胰岛素基因疗法

　　id no:7和9?15，更优选地，所述基因构建体包含microrna?122a的靶序列(seq id no:7)和microrna?1的靶序列(seq id no:8)。12.在另一个优选的实施方案中，编码胰岛素的核苷酸序列选自由以下组成的组：13.(a)编码多肽的核苷酸序列，所述多肽包含与seq id no:1、2或3的氨基酸序列具有至少60％序列同一性的氨基酸序列；14.(b)与seq id no:4、5或6的核苷酸序列具有至少60％序列同一性的核苷酸序列；和15.(c)核苷酸序列，其序列由于遗传密码的简并性而与(b)的核苷酸序列的序列不同。16.在第二方面，提供了包含根据第一方面的基因构建体的表达载体，用于治疗和/或预防神经炎症、神经变性和/或认知下降、或与其相关的疾病或病症。17.在优选的实施方案中，表达载体是病毒载体，优选其中所述表达载体是选自由腺病毒载体、腺伴随病毒载体、逆转录病毒载体和慢病毒载体的组成的组的病毒载体，更优选腺伴随病毒载体。18.在优选的实施方案中，表达载体是血清型1、2、3、4、5、6、7、8、9、rh10、rh8、cb4、rh74、dj、2/5、2/1、1/2或anc80的腺伴随病毒载体，优选血清型1、2或9的腺伴随病毒载体，更优选血清型1或9的腺伴随病毒载体。19.在第三方面，提供了药物组合物，其包含根据第一方面的基因构建体和/或根据第二方面的表达载体以及一种或多种药学上可接受的成分，用于治疗和/或预防神经炎症、神经变性和/或认知下降，或与其相关的疾病或病症。20.还提供了根据第一方面使用的基因构建体和/或根据第二方面使用的表达载体和/或根据第三方面使用的药物组合物，其中与神经炎症、神经变性和/或认知障碍相关的疾病或病症选自由以下组成的组：认知障碍，痴呆，阿尔茨海默氏病，血管性痴呆，路易体痴呆，额颞叶痴呆(ftd)，帕金森病，帕金森样疾病，帕金森综合征，亨廷顿氏病，创伤性脑损伤，朊病毒病，由于hiv感染引起的痴呆/神经认知问题，由于衰老引起的痴呆/神经认知问题、tau蛋白病、多发性硬化症和其他神经炎症/神经退行性疾病，优选阿尔茨海默氏病、帕金森病和/或帕金森样疾病，更优选阿尔茨海默氏病或帕金森病。21.在一些实施方案中，基因构建体和/或表达载体和/或药物组合物通过脑脊液内施用来施用。22.在另一方面，提供了基因构建体，其包含编码胰岛素的核苷酸序列，其中编码胰岛素的核苷酸序列与遍在启动子可操作地连接，并且其中所述基因构建体包含在想要防止胰岛素表达的组织中表达的microrna的至少一个靶序列，优选地，其中microrna的至少一个靶序列选自与在哺乳动物的心脏和/或肝脏中表达的microrna结合的那些靶序列。23.在优选的实施方案中，基因构建体包含至少一个在肝脏中表达的microrna的靶序列和至少一个在心脏中表达的microrna的靶序列，优选地，在心脏中表达的microrna选自seq id no:8和16?20，在肝脏中表达的microrna的靶序列选自seq id no:7和9?15，更优选地，所述基因构建体包含microrna?122a的靶序列(seq id no:7)和microrna?1的靶序列(seq id no:8)。24.在另一方面，提供了表达载体，其包含如前述方面所定义的基因构建体，优选地，其中所述表达载体是病毒载体，更优选地，其中所述表达载体是选自由腺病毒载体、腺伴随病毒载体、逆转录病毒载体和慢病毒载体组成的组的病毒载体，最优选地其中所述表达载体是腺伴随病毒载体。25.说明26.本发明人基于针对中枢神经系统(cns)的胰岛素基因疗法开发了改进的基因疗法策略，以对抗神经炎症、神经变性和/或认知下降。本发明载体的单次脑脊液内施用提供的胰岛素的长期和有效表达代表了优于其他疗法的显著优势。特别地，如实验部分所述，本发明人发现了脑定向胰岛素基因疗法的以下意想不到的优点：27.·如本文所述的基因构建体和载体可以在脑，包括下丘脑、皮质、海马、小脑和嗅球(实施例1、2、3、5)中获得稳健和广泛的过度表达。28.·在广泛使用的具有与年龄相关的脑病理例如神经炎症的衰老小鼠模型中，使用根据本发明的基因构建体和载体在脑中表达胰岛素导致神经炎症的明显减少、神经发生增加和星形胶质细胞数量增加(实施例1)以及改善短期记忆、长期记忆和学习能力(实施例5)。29.·在广泛使用的与神经炎症和认知下降相关的肥胖和糖尿病小鼠模型中，使用根据本发明的基因构建体和载体在脑中表达胰岛素导致神经炎症明显减少和星形胶质细胞数量增加(实施例2)。30.因此，本文所述的本发明的方面和实施方案解决了本文所述的至少一些问题和需求。31.基因构建体32.在第一方面，提供了包含编码胰岛素的核苷酸序列的基因构建体。优选地，如本文所述的基因构建体用作药物。更优选地，如本文所述的基因构建体用于治疗和/或预防神经炎症、神经变性和/或认知下降、或与其相关的疾病或病症。33.如本文所述的“基因构建体”具有其通常的和普通的含义，如本领域技术人员鉴于本公开所理解的。“基因构建体”也可以称为“表达盒”或“表达构建体”，是指一个基因或一组基因，包括编码目的蛋白的基因，该基因与控制其表达的启动子可操作地连接。本技术的标题为“基本信息”的部分包括关于“基因构建体”的更多详情。如本文所使用的“可操作地连接”在本技术的标题为“基本信息”的部分中进一步描述。34.在一些实施方案中，如本文所述的基因构建体适合在哺乳动物中表达。如本文所用，“适合在哺乳动物中表达”可以意指基因构建体包括一个或多个调控序列，其基于用于表达的哺乳动物宿主细胞而选择，其可操作地连接至待表达的核苷酸序列。优选地，所述用于表达的哺乳动物宿主细胞是人、鼠或犬细胞。35.在一些实施方案中，如本文所述的基因构建体包含待在哺乳动物的cns中，优选地在脑中，任选地在cns和/或脑中表达的编码胰岛素的核苷酸序列。在一些实施方案中，如本文所述的基因构建体适合在cns中表达，优选在脑中表达。在一些实施方案中，基因构建体在脑中的表达可以意指基因构建体在下丘脑和/或皮质和/或海马和/或小脑和/或嗅球中的表达。因此，基因构建体在脑中的表达可以意指基因构建体在选自由下丘脑、皮质、海马、小脑和嗅球组成的组的至少一个或至少两个或至少三个或所有脑区域中的表达。如在标题为“基本信息”章节所述，可以使用诸如qpcr、蛋白质印迹分析或elisa等技术评估表达。36.在本发明的实施方案的上下文中，待在cns和/或脑中表达的胰岛素；以及适合在cns和/或脑中表达的基因构建体，指的是与其他器官或组织相比，优先或主要(至少高10％，至少高20％，至少高30％，至少高40％，至少高50％，至少高60％，至少高70％，至少高80％，至少高90％，至少高100％，至少高150％，至少高两倍，至少高三倍，至少高四倍，至少高五倍，至少高六倍，至少高七倍，至少高八倍，至少高九倍，至少高十倍或更多)在中枢神经系统和/或脑中表达胰岛素。其他器官或组织可以是肝脏、胰腺、脂肪组织、骨骼肌、心脏、肾脏、结肠、造血组织、肺、卵巢、脾脏、胃、睾丸等。优选地，其他器官是肝脏和/或心脏。其他器官也可能是骨骼肌。在实施方案中，在肝脏、胰腺、脂肪组织、骨骼肌、心脏、肾脏、结肠、造血组织、肺、卵巢、脾脏、胃和/或睾丸中检测不到表达。在优选的实施方案中，在肝脏和/或心脏中检测不到表达。在另一个优选的实施方案中，在骨骼肌中检测不到表达。在一些实施方案中，在选自由肝脏、胰腺、脂肪组织、骨骼肌、心脏、肾脏、结肠、造血组织、肺、卵巢、脾脏、胃、和睾丸组成的组的至少一个，至少两个，至少三个，至少四个或所有器官中检测不到表达。如在标题为“基本信息”章节所述，可以使用诸如qpcr、蛋白质印迹分析或elisa等技术评估表达。37.在一些实施方案中，编码胰岛素的核苷酸序列与遍在启动子可操作地连接。38.在一些实施方案中，如本文所述的遍在启动子选自由cag启动子、cmv启动子、迷你cmv启动子、β?肌动蛋白启动子、劳斯肉瘤病毒(rsv)启动子、延伸因子1α(ef1α)启动子、早期生长反应因子1(egr?1)启动子、真核起始因子4a(elf4a)启动子、铁蛋白重链编码基因(ferh)启动子、铁蛋白轻链编码基因(ferl)启动子、甘油醛?3?磷酸脱氢酶(gapdh)启动子、grp78启动子、grp94启动子、热休克蛋白70(hsp70)启动子、泛素b启动子、sv40启动子、β?驱动蛋白启动子、rosa26启动子和pgk?1启动子组成的组。39.在优选的实施方案中，遍在启动子选自由cag启动子和cmv启动子组成的组。在优选的实施方案中，遍在启动子是cag启动子。在实施例中证明cag启动子适合用于根据本发明的基因构建体。40.在一些实施方案中，cag启动子包含，基本上由或由与seq id no:22具有至少60％，至少61％，至少62％，至少63％，至少64％，至少65％，至少66％，至少67％，至少68％，至少69％，至少70％，至少71％，至少72％，至少73％，至少74％，至少75％，至少76％，至少77％，至少78％，至少79％，至少80％，至少81％，至少82％，至少83％，至少84％，至少85％，至少86％，至少87％，至少88％，至少89％，至少90％，至少91％，至少92％，至少93％，至少94％，至少95％，至少96％，至少97％，至少98％，至少99％或100％的序列同一性的核苷酸序列组成。在一些实施方案中，可以相对于seq id no:22的一部分，例如seq id no:22的至少50％、60％、70％、80％、90％、95％或100％，评估同一性。41.另一个优选的遍在启动子是巨细胞病毒(cmv)启动子。在一些实施方案中，cmv启动子包含，基本上由或由与seq id no:23具有至少60％，至少61％，至少62％，至少63％，至少64％，至少65％，至少66％，至少67％，至少68％，至少69％，至少70％，至少71％，至少72％，至少73％，至少74％，至少75％，至少76％，至少77％，至少78％，至少79％，至少80％，至少81％，至少82％，至少83％，至少84％，至少85％，至少86％，至少87％，至少88％，至少89％，至少90％，至少91％，至少92％，至少93％，至少94％，至少95％，至少96％，至少97％，至少98％，至少99％或100％的序列同一性的核苷酸序列组成。在一些实施方案中，可以相对于seq id no:23的一部分，例如seq id no:23的至少50％、60％、70％、80％、90％、95％或100％评估同一性。42.优选地，所述cmv启动子与内含子序列一起使用。在一些实施方案中，内含子序列包含，基本上由或由与seq id no:21具有至少60％，至少61％，至少62％，至少63％，至少64％，至少65％，至少66％，至少67％，至少68％，至少69％，至少70％，至少71％，至少72％，至少73％，至少74％，至少75％，至少76％，至少77％，至少78％，至少79％，至少80％，至少81％，至少82％，至少83％，至少84％，至少85％，至少86％，至少87％，至少88％，至少89％，至少90％，至少91％，至少92％，至少93％，至少94％，至少95％，至少96％，至少97％，至少98％，至少99％或100％的序列同一性的核苷酸序列组成。