有 奖赏之前需要更高的频率或电流强度。ICSS程序具有若干将它与用于研究动 机、奖赏或强化的其他程序区分开来的优势和特点。
在基线测量之后，使这些动物经受应激或药理学处理形式的实验操纵 (Nielsen(尼耳森)、Arnt(阿恩特)和Sánchez(桑切斯).Intracranialself- stimulationandsucroseintakedifferashedonicmeasuresfollowingchronicmild stress:interstrainandinterindividualdifferences(在慢性轻度应激之后颅内自我 刺激和蔗糖摄入随享乐措施而变化：品系间和个体间差异).Behav.Brain. Res.(行为脑研究)(2000)，107(1-2):21-33)。