DDIT4基因在结直肠癌组织中的突变及其临床意义.pdfVIP
医药2011年第 1鲞筮 ! DDIT4基 因在结直肠癌组织 中的突变 及其临床意义 唐 慧，李 丽 ，王金丽 。郭 强 ，严新民 云南省第一人民医院，昆明650032 摘要：目的 探讨 DDIT4基 因突变在的临床意义。方法 应用 PCR一直接测序方法检测 23份结直肠癌 CRC 、22份结直肠腺瘤 CRA 和 18份正常结直肠粘膜组织中DNA损伤诱导转录子4 DDIT4 基因突变情况。 结果 CRC标本中共发现两类杂合性突变，均位于DDIT4基因的第 2外显子。其中1例为 15密码子TcT—ACT， 即丝氨酸变为苏氨酸；3例为68密码子GAA—A从 ，即谷氨酸变为赖氨酸。22份 CRA和l8分正常黏膜中均未检 测到这两类突变。DDIT4基因在CRC中的基因突变率显著高于CRA和正常组织 ，P 0．05。结论 DDIT4基因突 变在诱导CRC细胞凋亡过程中发挥一定作用。 关键词：结直肠癌；结直肠腺瘤；DNA损伤诱导转录子4；基因突变 中圈分类号：11735．3 文献标志码：B 文章编号：1002-266X 2011 07-0052-02 研究证实，实体肿瘤广泛存在着缺氧微环 织基因组DNA提取试剂盒 DP1902，百泰克，北京 境 。』，HIF一1是介导细胞适应缺氧微环境的关键转 抽提63份样品的基因组 DNA。用紫外分光光度计 录调控因子，可促进肿瘤侵袭和转移。DNA损伤诱 测量基因组DNA的纯度和浓度，一8O℃保存备用。
导转录子4 DDIT4 ，最初作为HIF1的下游靶基因 1．2．2 PCR扩增和DDIT4基因测序 ①引物设
被发现，缺氧可诱导其表达急剧升高 J。近期我 计 ：根据 DDIT4基因DNA序列 NC_000010．10 设
们采用PCR直接测序法检测了DDIT4基因在结直 计并合成引物，引物涵盖DDIT4基因含 232个氨基
肠癌 CgC 组织中的突变情况，探讨 DDIT4基因突 酸的蛋 白质编码区。PCR扩增片段大小为 1239
变在 CRC发生发展过程中的可能作用及机制。 bp。~PCn反应组分及条件：50Ixl反应体系中含
1 材料与方法 基因组DNA25ng，10×PCR缓冲液5 l，2．5mM
1．1 材料 连续收集2007年6月一2009年6月我 MgC12，上下游引物各200nM，4×dNTPs0．4pmol
院63份结直肠组织标本。其中结直肠腺瘤 CRA 和0．75U的rTaq聚合酶 大连宝生物 。PCR反应
22份 CRA组 ，患者男 14例、女8例，年龄 52～72 条件 ：95℃预变性 5min，95℃、30s，60℃、30s，72 平均62 岁：结直肠癌 CRC 23份 CRC组 ，患者 ℃、1．5min，35个循环后，于 72cI 延伸 7min。⑧
男 l4例、女9例，年龄51～73 平均 63 岁；正常结 PCR产物纯化回收和基 因测序 PCR产物经 1．5％琼
直肠黏膜组织 取 自癌旁≥8cm的正常组织 l8份 脂电泳检测后，经离心柱型多功能DNA纯化试剂盒 对照组 ，患者男 11例、女7例，年龄5O一73 平均 百泰克，北京 纯化回收。采用BigDye3．1 ABI，美
59岁 岁。研究对象均无遗传性结直肠肿瘤病史， 国应用生物系统公司 试剂盒，并经ABI3130基因
采集样本时均未接受放、化疗，所有组织样本均经病 分析仪对 DDIT4基因片段进行双向测序。测序引
理检查证实。组织样本离体后于30min内置于液 物同PCR扩增引物。将测序结果与Genebank的标
氮中，随后保存于 一80。C。本研究获云南省第一人 准序列 NM_019058．2 进行 比对。计算各组基因
民医院伦理委员会批准 ，样本采集均获得患者的知 突变率。 ^
情同意。 1．3 统计学方法 采用 SPSS11．0统计软件。
1．2 DDIT4基因突变检测 DDIT4基因在不同组间基因突变率的比较采用x
1．2．1 基 因组 DNA提取 应用离心柱型细胞／组 检验，P≤0．05为差异有统计学意义。 2 结果
基金项 目：云南省社会发展项 目资1~ 2008cD203 。 2．1 DDIT4基因测序结果 CRC组共发现两类杂
’通讯作者 合性点突变，均位于第2外显子。其中1例突变为 52 山东医药2011年第5l卷第 7期
15密码子 TCT—ACT，即丝氨酸 Ser 变为苏氨酸 细胞，转染5d后胞核固缩，细胞呈现凋亡特征。由 Thr ；3例突变为68密码子 GAA—AAA，即谷氨酸 此可见 ，对不同分化状态 的细胞 ，DDIT4基 因发挥着 Glu 变为赖氨酸 Lys ，CRC组 DDIT4基因突变率 完全相反的作用：在未分化的细