在一些实施方案中，可以相对于seq id no:21的一部分，例如seq id no:21的至少50％、60％、70％、80％、90％、95％或100％，评估同一性。43.另一个优选的遍在启动子是迷你cmv启动子。在一些实施方案中，迷你cmv启动子包含，基本上由或由与seq id no:25具有至少60％，至少61％，至少62％，至少63％，至少64％，至少65％，至少66％，至少67％，至少68％，至少69％，至少70％，至少71％，至少72％，至少73％，至少74％，至少75％，至少76％，至少77％，至少78％，至少79％，至少80％，至少81％，至少82％，至少83％，至少84％，至少85％，至少86％，至少87％，至少88％，至少89％，至少90％，至少91％，至少92％，至少93％，至少94％，至少95％，至少96％，至少97％，至少98％，至少99％或100％的序列同一性的核苷酸序列组成。在一些实施方案中，可以相对于seq id no:25的一部分，例如seq id no:25的至少50％、60％、70％、80％、90％、95％或100％，评估同一性。44.另一个优选的遍在启动子是ef1α启动子。在一些实施方案中，ef1α启动子包含，基本上由或由与seq id no:26具有至少60％，至少61％，至少62％，至少63％，至少64％，至少65％，至少66％，至少67％，至少68％，至少69％，至少70％，至少71％，至少72％，至少73％，至少74％，至少75％，至少76％，至少77％，至少78％，至少79％，至少80％，至少81％，至少82％，至少83％，至少84％，至少85％，至少86％，至少87％，至少88％，至少89％，至少90％，至少91％，至少92％，至少93％，至少94％，至少95％，至少96％，至少97％，至少98％，至少99％或100％的序列同一性的核苷酸序列组成。在一些实施方案中，可以相对于seq id no:26的一部分，例如seq id no:26的至少50％、60％、70％、80％、90％、95％或100％，评估同一性。45.另一个优选的遍在启动子是rsv启动子。在一些实施方案中，rsv启动子包含，基本上由或由与seq id no:27具有至少60％，至少61％，至少62％，至少63％，至少64％，至少65％，至少66％，至少67％，至少68％，至少69％，至少70％，至少71％，至少72％，至少73％，至少74％，至少75％，至少76％，至少77％，至少78％，至少79％，至少80％，至少81％，至少82％，至少83％，至少84％，至少85％，至少86％，至少87％，至少88％，至少89％，至少90％，至少91％，至少92％，至少93％，至少94％，至少95％，至少96％，至少97％，至少98％，至少99％或100％的序列同一性的核苷酸序列组成。在一些实施方案中，可以相对于seq id no:27的一部分，例如seq id no:27的至少50％、60％、70％、80％、90％、95％或100％，评估同一性。46.在一些实施方案中，基因构建体包含在想要防止胰岛素在其中表达的组织中表达的microrna的至少一个靶序列。在一些实施方案中，编码胰岛素的核苷酸序列可操作地连接至遍在启动子，基因构建体包含microrna的至少一个靶序列，所述microrna的至少一个靶序列在想要阻止胰岛素表达的组织中表达。47.在标题为“基本信息”章节提供了“遍在启动子”、“可操作地连接”和“microrna”的描述。如本文所使用的，“在组织中表达的microrna的靶序列”或“与在组织中表达的microrna结合的靶序列”或“在组织中表达的microrna的结合位点”是指与在所述组织中表达的microrna的至少一部分互补或部分互补的核苷酸序列，如本文其他地方所述。如在标题为“基本信息”章节所述，可以使用诸如qpcr、蛋白质印迹分析或elisa等技术评估表达。48.在一些实施方案中，microrna的至少一个靶序列选自与在哺乳动物的心脏和/或肝脏中表达的microrna结合的那些靶序列。优选地，在一些实施方案中，基因构建体包含至少一个在肝脏中表达的microrna的靶序列和至少一个在心脏中表达的microrna的靶序列。49.如本文所使用的，“在肝脏中表达的microrna的靶序列”或“与在肝脏中表达的microrna结合的靶序列”或“在肝脏中表达的microrna的结合位点”是指与在肝脏中表达的microrna的至少一部分互补或部分互补的核苷酸序列。类似地，如本文所使用的，“在心脏中表达的microrna的靶序列”或“与在心脏中表达的microrna结合的靶序列”或“在心脏中表达的microrna的结合位点”是指与在心脏中表达的microrna的至少一部分互补或部分互补的核苷酸序列。50.如本文所述，在肝脏中表达的microrna的一部分或在心脏中表达的microrna的一部分是指所述microrna的至少四个，至少五个，至少六个或至少七个连续核苷酸的核苷酸序列。结合位点序列可以与表达的microrna的至少一部分具有完美的互补性，这意味着该序列是完美的匹配而没有发生任何错配。或者，结合位点序列可以与表达的microrna的至少一部分部分互补，这意味着可能发生四个、五个、六个或七个连续核苷酸中的一个错配。部分互补的结合位点优选包含与microrna种子区域的完美或接近完美的互补性，这意味着在microrna的种子区域及其结合位点之间不会发生错配(完美的互补性)或每四个、五个、六个或七个连续核苷酸一个错配(接近完美的互补性)。microrna的种子区域由microrna的5'区域的microrna的大约第二核苷酸到大约第八核苷酸组成。本文所述的部分优选是所述microrna的种子区域。包含在肝脏中表达的microrna或在心脏中表达的microrna的靶序列的信使rna(mrna)的降解可能是通过rna干扰途径或通过mrna的直接翻译控制(抑制)来实现的。本发明决不受限于mirna在抑制转基因或编码蛋白表达中最终使用的途径。51.在本发明的上下文中，与肝脏中表达的microrna结合的靶序列可以被如下核苷酸序列取代，所述核苷酸序列包含与seq id no:7或9?15具有至少60％，至少61％，至少62％，至少63％，至少64％，至少65％，至少66％，至少67％，至少68％，至少69％，至少70％，至少71％，至少72％，至少73％，至少74％，至少75％，至少76％，至少77％，至少78％，至少79％，至少80％，至少81％，至少82％，至少83％，至少84％，至少85％，至少86％，至少87％，至少88％，至少89％，至少90％，至少91％，至少92％，至少93％，至少94％，至少95％，至少96％，至少97％，至少98％，至少99％或100％的序列同一性的核苷酸序列。在一些实施方案，与肝脏中表达的microrna结合的靶序列可以被如下核苷酸序列取代，所述核苷酸序列包含与seq id no:7或9?15的4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23或更多核苷酸的连续段具有至少60％，至少61％，至少62％，至少63％，至少64％，至少65％，至no:8或16?20的4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23或更多核苷酸的连续段具有至少60％，至少61％，至少62％，至少63％，至少64％，至少65％，至少66％，至少67％，至少68％，至少69％，至少70％，至少71％，至少72％，至少73％，至少74％，至少75％，至少76％，至少77％，至少78％，至少79％，至少80％，至少81％，至少82％，至少83％，至少84％，至少85％，至少86％，至少87％，至少88％，至少89％，至少90％，至少91％，至少92％，至少93％，至少94％，至少95％，至少96％，至少97％，至少98％，至少99％或100％的序列同一性的核苷酸序列。55.在优选的实施方案中，在心脏中表达的microrna的靶序列可以被如下核苷酸序列取代，所述核苷酸序列包含与seq id no:8具有至少60％，至少61％，至少62％，至少63％，至少64％，至少65％，至少66％，至少67％，至少68％，至少69％，至少70％，至少71％，至少72％，至少73％，至少74％，至少75％，至少76％，至少77％，至少78％，至少79％，至少80％，至少81％，至少82％，至少83％，至少84％，至少85％，至少86％，至少87％，至少88％，至少89％，至少90％，至少91％，至少92％，至少93％，至少94％，至少95％，至少96％，至少97％，至少98％，至少99％或100％的序列同一性的核苷酸序列。在一些实施方案，在心脏中表达的microrna的靶序列可以被如下核苷酸序列取代，所述核苷酸序列包含与seq id no:8的4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23或更多核苷酸的连续段具有至少60％，至少61％，至少62％，至少63％，至少64％，至少65％，至少66％，至少67％，至少68％，至少69％，至少70％，至少71％，至少72％，至少73％，至少74％，至少75％，至少76％，至少77％，至少78％，至少79％，至少80％，至少81％，至少82％，至少83％，至少84％，至少85％，至少86％，至少87％，至少88％，至少89％，至少90％，至少91％，至少92％，至少93％，至少94％，至少95％，至少96％，至少97％，至少98％，至少99％或100％的序列同一性的核苷酸序列。56.在进一步的实施方案中，如本文所述的在心脏中表达的microrna的靶序列的至少一个拷贝存在于本发明的基因构建体中。在进一步的实施方案中，如本文所述的在心脏中表达的microrna的靶序列的两个、三个、四个、五个、六个、七个或八个拷贝存在于本发明的基因构建体中。在优选的实施方案中，编码mirt?1(seq id no:8)的核苷酸序列的一个、两个、三个、四个、五个、六个、七个或八个拷贝存在于本发明的基因构建体中。如本文所述的在心脏中表达的microrna的靶序列的优选拷贝数为四个。57.如本文所使用的，在心脏中表达的microrna的靶序列发挥在心脏中表达的microrna的靶序列的至少可检测水平的活性，如本领域技术人员已知的。在心脏中表达的microrna的靶序列的活性是与其在心脏中表达的同源microrna结合，并且当与转基因可操作地连接时，介导心脏中转基因表达的脱靶。可以通过本领域技术人员已知的标准测定法，例如qpcr，蛋白质印迹分析或elisa，通过测量mrna或蛋白质水平上心脏中转基因表达的水平来评估该活性。58.在一些实施方案中，如本文所述的在肝脏中表达的microrna的靶序列的至少一个拷贝，以及如本文所述的在心脏中表达的microrna的靶序列的至少一个拷贝，存在于本发明的基因构建体中。在进一步的实施方案中，如本文所述的在肝脏中表达的microrna的靶序列的两个、三个、四个、五个、六个、七个或八个拷贝，以及如本文所述的在心脏中表达的microrna的靶序列的两个、三个、四个、五个、六个、七个或八个拷贝存在于本发明的基因构建体中。在进一步的实施方案中，编码mirt?122a(seq id no:7)的核苷酸序列的一个、两个、三个、四个、五个、六个、七个或八个拷贝和编码mirt?1(seq id no:8)的核苷酸序列的一个、两个、三个、四个、五个、六个、七个或八个拷贝组合在本发明的基因构建体中。在进一步的实施方案中，编码mirt?122a(seq id no:7)的核苷酸序列的四个拷贝和编码mirt?1(seq id no:8)的核苷酸序列的四个拷贝组合在本发明的基因构建体中。59.在一些实施方案中，提供了如上所述的基因构建体，其中在肝脏中表达的microrna的靶序列和在心脏中表达的microrna的靶序列选自由序列seq id no:7至20和/或其组合组成的组中。在一些实施方案中，提供了如上所述的基因构建体，其中在心脏中表达的microrna的靶序列选自seqid no:8和16?20，并且在肝脏中表达的microrna的靶序列选自seq idno:7和9?15。在一些实施方案中，提供了如上所述的基因构建体，其中所述基因构建体包含microrna?122a的靶序列(seq id no:7)和microrna?1的靶序列(seq id no:8)。60.如本文所述的在肝脏中表达的microrna的靶序列和/或在心脏中表达的microrna的靶序列发挥至少可检测水平的活性。microrna的靶序列的活性可以是包含所述microrna的靶序列的mrna的降解。这种降解可以使用技术人员已知的任何技术来评估，例如通过测量所述mrna的表达/存在。如在标题为“基本信息”章节所述，可以使用诸如qpcr、蛋白质印迹分析或elisa等技术评估表达。61.根据本发明的基因构建体中存在的编码胰岛素的核苷酸序列可以源自任何胰岛素基因或胰岛素编码序列，包括突变的胰岛素基因或胰岛素编码序列，或密码子优化的胰岛素基因或胰岛素编码序列。在一些实施方案中，编码胰岛素的核苷酸序列是鼠、犬或人胰岛素基因或胰岛素编码序列，鼠、犬或人突变的胰岛素基因或胰岛素编码序列，或鼠、犬或人密码子优化的胰岛素基因或胰岛素编码序列。在一些实施方案中，编码胰岛素的核苷酸序列是来自人、黑猩猩、小鼠、大鼠或狗的胰岛素基因或胰岛素编码序列；或来自人、黑猩猩、小鼠、大鼠或狗的突变的胰岛素基因或胰岛素编码序列；或来自人、黑猩猩、小鼠、大鼠或狗的密码子优化的胰岛素基因或胰岛素编码序列。优选人序列。62.在优选的实施方案中，根据本发明的基因构建体中存在的编码胰岛素的核苷酸序列编码具有弗林蛋白酶切割位点的改造的胰岛素。已知这种具有弗林蛋白酶切割位点的改造胰岛素以高效的方式加工以在非胰腺组织中产生成熟的胰岛素。在一些实施方案中，编码具有弗林蛋白酶切割位点的改造的胰岛素的核苷酸序列选自由以下组成的组：63.(a)编码多肽的核苷酸序列，所述多肽包含与seq id no:41或42的氨基酸序列具有至少60％，至少61％，至少62％，至少63％，至少64％，至少65％，至少66％，至少67％，至少68％，至少69％，至少70％，至少71％，至少72％，至少73％，至少74％，至少75％，至少76％，至少77％，至少78％，至少79％，至少80％，至少81％，至少82％，至少83％，至少84％，至少85％，至少86％，至少87％，至少88％，至少89％，至少90％，至少91％，至少92％，至少93％，至少94％，至少95％，至少96％，至少97％，至少98％，至少99％或100％的序列同一性或相似性的氨基酸序列；64.(b)核苷酸序列，所述核苷酸序列与seq id no:45或46的核苷酸序列具有至少60％，至少61％，至少62％，至少63％，至少64％，至少65％，至少66％，至少67％，至少68％，至少69％，至少70％，至少71％，至少72％，至少73％，至少74％，至少75％，至少76％，至少77％，至少78％，至少79％，至少80％，至少81％，至少82％，至少83％，至少84％，至少85％，至少86％，至少87％，至少88％，至少89％，至少90％，至少91％，至少92％，至少93％，至少94％，至少95％，至少96％，至少97％，至少98％，至少99％或100％的序列同一性；和65.(c)核苷酸序列，其序列由于遗传密码的简并性而与(a)或(b)的核苷酸序列的序列不同。66.因此，在一些实施方案中，编码胰岛素的优选核苷酸序列编码多肽，所述多肽包含与seq id no:1?3或41?44具有至少60％，至少61％，至少62％，至少63％，至少64％，至少65％，至少66％，至少67％，至少68％，至少69％，至少70％，至少71％，至少72％，至少73％，至少74％，至少75％，至少76％，至少77％，至少78％，至少79％，至少80％，至少81％，至少82％，至少83％，至少84％，至少85％，至少86％，至少87％，至少88％，至少89％，至少90％，至少91％，至少92％，至少93％，至少94％，至少95％，至少96％，至少97％，至少98％，至少99％或100％同一性或相似性的氨基酸序列。seq id no:1代表人胰岛素的氨基酸序列。seq id no:2代表鼠胰岛素的氨基酸序列。seq id no:3代表犬胰岛素的氨基酸序列。seq id no:41代表具有弗林蛋白酶切割位点的人胰岛素的氨基酸序列。seq id no:42代表具有弗林蛋白酶切割位点的人胰岛素突变体his?b10?asp的氨基酸序列。seq id no:43代表鼠胰岛素的氨基酸序列。seq id no:44代表黑猩猩胰岛素的氨基酸序列。在一些实施方案中，可以相对于seq id no:1?3或41?44的一部分，例如seq id no:1?3或41?44的至少50％、60％、70％、80％、90％、95％或100％，评估同一性。67.在一些实施方案中，存在于根据本发明的基因构建体中的编码胰岛素的核苷酸序列与选自由seq id no:4?6或45?48组成的组的任何序列具有至少60％，至少61％，至少62％，至少63％，至少64％，至少65％，至少66％，至少67％，至少68％，至少69％，至少70％，至少71％，至少72％，至少73％，至少74％，至少75％，至少76％，至少77％，至少78％，至少79％，至少80％，至少81％，至少82％，至少83％，至少84％，至少85％，至少86％，至少87％，至少88％，至少89％，至少90％，至少91％，至少92％，至少93％，至少94％，至少95％，至少96％，至少97％，至少98％，至少99％或100％的同一性。seq id no:4代表人胰岛素的核苷酸序列。seq id no:5代表鼠胰岛素的核苷酸序列。seq id no:6代表犬胰岛素的核苷酸序列。seq id no:45代表具有弗林蛋白酶切割位点的人胰岛素的核苷酸序列。seq id no:46代表具有弗林蛋白酶切割位点的人胰岛素突变体his?b10?asp的核苷酸序列。seq id no:47代表鼠胰岛素的核苷酸序列。seq id no:48代表黑猩猩胰岛素的核苷酸序列。在一些实施方案中，可以相对于seq id no:4?6或45?48的一部分，例如seq idno:4?6或45?48的至少50％、60％、70％、80％、90％、95％或100％，评估同一性。68.在标题为“基本信息”的章节下提供了“同一性”或“序列同一性”和“相似性”或“序列相似性”的描述。69.在一些实施方案中，存在于根据本发明的基因构建体中的编码人胰岛素的核苷酸序列与seq id no:4具有至少60％，至少61％，至少62％，至少63％，至少64％，至少65％，至少66％，至少67％，至少68％，至少69％，至少70％，至少71％，至少72％，至少73％，至少74％，至少75％，至少76％，至少77％，至少78％，至少79％，至少80％，至少81％，至少82％，至少83％，至少84％，至少85％，至少86％，至少87％，至少88％，至少89％，至少90％，至少91％，至少92％，至少93％，至少94％，至少95％，至少96％，至少97％，至少98％，至少99％或100％的同一性。在一些实施方案中，可以相对于seq id no:4的一部分，例如seq id no:4的至少50％、60％、70％、80％、90％、95％或100％，评估同一性。70.在一些实施方案中，存在于根据本发明的基因构建体中的编码鼠胰岛素的核苷酸序列与seq id no:5或47具有至少60％，至少61％，至少62％，至少63％，至少64％，至少65％，至少66％，至少67％，至少68％，至少69％，至少70％，至少71％，至少72％，至少73％，至少74％，至少75％，至少76％，至少77％，至少78％，至少79％，至少80％，至少81％，至少82％，至少83％，至少84％，至少85％，至少86％，至少87％，至少88％，至少89％，至少90％，至少91％，至少92％，至少93％，至少94％，至少95％，至少96％，至少97％，至少98％，至少99％或100％的同一性。在一些实施方案中，可以相对于seq id no:5或47的一部分，例如seq id no:5或47的至少50％、60％、70％、80％、90％、95％或100％，评估同一性。71.在一些实施方案中，存在于根据本发明的基因构建体中的编码犬胰岛素的核苷酸序列与seq id no:6具有至少60％，至少61％，至少62％，至少63％，至少64％，至少65％，至少66％，至少67％，至少68％，至少69％，至少70％，至少71％，至少72％，至少73％，至少74％，至少75％，至少76％，至少77％，至少78％，至少79％，至少80％，至少81％，至少82％，至少83％，至少84％，至少85％，至少86％，至少87％，至少88％，至少89％，至少90％，至少91％，至少92％，至少93％，至少94％，至少95％，至少96％，至少97％，至少98％，至少99％或100％的同一性。在一些实施方案中，可以相对于seq id no:6的一部分，例如seq id no:6的至少50％、60％、70％、80％、90％、95％或100％，评估同一性。72.在一些实施方案中，存在于根据本发明的基因构建体中的编码人胰岛素的核苷酸序列与seq id no:45或46具有至少60％，至少61％，至少62％，至少63％，至少64％，至少65％，至少66％，至少67％，至少68％，至少69％，至少70％，至少71％，至少72％，至少73％，至少74％，至少75％，至少76％，至少77％，至少78％，至少79％，至少80％，至少81％，至少82％，至少83％，至少84％，至少85％，至少86％，至少87％，至少88％，至少89％，至少90％，至少91％，至少92％，至少93％，至少94％，至少95％，至少96％，至少97％，至少98％，至少99％或100％的同一性。在一些实施方案中，可以相对于seq id no:45或46的一部分，例如seq id no:45或46的至少50％、60％、70％、80％、90％、95％或100％，评估同一性。73.在一些实施方案中，存在于根据本发明的基因构建体中的编码黑猩猩胰岛素的核苷酸序列与seq id no:48具有至少60％，至少61％，至少62％，至少63％，至少64％，至少65％，至少66％，至少67％，至少68％，至少69％，至少70％，至少71％，至少72％，至少73％，至少74％，至少75％，至少76％，至少77％，至少78％，至少79％，至少80％，至少81％，至少82％，至少83％，至少84％，至少85％，至少86％，至少87％，至少88％，至少89％，至少90％，至少91％，至少92％，至少93％，至少94％，至少95％，至少96％，至少97％，至少98％，至少99％或100％的同一性。在一些实施方案中，可以相对于seq id no:48的一部分，例如seq id no:48的至少50％、60％、70％、80％、90％、95％或100％，评估同一性。74.在一些实施方案中，提供了如本文所述的基因构建体，其中编码胰岛素的核苷酸序列选自由以下组成的组中：75.(a)编码多肽的核苷酸序列，所述多肽包含与seq id no:1?3或41?44的氨基酸序列具有至少60％，至少61％，至少62％，至少63％，至少64％，至少65％，至少66％，至少67％，至少68％，至少69％，至少70％，至少71％，至少72％，至少73％，至少74％，至少75％，至少76％，至少77％，至少78％，至少79％，至少80％，至少81％，至少82％，至少83％，至少84％，至少85％，至少86％，至少87％，至少88％，至少89％，至少90％，至少91％，至少92％，至少93％，至少94％，至少95％，至少96％，至少97％，至少98％，至少99％或100％的序列同一性或相似性的氨基酸序列；76.(b)核苷酸序列，所述核苷酸序列与seq id no:4?6或45?48的核苷酸序列具有至少60％，至少61％，至少62％，至少63％，至少64％，至少65％，至少66％，至少67％，至少68％，至少69％，至少70％，至少71％，至少72％，至少73％，至少74％，至少75％，至少76％，至少77％，至少78％，至少79％，至少80％，至少81％，至少82％，至少83％，至少84％，至少85％，至少86％，至少87％，至少88％，至少89％，至少90％，至少91％，至少92％，至少93％，至少94％，至少95％，至少96％，至少97％，至少98％，至少99％或100％的序列同一性；和77.(c)核苷酸序列，其序列由于遗传密码的简并性而与(a)或(b)的核苷酸序列的序列不同。78.由本文所述的核苷酸序列编码的胰岛素(尤其是当胰岛素序列被描述为与给定的seq id no具有最小同一性百分比时)发挥至少可检测水平的胰岛素活性。胰岛素的活性可以是高血糖的调节。更合适地，在本公开内容的上下文中，可以在胰岛素信号级联的水平评估胰岛素的活性。例如，可以确定胰岛素信号级联的不同蛋白质的磷酸化状态，例如irs?1/2的酪氨酸磷酸化、akt的磷酸化等。磷酸化状态可以例如通过蛋白质印迹分析来评估，所述蛋白质印迹分析使用识别磷酸化酪氨酸残基的抗体和/或特异性识别蛋白质例如irs?1/2和akt的磷酸化形式的抗体。胰岛素的活性还可以是减少神经炎症、增加神经发生或增加星形胶质细胞。这种活性可以通过本领域技术人员已知的方法来评估，例如通过测量炎症分子、星形胶质细胞标志物和/或神经源性标志物的表达水平来评估，如实验部分所述。79.下表总结了适用于本发明基因构建体的代表性数量的胰岛素序列在dna和蛋白质水平上的序列同一性。80.表1通过成对比对确定的同一性％。homologene与默认参数一起使用(https://www.ncbi.nlm.nih.gov/homologene)。81.[0082][0083]在一些实施方案中，编码胰岛素的核苷酸序列与组织特异性启动子可操作地连接。在优选的实施方案中，组织特异性启动子是cns特异性启动子，更优选脑特异性启动子。如本文所使用的，cns和/或脑特异性启动子还涵盖引导在cns和/或脑的特定区域或细胞亚群中表达的启动子。因此，cns?和/或脑特异性启动子也可以选自海马特异性启动子、小脑特异性启动子、皮质特异性启动子、下丘脑特异性启动子和/或嗅球特异性启动子，或其任何组合。[0084]在标题为“基本信息”章节提供了“组织特异性启动子”的描述。[0085]在一些实施方案中，本文所述的cns特异性启动子选自由突触蛋白1启动子，神经元特异性烯醇酶(nse)启动子，钙/钙调蛋白依赖性蛋白激酶ii(camkii)启动子，酪氨酸羟化酶(th)启动子，叉头盒a2(foxa2)启动子，α?丝联蛋白(ina)启动子，巢蛋白(nes)启动子，胶质细胞原纤维酸性蛋白(gfap)启动子，乙醛脱氢酶1家族成员l1(aldh1l1)启动子，髓磷脂相关少突胶质细胞碱性蛋白(mobp)启动子，同源框蛋白9(hb9)启动子、促性腺激素释放激素(gnrh)启动子和髓磷脂碱性蛋白(mbp)启动子组成的组。[0086]在一些实施方案中，本文所述的脑特异性启动子选自由突触蛋白1启动子，神经元特异性烯醇酶(nse)启动子，钙/钙调蛋白依赖性蛋白激酶ii(camkii)启动子，酪氨酸羟化酶(th)启动子，叉头盒a2(foxa2)启动子，α?丝联蛋白(ina)启动子，巢蛋白(nes)启动子，胶质细胞原纤维酸性蛋白(gfap)启动子，乙醛脱氢酶1家族成员l1(aldh1l1)启动子，髓磷脂相关少突胶质细胞碱性蛋白(mobp)启动子、促性腺激素释放激素(gnrh)启动子和髓磷脂碱性蛋白(mbp)启动子组成的组中。[0087]在优选的实施方案中，cns和/或脑特异性启动子是突触蛋白1启动子。在一些实施方案中，突触蛋白1启动子包含，基本上由或由与seq idno:28具有至少60％，至少61％，至少62％，至少63％，至少64％，至少65％，至少66％，至少67％，至少68％，至少69％，至少70％，至少71％，至少72％，至少73％，至少74％，至少75％，至少76％，至少77％，至少78％，至少79％，至少80％，至少81％，至少82％，至少83％，至少84％，至少85％，至少86％，至少87％，至少88％，至少89％，至少90％，至少91％，至少92％，至少93％，至少94％，至少95％，至少96％，至少97％，至少98％，至少99％或100％的序列同一性的核苷酸序列组成。在一些实施方案中，可以相对于seq id no:28的一部分，例如seq idno:28的至少50％、60％、70％、80％、90％、95％或100％，评估同一性。[0088]另一个优选的cns和/或脑特异性启动子是钙/钙调蛋白依赖性蛋白激酶ii(camkii)启动子。在一些实施方案中，钙/钙调蛋白依赖性蛋白激酶ii(camkii)启动子包含，基本上由或由与seq id no:29具有至少60％，至少61％，至少62％，至少63％，至少64％，至少65％，至少66％，至少67％，至少68％，至少69％，至少70％，至少71％，至少72％，至少73％，至少74％，至少75％，至少76％，至少77％，至少78％，至少79％，至少80％，至少81％，至少82％，至少83％，至少84％，至少85％，至少86％，至少87％，至少88％，至少89％，至少90％，至少91％，至少92％，至少93％，至少94％，至少95％，至少96％，至少97％，至少98％，至少99％或100％的序列同一性的核苷酸序列组成。在一些实施方案中，可以相对于seq id no:29的一部分，例如seq id no:29的至少50％、60％、70％、80％、90％、95％或100％，评估同一性。[0089]另一个优选的cns和/或脑特异性启动子是胶质细胞原纤维酸性蛋白(gfap)启动子。在一些实施方案中，胶质细胞原纤维酸性蛋白(gfap)启动子包含，基本上由或由与seq id no:30具有至少60％，至少61％，至少62％，至少63％，至少64％，至少65％，至少66％，至少67％，至少68％，至少69％，至少70％，至少71％，至少72％，至少73％，至少74％，至少75％，至少76％，至少77％，至少78％，至少79％，至少80％，至少81％，至少82％，至少83％，至少84％，至少85％，至少86％，至少87％，至少88％，至少89％，至少90％，至少91％，至少92％，至少93％，至少94％，至少95％，至少96％，至少97％，至少98％，至少99％或100％的序列同一性的核苷酸序列组成。在一些实施方案中，可以相对于seq id no:30的一部分，例如seq id no:30的至少50％、60％、70％、80％、90％、95％或100％，评估同一性。[0090]另一个优选的cns和/或脑特异性启动子是巢蛋白启动子。在一些实施方案中，巢蛋白启动子包含，基本上由或由与seq id no:31具有至少60％，至少61％，至少62％，至少63％，至少64％，至少65％，至少66％，至少67％，至少68％，至少69％，至少70％，至少71％，至少72％，至少73％，至少74％，至少75％，至少76％，至少77％，至少78％，至少79％，至少80％，至少81％，至少82％，至少83％，至少84％，至少85％，至少86％，至少87％，至少88％，至少89％，至少90％，至少91％，至少92％，至少93％，至少94％，至少95％，至少96％，至少97％，至少98％，至少99％或100％的序列同一性的核苷酸序列组成。在一些实施方案中，可以相对于seq id no:31的一部分，例如seq id no:31的至少50％、60％、70％、80％、90％、95％或100％，评估同一性。[0091]另一个优选的cns特异性启动子是同源框蛋白9(hb9)启动子。在一些实施方案中，同源框蛋白9(hb9)启动子包含，基本上由或由与seqid no:32具有至少60％，至少61％，至少62％，至少63％，至少64％，至少65％，至少66％，至少67％，至少68％，至少69％，至少70％，至少71％，至少72％，至少73％，至少74％，至少75％，至少76％，至少77％，至少78％，至少79％，至少80％，至少81％，至少82％，至少83％，至少84％，至少85％，至少86％，至少87％，至少88％，至少89％，至少90％，至少91％，至少92％，至少93％，至少94％，至少95％，至少96％，至少97％，至少98％，至少99％或100％的序列同一性的核苷酸序列组成。在一些实施方案中，可以相对于seq id no:32的一部分，例如seq id no:32的至少50％、60％、70％、80％、90％、95％或100％，评估同一性。[0092]另一个优选的cns和/或脑特异性启动子是酪氨酸羟化酶(th)启动子。在一些实施方案中，酪氨酸羟化酶(th)启动子包含，基本上由或由与seq id no:33具有至少60％，至少61％，至少62％，至少63％，至少64％，至少65％，至少66％，至少67％，至少68％，至少69％，至少70％，至少71％，至少72％，至少73％，至少74％，至少75％，至少76％，至少77％，至少78％，至少79％，至少80％，至少81％，至少82％，至少83％，至少84％，至少85％，至少86％，至少87％，至少88％，至少89％，至少90％，至少91％，至少92％，至少93％，至少94％，至少95％，至少96％，至少97％，至少98％，至少99％或100％的序列同一性的核苷酸序列组成。在一些实施方案中，可以相对于seq id no:33的一部分，例如seq id no:33的至少50％、60％、70％、80％、90％、95％或100％，评估同一性。[0093]另一个优选的cns和/或脑特异性启动子是髓磷脂碱性蛋白(mbp)启动子。在一些实施方案中，髓磷脂碱性蛋白(mbp)启动子包含，基本上由或由与seq id no:34具有至少60％，至少61％，至少62％，至少63％，至少64％，至少65％，至少66％，至少67％，至少68％，至少69％，至少70％，至少71％，至少72％，至少73％，至少74％，至少75％，至少76％，至少77％，至少78％，至少79％，至少80％，至少81％，至少82％，至少83％，至少84％，至少85％，至少86％，至少87％，至少88％，至少89％，至少90％，至少91％，至少92％，至少93％，至少94％，至少95％，至少96％，至少97％，至少98％，至少99％或100％的序列同一性的核苷酸序列组成。在一些实施方案中，可以相对于seq id no:34的一部分，例如seq id no:34的至少50％、60％、70％、80％、90％、95％或100％，评估同一性。[0094]在一些实施方案中，本文所述的cns和/或脑特异性启动子引导所述核苷酸序列在cns和/或脑的至少一个细胞中表达。优选地，所述启动子引导在至少10％，20％，30％，40％，40％，60％，70％，80％，90％或100％的cns和/或脑的细胞中表达。如本文所使用的，cns和/或脑特异性启动子还涵盖引导在cns和/或脑的特定区域或细胞亚群中表达的启动子。因此，本文所述的cns和/或脑特异性启动子也可以引导在至少10％，20％，30％，40％，40％，60％，70％，80％，90％或100％的海马、小脑、皮质、下丘脑和/或嗅球的细胞中表达。如在标题为“基本信息”章节所述，可以使用诸如qpcr、蛋白质印迹分析或elisa等技术评估表达。[0095]如本文所用的启动子(特别是当启动子序列被描述为与给定seq idno具有最小同一性百分比时)应发挥至少本领域技术人员已知的启动子活性。优选地，被描述为与给定seq id no具有最小同一性百分比的启动子应控制与其可操作地连接的核苷酸序列(即，至少编码胰岛素的核苷酸序列)的转录，如在本领域技术人员已知的测定中所评估的那样。例如，这种测定可以涉及测量转基因的表达。如在标题为“基本信息”章节所述，可以使用诸如qpcr、蛋白质印迹分析或elisa等技术评估表达。[0096]其他序列可以存在于本发明的基因构建体中。适用于本文的示例性额外的序列包括反向末端重复(itr)，sv40聚腺苷酸化信号(seq id no:37)，兔β?珠蛋白聚腺苷酸化信号(seq id no:38)，cmv增强子序列(seq idno:24)。在本发明的上下文中，“itr”旨在涵盖一个5′itr和一个3′itr，每个都衍生自aav的基因组。优选的itr来自aav2，并由seq id no:35(5′itr)和seq id no:36(3′itr)表示。在本发明的上下文中，包括使用cmv增强子序列(seq id no:24)和cmv启动子序列(seq id no:23)作为两个单独的序列或作为单个序列(seq id no:39)。这些另外的序列中的每一个都可以存在于根据本发明的基因构建体中。在一些实施方案中，提供了基因构建体，其包含如本文所述的编码胰岛素的核苷酸序列，进一步包含一个5'itr和一个3'itr，优选aav2 itr，更优选由seq id no:30(5'itr)和seq id no:31(3'itr)代表的aav2 itr。在一些实施方案中，提供了基因构建体，其包含如本文所述的编码胰岛素的核苷酸序列，进一步包含聚腺苷酸化信号，优选sv40聚腺苷酸化信号(优选由seq id no:32表示)和/或兔β?珠蛋白聚腺苷酸化信号(优选由seq id no:33表示)。[0097]任选地，额外的核苷酸序列可以可操作地连接至编码胰岛素的核苷酸序列，例如编码信号序列、核定位信号、表达增强子等的核苷酸序列。[0098]在一些实施方案中，提供了基因构建体，其包含编码胰岛素的核苷酸序列，任选地，其中所述基因构建体不包含在想要阻止胰岛素表达的组织中表达的microrna的靶序列。[0099]在一些实施方案中，本文所用的序列同一性或相似性水平优选为70％。另一个优选的序列同一性或相似性水平是80％。另一个优选的序列同一性或相似性水平是90％。另一个优选的序列同一性或相似性水平是95％。[0100]另一个优选的序列同一性或相似性水平是99％。[0101]表达载体[0102]可以将本文所述的基因构建体置于表达载体中。因此，在另一方面，提供了表达载体，其包含如本文所述的基因构建体。优选地，如本文所述的表达载体用作药物。更优选地，如本文所述的表达载体用于治疗和/或预防神经炎症、神经变性和/或认知下降、或与其相关的疾病或病症。[0103]在标题为“基本信息”章节提供了“表达载体”的描述。[0104]在一些实施方案中，表达载体是病毒表达载体。在一些实施方案中，病毒载体可以是选自由腺病毒载体、腺伴随病毒载体、逆转录病毒载体和慢病毒载体组成的组的病毒载体。优选的病毒载体是腺伴随病毒载体。[0105]在标题为“基本信息”章节提供了“病毒表达载体”的描述。腺病毒载体也称为腺病毒衍生的载体，腺伴随病毒载体也称为腺伴随病毒衍生的载体，逆转录病毒载体也称为逆转录病毒衍生的载体，慢病毒载体也称为慢病毒衍生的载体。优选的病毒载体是腺伴随病毒载体。在标题为“基本信息”章节提供了“腺伴随病毒载体”的描述。[0106]在一些实施方案中，载体是腺伴随载体或腺伴随病毒载体或腺伴随病毒衍生的载体(aav)，其选自由血清型1的aav(aav1)，血清型2的aav(aav2)，血清型3的aav(aav3)，血清型4的aav(aav4)，血清型5的aav(aav5)，血清型6的aav(aav6)，血清型7的aav(aav7)，血清型8的aav(aav8)，血清型9的aav(aav9)，血清型rh10的aav(aavrh10)，血清型rh8的aav(aavrh8)，血清型cb4的aav(aavcb4)，血清型rh74的aav(aavrh74)，血清型dj的aav(aavdj)，血清型2/5的aav(aav2/5)，血清型2/1的aav(aav2/1)，血清型1/2的aav(aav1/2)，血清型anc80的aav(aavanc80)组成的组。在优选的实施方案中，载体是血清型1、2或9的aav(aav1、aav2或aav9)。在实施例中证明这些aav血清型适合用作根据本发明的表达载体。在特别优选的实施方案中，表达载体是血清型9或1的腺伴随病毒载体。[0107]在优选的实施方案中，表达载体是aav1或aav9，优选aav9，并且包含基因构建体，所述基因构建体包含编码胰岛素的核苷酸序列，其中所述基因构建体包含在想要阻止胰岛素表达的组织中表达的microrna的至少一个靶序列。[0108]在另一个优选的实施方案中，表达载体是aav1或aav9，优选aav1，并且包含基因构建体，所述基因构建体包含编码胰岛素的核苷酸序列，任选地，其中所述基因构建体不包含在想要阻止胰岛素表达的组织中表达的microrna的靶序列。[0109]在优选的实施方案中，表达载体是aav9?cag?hins?dmirt，包含与cag启动子和mirna靶序列mirt?1和mirt?122a可操作地连接的编码人胰岛素的基因构建体。任选地，基因构建体还包括兔β?珠蛋白聚腺苷酸化信号。在另一个优选的实施方案中，表达载体是aav1?cag?hins，包含与cag启动子可操作地连接的编码人胰岛素的基因构建体。任选地，基因构建体还包括兔β?珠蛋白聚腺苷酸化信号。[0110]组合物[0111]在进一步的方面，提供了组合物，其包含如本文所述的基因构建体和/或如本文所述的病毒载体，以及任选地一种或多种药学上可接受的成分。优选地，如本文所述的组合物用作药物。优选地，如本文所述的组合物用于治疗和/或预防神经炎症、神经变性和/或认知下降、或与其相关的疾病或病症。优选地，在一些实施方案中，组合物是药物组合物。如本文所述的此类组合物也可称为基因疗法组合物。[0112]如本文所使用的，“药学上可接受的成分”包括药学上可接受的载体，填充剂，防腐剂，增溶剂，运载体，稀释剂和/或赋形剂。因此，一种或多种药学上可接受的成分可以选自由药学上可接受的载体，填充剂，防腐剂，增溶剂，运载体，稀释剂和/或赋形剂组成的组。这样的药学上可接受的载体，填充剂，防腐剂，增溶剂，运载体，稀释剂和/或赋形剂可以例如在《雷明顿：药学科学与实践》第22版,药学出版社(2013)中找到。[0113]其他化合物可以存在于本发明的组合物中。所述化合物可以帮助递送组合物。在本发明的上下文中，合适的化合物是：能够形成复合物、纳米颗粒、胶束和/或脂质体的化合物，所述复合物、纳米颗粒、胶束和/或脂质体递送如本文所述的每种成分，通过细胞膜复合或捕获在囊泡或脂质体中。这些化合物中的许多是本领域已知的。合适的化合物包括聚乙烯亚胺(pei)，或类似的阳离子聚合物，包括聚丙烯亚胺或聚乙烯亚胺共聚物(pec)和衍生物；合成的亲水脂分子(saint?18)；lipofectintm，dotap。本领域技术人员将知道哪种制剂类型最适合如本文所述的组合物。[0114]方法与用途[0115]在进一步的方面，提供了如本文所述的基因构建体，用作药物。进一步提供了如本文所述的表达载体，用作药物。进一步提供了如本文所述的药物组合物，用作药物。还提供了如本文所述的基因构建体，用于治疗和/或预防神经炎症、神经变性和/或认知下降、或与其相关的疾病或病症。进一步提供了如本文所述的表达载体，用于治疗和/或预防神经炎症、神经变性和/或认知下降、或与其相关的疾病或病症。进一步提供了如本文所述的药物组合物，用于治疗和/或预防神经炎症、神经变性和/或认知下降、或与其相关的疾病或病症。[0116]因此，在一些实施方案中，如本文所述的基因构建体和/或如本文所述的表达载体和/或如本文所述的药物组合物用于治疗和/或预防神经炎症。在一些实施方案中，如本文所述的基因构建体和/或如本文所述的表达载体和/或如本文所述的药物组合物用于治疗和/或预防神经变性。在一些实施方案中，如本文所述的基因构建体和/或如本文所述的表达载体和/或如本文所述的药物组合物用于治疗和/或预防认知下降。在本发明的上下文中，“神经炎症”、“神经变性”和“认知下降”可以分别替换为“神经炎症或其相关的疾病或病症”、“神经变性或其相关的疾病或病症”和“认知下降或与其相关的疾病或病症”。[0117]在一些实施方案中，与神经炎症、神经变性和/或认知下降相关的疾病或病症可以是认知障碍、痴呆、阿尔茨海默氏病、血管性痴呆、路易体痴呆、额颞叶痴呆(ftd)、帕金森病、帕金森样疾病、帕金森综合征、亨廷顿氏病、创伤性脑损伤、朊病毒病、由于hiv感染引起的痴呆/神经认知问题、由于衰老引起的痴呆/神经认知问题、tau蛋白病、多发性硬化症和其他神经炎症/神经退行性疾病。在优选的实施方案中，与神经炎症、神经变性和/或认知下降相关的疾病或病症可以是阿尔茨海默氏病、帕金森病和/或帕金森样疾病，优选阿尔茨海默氏病和/或帕金森病。[0118]因此，如本文所述的基因构建体和/或如本文所述的表达载体和/或如本文所述的药物组合物可被视为抗神经炎症药物、抗神经变性药物和/或抗认知下降药物。因此，它也可以被视为一种抗衰老药物。[0119]本文公开的实施方案还可用于治疗和/或预防与任何前述病症相关的神经炎症、神经变性和/或认知下降。[0120]在一些实施方案中，如本文所述使用的基因构建体和/或使用的表达载体和/或使用的药物组合物涉及基因构建体在cns，优选在脑中的表达。[0121]优选地，根据一些实施方案，如本文所述使用的基因构建体和/或使用的表达载体和/或使用的药物组合物通过csf内施用来施用。[0122]在另一方面，提供了治疗方法，包括施用如本文所述的基因构建体、表达载体或药物组合物。优选地，治疗方法用于治疗和/或预防神经炎症、神经变性和/或认知下降，或与其相关的疾病或病症。在一些实施方案中，施用基因构建体、表达载体或药物组合物是指向有需要的受试者施用治疗有效量的基因构建体、表达载体或药物组合物。[0123]在另一方面，提供了如本文所述的基因构建体、表达载体或药物组合物用于制造药物的用途。优选地，在一些实施方案中，所述药物用于治疗和/或预防神经炎症、神经变性和/或认知下降、或与其相关的疾病或病症。[0124]在另一方面，提供了如本文所述的基因构建体、表达载体或药物组合物用于医疗的用途。优选地，在一些实施方案中，所述医疗是治疗和/或预防神经炎症、神经变性和/或认知下降、或与其相关的疾病或病症。[0125]在另一方面，提供了用于改善受试者的记忆和/或学习的方法，该方法包括向受试者施用如本文所述的基因构建体和/或如本文所述的表达载体和/或如本文所述的组合物。在优选的实施方案中，施用有效量的基因构建体、表达载体或组合物。如本文所使用的，“有效量”是足以发挥有益或期望结果的量。在优选的实施方案中，待治疗的受试者是老年受试者和/或被诊断患有代谢紊乱或疾病，优选肥胖症和/或糖尿病的受试者。在一些实施方案中，记忆可以是再认记忆和/或回忆记忆，优选地再认记忆。在一些实施方案中，记忆可以是感觉记忆；短期和/或长期记忆，优选短期记忆和/或长期记忆。在一些实施方案中，记忆可以是内隐(或程序)和/或外显(或陈述性)记忆。在优选实施方案中，记忆也可以是空间记忆。在一些实施方案中，学习可以是空间学习。对不同类型记忆的进一步描述包含在标题为“基本信息”的章节中。[0126]在根据本发明使用的基因构建体、使用的表达载体、使用的组合物、方法和用途的优选实施方案中，待治疗的受试者是老年受试者和/或被诊断患有代谢紊乱或疾病的的受试者。换言之，在一些实施方案中，根据本发明使用的基因构建体、使用的表达载体、使用的组合物、方法和用途、神经炎症、神经变性和/或认知下降、或其相关的疾病或病症，是与衰老和/或代谢紊乱或疾病相关和/或由其引起。也可包括代谢紊乱或疾病的并发症。[0127]如本文所用，老年受试者可优选指50岁或以上、优选55岁或以上、更优选60岁或以上且最优选65岁或以上的受试者。[0128]在根据本发明使用的基因构建体、使用的表达载体、使用的组合物、方法和用途的其他实施方案中，待治疗的受试者不是老年受试者和/或是为50岁或以下、45岁或以下、40岁或以下、35岁或以下、30岁或以下、25岁或以下的受试者。[0129]在根据本发明使用的基因构建体、使用的表达载体、使用的组合物、方法和用途的其他实施方案中，待治疗的受试者是未诊断出患有代谢紊乱或疾病的受试者。换言之，在根据本发明使用的基因构建体、使用的表达载体、使用的组合物、方法和用途的一些实施方案中，中枢神经系统紊乱或疾病、或与其相关的病症，是与衰老和/或代谢紊乱或疾病无关和/或不是由其引起。[0130]代谢紊乱和疾病可能包括代谢综合征，糖尿病，肥胖症，肥胖相关共病症，糖尿病相关共病症，高血糖症，胰岛素抵抗，葡萄糖耐受不良，脂肪肝，酒精性肝病(ald)，非酒精性脂肪肝病(nafld)，非?酒精性脂肪性肝炎(nash)，冠心病(chd)，高脂血症，动脉粥样硬化，内分泌病变，骨少肌性肥胖综合征(oso)，糖尿病肾病，慢性肾病(ckd)，心脏肥大，糖尿病性视网膜病，糖尿病性肾病，糖尿病神经病变，关节炎，败血症，眼部新血管形成，神经变性，痴呆，也可能包括抑郁症，腺瘤，癌。糖尿病可包括前驱糖尿病，高血糖症，1型糖尿病，2型糖尿病，青年成熟期发作糖尿病(mody)，单基因糖尿病，新生儿糖尿病，妊娠糖尿病，脆型糖尿病，特发性糖尿病，药物或化学诱导的糖尿病，僵人综合征，脂肪萎缩性糖尿病，成人潜伏性自身免疫性糖尿病(lada)。肥胖可包括超重，中/上身肥胖，外周/下身肥胖，病态肥胖，骨少肌性肥胖综合症(oso)，小儿肥胖，孟德尔(单基因)综合征，孟德尔非综合征性肥胖，多基因肥胖。优选的代谢紊乱或疾病是肥胖症和/或糖尿病。[0131]在根据本发明使用的基因构建体、使用的表达载体、使用的组合物、方法和用途的一些实施方案中，待治疗的受试者是处于患神经炎症、神经变性和/或认知下降，或与其相关的疾病或病症的风险的受试者。[0132]在根据本发明使用的基因构建体、使用的表达载体、使用的药物组合物、方法和用途的上下文中，疗法和/或治疗和/或药物可涉及基因构建体在cns中，优选在脑中表达。在一些实施方案中，在除cns和/或脑之外的其他组织中没有可检测的表达。在一些实施方案中，基因构建体在脑中的表达可以意指基因构建体在下丘脑和/或皮质和/或海马和/或小脑和/或嗅球中的表达。因此，基因构建体在脑中的表达可以意指基因构建体在选自由下丘脑、皮质、海马、小脑和嗅球组成的组的至少一个或至少两个或至少三个或所有脑区域中的表达。在一些实施方案中，在cns和/或脑中的表达可以指在cns和/或脑中的特异性表达。在实施方案中，在肝脏、胰腺、脂肪组织、骨骼肌、心脏、肾脏、结肠、造血组织、肺、卵巢、脾脏、胃和/或睾丸中检测不到表达。在优选的实施方案中，在肝脏和/或心脏中检测不到表达。在另一个优选的实施方案中，在骨骼肌中检测不到表达。在一些实施方案中，表达不涉及在选自由肝脏、胰腺、脂肪组织、骨骼肌、心脏、肾脏、结肠、造血组织、肺、卵巢、脾脏、胃、睾丸组成的组的至少一个，至少两个，至少三个，至少四个或所有器官中的表达。在标题为“基本信息”章节提供了cns和/或脑特异性表达的描述。[0133]如在标题为“基本信息”章节所述，可以使用诸如qpcr、蛋白质印迹分析或elisa等技术评估表达。在标题为“基本信息”章节提供了“cns”、“脑”、“下丘脑”、“海马”、“小脑”、“皮质”和“嗅球”的描述。[0134]在根据本发明使用的基因构建体、使用的表达载体、使用的药物组合物、方法和用途的上下文中，可以通过csf(脑脊液)内施用施用(通过小脑延髓池，鞘内或心室内递送)基因构建体和/或表达载体和/或药物组合物。优选的施用方式，任选地优选的人类施用方式是心室内。[0135]在根据本发明使用的基因构建体、使用的表达载体、使用的药物组合物、方法和用途的上下文中，可以通过实质内施用施用基因构建体和/或表达载体和/或药物组合物。[0136]在根据本发明使用的基因构建体、使用的表达载体、使用的药物组合物、方法和用途的上下文中，可以通过鼻内施用施用基因构建体和/或表达载体和/或药物组合物和/或药物。[0137]如本文所使用的，在本技术的标题“基本信息”部分描述了“csf内施用”、“鼻内施用”、“实质内施用”、“小脑延髓池内施用”、“鞘内施用”和“心室内施用”。[0138]在优选的实施方案中，不必重复本文所述药物的治疗或疗法或用途或施用。在一些实施方案中，本文所述的药物的治疗或疗法或用途或施用可以每年或每2、3、4、5、6、7、8、9或10年重复，包括任意两个列出的值之间的间隔。[0139]被治疗的受试者可以是高等哺乳动物，例如猫，啮齿动物(优选小鼠，大鼠，沙鼠和豚鼠，更优选小鼠和大鼠)，狗或人。[0140]在根据本发明使用的基因构建体、使用的表达载体、使用的药物组合物、方法和用途的上下文中，如本文所述的基因构建体和/或表达载体和/或药物组合物和/或药物优选表现出以下中的至少一种、至少两种、至少三种、至少四种或全部：[0141]?减少神经炎症；[0142]?增加神经发生；[0143]?增加星形胶质细胞的数量；[0144]?减少神经变性；[0145]?缓解症状(如本文后面所述)；和[0146]?改进参数(如本文后面所述)。[0147]减少神经炎症可能意味着减少神经组织的炎症。这可以使用本领域技术人员已知的技术来评估，例如(神经)炎症标志物的测量，例如在实验部分中所做的。可以在这方面使用的示例性标志物是il?1b、il?6和nfkb。在这种情况下，“减少”(分别是“改善”)是指使用本领域技术人员已知的测定法，例如在实验部分中进行的测定，至少可检测到的减少(分别是可检测的改善)。减少可以是至少5％，至少10％，至少20％，至少30％，至少40％，至少50％，至少60％，至少70％，至少80％，至少90％或至少100％的减少。在使用本发明的基因构建体和/或表达载体和/或组合物进行至少一周、一个月、六个月、一年或更长时间的治疗后，可以看到减少。优选地，在单次施用后观察到减少。在一些实施方案中，在至少一周、一个月、六个月、1年、2年、3年、4年、5年、6年、7年、8年、9年、10年、12年、15年、20年或更长时间的持续时间，优选在单次施用后观察到减少。[0148]增加神经发生可意味着神经元是由神经干细胞产生的。这可以使用本领域技术人员已知的技术来评估，例如神经发生标志物的测量，例如在实验部分中所做的。可以在这方面使用的示例性标志物是dcx、ncam和sox2。在这种上下文下，“增加”(分别是“改善”)是指使用本领域技术人员已知的测定法，例如在实验部分中进行的测定，至少可检测到的增加(分别是可检测的改善)。减少可以是至少5％，至少10％，至少20％，至少30％，至少40％，至少50％，至少60％，至少70％，至少80％，至少90％或至少100％的减少。在使用本发明的基因构建体和/或表达载体和/或组合物进行至少一周、一个月、六个月、一年或更长时间的治疗后，可以看到增加。优选地，在单次施用后观察到增加。在一些实施方案中，在至少一周、一个月、六个月、1年、2年、3年、4年、5年、6年、7年、8年、9年、10年、12年、15年、20年或更长时间的持续时间，优选在单次施用后观察到增加。[0149]增加星形胶质细胞的数量可能意味着星形胶质细胞的数量增加。这可以使用本领域技术人员已知的技术来评估，例如星形胶质细胞标志物的测量，例如在实验部分中所做的。可以在这方面使用的示例性标志物是gfap和s100b。在这种情况下，“增加”(分别是“改善”)是指使用本领域技术人员已知的测定法，例如在实验部分中进行的测定，至少可检测到的增加(分别是可检测的改善)。减少可以是至少5％，至少10％，至少20％，至少30％，至少40％，至少50％，至少60％，至少70％，至少80％，至少90％或至少100％的减少。在使用本发明的基因构建体和/或表达载体和/或组合物进行至少一周、一个月、六个月、一年或更长时间的治疗后，可以看到增加。优选地，在单次施用后观察到增加。在一些实施方案中，在至少一周、一个月、六个月、1年、2年、3年、4年、5年、6年、7年、8年、9年、10年、12年、15年、20年或更长时间的持续时间后，优选在单次施用后观察到增加。[0150]减少神经变性可能意味着减少神经元结构或功能的丧失，包括减少神经元的死亡。这可以使用本领域技术人员已知的技术例如免疫细胞化学、免疫组织化学、通过医学成像技术例如mri、研究神经元形态学和突触变性(通过测量位于突触中的蛋白质的密度)或通过分析几种衰老和神经变性标志物的表达水平来评估。在这种情况下，“减少”(分别是“改善”)是指使用本领域技术人员已知的测定法，例如在实验部分中进行的测定，至少可检测到的减少(分别是可检测的改善)。减少可以是至少5％，至少10％，至少20％，至少30％，至少40％，至少50％，至少60％，至少70％，至少80％，至少90％或至少100％的减少。在使用本发明的基因构建体和/或表达载体和/或组合物进行至少一周、一个月、六个月、一年或更长时间的治疗后，可以看到增加。优选地，在单次施用后观察到增加。在一些实施方案中，在至少一周、一个月、六个月、1年、2年、3年、4年、5年、6年、7年、8年、9年、10年、12年、15年、20年或更长时间的持续时间，优选在单次施用后观察到增加。[0151]减轻症状可能意味着典型症状(例如神经炎症、神经变性、认知下降、记忆力减退、学习能力下降、突触丧失、tau磷酸化)在由医师评估的个体、所述个体的细胞、组织或器官中的进展已经减慢。典型症状的减轻可能意味着症状发展进展减慢或症状完全消失。可以使用多种方法来评估症状，以及症状的减轻，这些方法在很大程度上与诊断神经炎症、神经变性、认知下降以及与其相关的疾病所使用的方法相同，包括临床检查和常规实验室检查。临床检查可包括行为测试和认知测试。实验室检查包括宏观和微观方法、分子方法、射线照相方法如x射线、生化方法、免疫组织化学方法和其他方法。记忆和学习可以在小鼠中进行评估，例如如实验部分所述，例如通过新的物体识别测试和/或莫里斯水迷宫测试。在使用本发明的基因构建体和/或表达载体和/或组合物进行至少一周、一个月、六个月、一年或更长时间的治疗后，可以看到症状的减轻。优选地，在单次施用后观察到减轻。在一些实施方案中，在至少一周、一个月、六个月、1年、2年、3年、4年、5年、6年、7年、8年、9年、10年、12年、15年、20年或更长时间的持续时间，优选在单次施用后观察到减轻。[0152]改善参数可能意味着改善行为测试后的结果，改善血清和csf标志物的表达、改善细胞凋亡/神经发生细胞标志物的表达等。使用本发明的基因构建体和/或表达载体和/或组合物进行至少一周、一个月、六个月、一年或更长时间的治疗后可以看到参数的改善。优选地，在单次施用后观察到改善。在一些实施方案中，在至少一周、一个月、六个月、1年、2年、3年、4年、5年、6年、7年、8年、9年、10年、12年、15年、20年或更长时间的持续时间，优选在单次施用后观察到改善。[0153]在根据本发明使用的基因构建体、使用的表达载体、使用的药物组合物、方法和用途的上下文中，本文所述的基因构建体和/或表达载体和/或药物组合物优选减轻个体、所述个体的细胞、组织或器官中神经炎症、神经变性和/或认知障碍、或与其相关的疾病的一种或多种症状，或减轻所述个体的细胞、组织或器官的一种或多种特征或症状。[0154]如本文所述，如果使用本发明的基因构建体和/或表达载体和/或组合物进行至少一周、一个月、六个月、一年或更长时间的治疗后，所述症状或特征已减少(例如不再可检测或减慢)，如本文所述的基因构建体和/或表达载体和/或药物组合物优选地能够减轻患者或所述患者的细胞、组织或器官的症状或特征。[0155]如本文所述的基因构建体和/或表达载体和/或药物组合物和/或药物可以适合于施用至受神经炎症、神经变性和/或认知障碍、或与其相关的疾病的影响或具有患神经炎症、神经变性和/或认知障碍、或与其相关的疾病的风险的个体体内的细胞、组织和/或器官，并且可以体内、离体或体外施用。可以将所述基因构建体和/或表达载体和/或药物组合物和/或药物直接或间接地施用于受神经炎症、神经变性和/或认知障碍、或与其相关的疾病的影响或具有患神经炎症、神经变性和/或认知障碍、或与其相关的疾病的风险的个体体内的细胞、组织和/或器官，并且可以在体内、离体或体外直接或间接施用。[0156]施用方式可以是静脉内，肌内，鞘内，心室内，腹膜内，通过吸入，鼻内，眼内和/或实质内施用。优选的施用方式是鼻内，实质内和csf内(通过小脑延髓池，鞘内或心室内递送)施用。最优选csf内施用。优选的施用方式，任选地优选的人类施用方式是心室内。[0157]本发明的基因构建体和/或表达载体和/或组合物和/或药物可以使用本领域已知的合适方法直接或间接施用。考虑到迄今为止已经实现的进展，可以预期向个体或所述个体的细胞、组织、器官提供本发明的基因构建体和/或表达载体和/或组合物和/或药物的方式的改进。当然，可以结合这种未来的改进以实现本发明的上述效果。基因构建体和/或表达载体和/或组合物和/或药物可以递送至个体，所述个体的细胞、组织或器官。取决于疾病或病症，所述个体的细胞、组织或器官可以如本文先前所述。当施用本发明的基因构建体和/或表达载体和/或组合物和/或药物时，优选这样的基因构建体和/或表达载体和/或组合物和/或药物是溶解在与递送方法兼容的溶液中。[0158]如本文所涵盖的，治疗有效剂量的如上所述的基因构建体和/或表达载体和/或组合物优选以单一且独特的剂量施用，从而避免了重复的定期施用。[0159]基本信息[0160]除非另有说明，否则本文中使用的所有技术和科学术语具有与本发明所属领域的普通技术人员惯常和通常理解的含义相同的含义，并且鉴于本公开而阅读。[0161]序列同一性/相似性[0162]在本发明的上下文中，核酸分子例如编码胰岛素的核酸分子由编码蛋白质片段或多肽或肽或衍生肽的核苷酸序列表示。在本发明的上下文中，胰岛素蛋白片段或多肽或肽或衍生肽由氨基酸序列表示。[0163]将理解的是，本文中通过给定的序列同一性编号(seq id no:)鉴定的每个核酸分子或蛋白质片段或多肽或肽或衍生的肽或构建体不限于所公开的该特定序列。本文所鉴定的每个编码序列编码给定的蛋白质片段或多肽或肽或衍生的肽或构建体，或者其本身是蛋白质片段或多肽或构建体或肽或衍生的肽。在本技术全文中，每次指代编码给定蛋白质片段或多肽或肽或衍生肽的特定核苷酸序列seq id no(以seq id no:x为例)，都可以用以下代替：[0164]i.核苷酸序列，其包含与seq id no:x具有至少60％序列同一性的核苷酸序列；[0165]ii.核苷酸序列，其序列由于遗传密码的简并性而与(i)的核酸分子的序列不同；或[0166]iii.核苷酸序列，其编码与由核苷酸序列seq id no:x编码的氨基酸序列具有至少60％的氨基酸同一性或相似性的氨基酸序列。[0167]另一个优选的序列同一性或相似性水平是70％。另一个优选的序列同一性或相似性水平是80％。另一个优选的序列同一性或相似性水平是90％。另一个优选的序列同一性或相似性水平是95％。另一个优选的序列同一性或相似性水平是99％。[0168]在本技术全文中，每次提及特定的氨基酸序列seq id no(以seq idno:y为例)，都可以用以下代替：多肽，其包含与氨基酸序列seq id no:y具有至少60％序列同一性或相似性的氨基酸序列。另一个优选的序列同一性或相似性水平是70％。另一个优选的序列同一性或相似性水平是80％。另一个优选的序列同一性或相似性水平是90％。另一个优选的序列同一性或相似性水平是95％。另一个优选的序列同一性或相似性水平是99％。[0169]在进一步优选的实施方式中，借助于其与给定核苷酸序列或氨基酸序列的同一性或相似性百分比，本文描述的每个核苷酸序列或氨基酸序列分别与给定核苷酸或氨基酸序列具有至少60％，至少61％，至少62％，至少63％，至少64％，至少65％，至少66％，至少67％，至少68％，至少69％，至少70％，至少71％，至少72％，至少73％，至少74％，至少75％，至少76％，至少77％，至少78％，至少79％，至少80％，至少81％，至少82％，至少83％，至少84％，至少85％，至少86％，至少87％，至少88％，至少89％，至少90％，至少91％，至少92％，至少93％，至少94％，至少95％，至少96％，至少97％，至少98％，至少99％或100％的同一性或相似性。[0170]每个非编码核苷酸序列(即启动子或另一个调控区的)可以被如下核苷酸序列取代，所述核苷酸序列包含与特定核苷酸序列seq id no(取seq id no:a为例)具有至少60％的序列同一性或相似性的核苷酸序列。优选的核苷酸序列与seq id no:a具有至少60％，至少61％，至少62％，至少63％，至少64％，至少65％，至少66％，至少67％，至少68％，至少69％，至少70％，至少71％，至少72％，至少73％，至少74％，至少75％，至少76％，至少77％，至少78％，至少79％，至少80％，至少81％，至少82％，至少83％，至少84％，至少85％，至少86％，至少87％，至少88％，至少89％，至少90％，至少91％，至少92％，至少93％，至少94％，至少95％，至少96％，至少97％，至少98％，至少99％或100％的同一性。在优选的实施方案中，如本领域技术人员已知的，此类非编码核苷酸序列例如启动子表现出或发挥至少这种非编码核苷酸序列的活性例如启动子的活性。例如，这种活性是诱导与启动子可操作地连接的核苷酸序列例如胰岛素编码序列的可检测的表达。[0171]术语“同源性”，“序列同一性”，“同一性”等在本文可互换使用。序列同一性在本文中描述为通过比较序列确定的两个或更多个氨基酸序列(肽或多肽或蛋白质)或两个或更多个核酸序列(多核苷酸)之间的关系。两个氨基酸序列之间的“相似性”或“序列相似性”是通过将一个多肽的氨基酸序列及其保守氨基酸取代物与第二个多肽的序列进行比较来确定的。可以通过已知方法容易地计算“同一性”和“相似性”，包括但不限于bioinformatics and the cell:modern computational approaches in genomics,proteomics and transcriptomics,xia x.,springer international publishing,new york,2018；和bioinformatics:sequence and genome analysis,mount d.,cold spring harbor laboratory press,new york,2004中描述的那些。[0172]可以根据两个给定seq id no的全长或其部分来计算序列同一性或相似性。在一些实施方案中，其部分是指两个seq id no的至少50％，60％，70％，80％，90％，95％或100％。在优选的实施方案中，通过比较本文鉴定的序列的全长来确定序列同一性或相似性。除非本文另外指出，与给定seq id no的同一性或相似性是指基于所述序列的全长(即，在其整个长度或整体上)的同一性或相似性。在本领域中，“同一性”还指氨基酸或核酸序列之间的序列相关性程度，如这通过这种序列的串的之间的匹配确定。[0173]取决于两个序列的长度，可以使用全局或局部比对算法通过两个肽或两个核苷酸序列的比对来确定序列同一性或相似性。优选使用全局比对算法(例如，needleman?wunsch)对相似长度的序列进行比对，所述全球比对算法在整个长度上最佳地比对序列，而优选地，使用局部比对算法(例如，smith?waterman)对基本上不同长度的序列进行比对。当序列(例如，使用默认参数通过程序emboss needle或emboss water进行最佳比对)共享至少某最小百分比的序列同一性或相似性(如下面所描述的)时，序列被称为“大体上相同”或“实质上相似”。[0174]当两个序列具有相似的长度时，全局比对适合用于确定序列同一性或相似性。当序列的总体长度大体不同时，优选局部比对(例如使用smith?waterman算法的比对)。emboss needle使用needleman?wunsch全局比对算法在两个序列的整个长度(全长)上进行比对，使得匹配数最大且空位数最小。emboss water使用smith?waterman局部比对算法。通常，可以使用emboss needle和emboss water默认参数，空位开放罚分＝10(核苷酸序列)/10(蛋白质)，空位延伸罚分＝0.5(核苷酸序列)/0.5(蛋白质)。对于核苷酸序列，使用的默认评分矩阵是dnafull，而对于蛋白质，默认评分矩阵是blosum62(henikoff&henikoff，1992，pnas 89，915?919)。[0175]或者，可以通过搜索公共数据库，使用诸如fasta、blast等算法来确定百分比相似性或同一性。也可以使用同源基因(https://en.wikipedia.org/wiki/homologene)，优选不修改默认参数。因此，本发明的一些实施方案的核苷酸和氨基酸序列可以进一步用作“查询序列”以对公共数据库进行搜索以例如识别其他家族成员或相关序列。可以使用altschul,et al.(1990)j.mol.biol.215:403?10的blastn和blastx程序(2.0版)执行此类搜索。blast核苷酸搜索可以用nblast程序进行，评分＝100，字长＝12，以获得与本发明的核酸分子优选编码胰岛素的核酸分子同源的核苷酸序列。blast蛋白质搜索可以用blastx程序进行，评分＝50，字长＝3，以获得与本发明的蛋白质分子同源的氨基酸序列。为了获得用于比较目的的空位比对，可以如altschul等，(1997)nucleicacids res.25(17):3389?3402中所述使用空位blast。当使用blast和gapped blast程序时，可以使用各个程序的默认参数(例如blastx和blastn)。请访问国家生物技术信息中心的主页，该主页可从以下万维网网址访问：www.ncbi.nlm.nih.gov/。[0176]任选地，在确定氨基酸相似度时，本领域技术人员还可以考虑所谓的保守氨基酸取代。[0177]如本文所使用的，“保守”氨基酸取代是指具有相似侧链的残基的互换性。下文示出了用于保守取代的氨基酸残基类别的实例。[0178][0179]备选的保守氨基酸残基取代类别如下：[0180][0181][0182]氨基酸残基的备选物理和功能分类：[0183][0184]例如，具有脂族侧链的一组氨基酸是甘氨酸、丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸和异亮氨酸；具有脂肪族羟基侧链的一组氨基酸是丝氨酸和苏氨酸；具有酰胺基侧链的一组氨基酸是天冬酰胺和谷氨酰胺；具有芳族侧链的一组氨基酸是苯丙氨酸、酪氨酸和色氨酸；具有碱性侧链的一组氨基酸是赖氨酸、精氨酸和组氨酸；和具有含硫侧链的一组氨基酸是半胱氨酸和甲硫氨酸。优选的保守氨基酸取代基是：缬氨酸?亮氨酸?异亮氨酸，苯丙氨酸?酪氨酸，赖氨酸?精氨酸，丙氨酸?缬氨酸和天冬酰胺?谷氨酰胺。本文公开的氨基酸序列的取代变体是其中公开的序列中的至少一个残基已被去除并且在其位置插入了不同残基的那些。优选地，氨基酸变化是保守的。每个天然存在的氨基酸的优选的保守取代如下：ala取代为ser；arg取代为lys；asn取代为gln或his；asp取代为glu；cys取代为ser或ala；gln取代为asn；glu取代为asp；gly取代为pro；his取代为asn或gln；ile取代为leu或val；leu取代为ile或val；lys取代为arg；gln或glu；met取代为leu或ile；phe取代为met、leu或tyr；ser取代为thr；thr取代为ser；trp取代为tyr；tyr取代为trp或phe；和val取代为ile或leu。[0185]基因或编码序列[0186]“基因”是dna或rna中的核苷酸序列，其编码具有功能的分子。核苷酸序列可以包括“非编码序列”以及“编码序列”。“基因”的编码区，也称为cds(来自编码序列)，是基因dna或rna中编码蛋白质的部分。非编码序列的实例是启动子和microrna靶序列，如本文别处所述。术语“基因”是指包含区域(转录区域)的dna片段，该区域在细胞中被转录成rna分子(例如mrna)，并与合适的调控区域(例如启动子)可操作地连接。基因通常将包含几个可操作地连接的片段，例如启动子，5'前导序列，编码区和3'非翻译序列(3'末端)，例如包含聚腺苷酸化和/或转录终止位点。嵌合或重组基因(例如嵌合或重组胰岛素基因)是通常在自然界中未发现的基因，例如其中启动子本质上不与部分或全部转录的dna区域缔合的基因。“基因的表达”是指这样的过程，其中将与适当的调节区特别是启动子可操作地连接的dna区域转录成具有生物学活性的rna，即能够被翻译成生物活性蛋白质或肽。[0187]“转基因”在本文中被描述由为新引入细胞中的核苷酸序列表示的基因或编码序列或核酸分子(即编码胰岛素的分子)，即可能存在但通常在细胞中不表达或表达水平不足的基因。在本文中，“不足”是指尽管所述胰岛素在细胞中表达，但仍可发展如本文所述的病症和/或疾病。在这种情况下，本发明允许胰岛素的过表达。转基因可包括细胞的天然的序列，天然不会发生在细胞中的序列，并且它可以包括两者的组合。转基因可以含有编码胰岛素和/或额外的蛋白质的序列，如本文早期所鉴定的，其可以与适当的调控序列可操作地连接，用于在细胞中表达编码胰岛素的序列。优选地，转基因未整合到宿主细胞的基因组中。[0188]启动子[0189]如本文所使用的，术语“启动子”或“转录调控序列”是指用于控制一个或多个编码序列的转录的核酸片段，并且位于编码序列的转录起始位点的转录方向上游，通过存在dna依赖性rna聚合酶的结合位点、转录起始位点和任何其他dna序列的结构鉴定，包括但不限于转录因子结合位点，阻遏物和活化蛋白结合位点，以及本领域技术人员已知的任何其他核苷酸序列，用于直接或间接地调控启动子的转录量。“组成型”启动子是在大多数生理和发育条件下在大多数组织中有活性的启动子。“诱导型”启动子是一种在生理学或发育学上受调控的启动子，例如，通过应用化学诱导剂。[0190]“遍在启动子”在基本上生物体的所有组织、器官和细胞中有活性。在一些实施方案中，遍在启动子在至少5、6、7、8、9、10种或更多种不同类型的组织、器官和/或细胞中驱动表达。[0191]“器官特异性”或“组织特异性”启动子是分别在特定类型的器官或组织中有活性的启动子。器官特异性和组织特异性启动子主要在一个器官或组织中调节一种或多种基因(或编码序列)的表达，但也可以在其他器官或组织中允许可检测的水平(“泄漏”)表达。如通过本领域技术人员已知的标准测定(例如qpcr，蛋白质印迹分析，elisa)对mrna或蛋白质的水平所评估的，其他器官或组织中的泄漏表达意味着，与器官特异性或组织特异性表达相比，低至少一倍，至少两倍，至少三倍，至少四倍，至少五倍，至少六倍，至少七倍，至少八倍，至少九倍或至少十倍，但仍然是可检测的表达。可以检测到泄漏表达的器官或组织的最大数量是五个，六个，七个或八个。[0192]“cns和/或脑特异性启动子”是能够在cns和/或脑中启动转录的启动子，同时仍然允许在身体的其它(最多五，六，七或八个)器官和部位中的任何泄漏表达。cns和/或脑中的转录可以在相关区域中检测，例如cns和/或脑和/或下丘脑和/或皮质和/或海马和/或小脑和/或嗅球，以及细胞，例如神经元和/或神经胶质细胞。[0193]在本发明的上下文中，cns和/或脑特异性启动子可以是与其他器官或组织相比，能够驱动胰岛素优选或主要(至少高10％，至少高20％，至少高30％，至少高40％，至少高50％，至少高60％，至少高70％，至少高80％，至少高90％，至少高100％，至少高为150％，至少高200％或更高)在cns和/或脑中表达的启动子。其他器官或组织可以是肝脏、胰腺、脂肪组织、骨骼肌、心脏、肾脏、结肠、造血组织、肺、卵巢、脾脏、胃、睾丸等。优选地，其他器官是肝脏和/或心脏。其他器官也可能是骨骼肌。如本文所使用的，cns和/或脑特异性启动子还涵盖引导在cns和/或脑的特定区域或细胞亚群中表达的启动子。因此，cns?和/或脑特异性启动子也可以选自海马特异性启动子、小脑特异性启动子、皮质特异性启动子、下丘脑特异性启动子和/或嗅球特异性启动子，或其任何组合。如在标题为“基本信息”章节所述，可以使用诸如qpcr、蛋白质印迹分析或e